Cytotoxické T-lymfocyty specifické pro alogenní viry (CTL) s nejblíže HLA (CHALLAH)

Pacienti mohou být vyšetřeni pro vstup do studie, pokud mají přetrvávající onemocnění navzdory standardní terapii, jak je definováno v kritériích pro zařazení. V této fázi bude provedeno vyhledávání dostupných linek. Linie byly vytvořeny od dárců HSCT, kteří souhlasili s použitím CTL, které jejich příjemce nevyžadoval pro výzkum, nebo od normálních dárců. Všichni dárci byli vyšetřeni a považováni za způsobilé jako dárce transplantací. Vyrobíme také další řady s cílem pokrýt běžné typy HLA a budeme konzultovat s NMDP, abychom určili, jaké typy HLA by byly žádoucí. Další dárci budou vyšetřeni lékařem transplantačního centra a musí být uznáni za způsobilé, než bude možné vyrobit řadu.

CTL linie: Použijeme CTL linie specifické pro triviry vytvořené tak, jak bylo popsáno výše. Generování trivirus-specifických CTL linií vyžaduje vytvoření několika různých složek z PBMC. CTL linie bude odvozena z dárcovských T buněk periferní krve, vícenásobnou stimulací buňkami prezentujícími antigen (APC) prezentujícími CMV, EBV a adenovirové antigeny a expanzí interleukinem-2 (IL-2). APC použité ke stimulaci a expanzi CMV-specifických T-buněk budou odvozeny z mononukleárních buněk a B lymfocytů pacienta.

Pro iniciaci trivirově specifické CTL linie budou PBMC transdukovány adenovirovým vektorem (Ad5f35-pp65) exprimujícím imunodominantní antigen CMV, pp65. Monocytová frakce PBMC exprimovala a prezentovala CMV-pp65 peptidové epitopy CMV-specifické T buněčné frakci PBMC, zatímco virionové proteiny z adenovirového vektoru byly zpracovány a prezentovány adenovirově specifické T buněčné frakci.

Pro expanzi trivirově specifických T buněk jsme použili EBV-transformované B lymfoblastoidní buněčné linie (EBV-LCL) transdukované Ad5f35-pp65. Tato transdukce umožňuje EBV-LCL prezentovat CMV-pp65 a adenovirové virionové peptidy T buňkám, stejně jako endogenně exprimované EBV antigeny.

EBV-LCL jsou odvozeny z PBMC-B lymfocytů infekcí laboratorním kmenem viru Epstein-Barr (EBV) klinického stupně. K vytvoření EBV-LCL je zapotřebí asi 5 x 10^6 PBMC nebo 5 až 10 ml krve

Na konci období kultivace CTL byla určena frekvence T buněk specifických pro každý virus za použití tetramerových činidel, pokud byla dostupná. K testování funkční antigenní specificity CTL použijeme překrývající se peptidové knihovny pro pp65 a adenovirový hexon a autologní a alogenní LCL v testech Elispot a provedeme testy cytotoxicity s použitím nemodifikovaných PHA blastů a LCL netransdukovaných nebo transdukovaných Adhexon a CMVpp65 LCL pepmix OR transdukované Ad5f35-null a Ad5f35-pp65. Některé linie budou mít alikvoty zaslané k další charakterizaci do NIH, kde Dr. Melenhorst a Barrett vyvíjejí testy pro predikci aloreaktivity, kde zkoumají T buňky specifické pro virový antigen pomocí rozsáhlého panelu aktivovaných T buněk jako buněk prezentujících antigen (T-APC). Tyto řádky budou označeny pouze číslem součásti a nebudou mít identifikátory subjektu.

CTL linie budou také zkontrolovány na identitu, fenotyp a sterilitu a před podáním budou kryokonzervovány podle SOP. Kritéria uvolňování pro podávání CTL pacientům zahrnují životaschopnost >70 %, negativní kultivace na bakterie a plísně po dobu alespoň 7 dnů, testování endotoxinů menší nebo rovné 5 EU/ml, negativní výsledek na mykoplazmata, <2 % CD19 pozitivních B buněk, <2 % CD14 pozitivních monocytů (nebo <2 % CD83 pozitivních buněk, pokud byly jako stimulátory použity dendritické buňky) a identita HLA.

Není k dispozici žádná odpovídající linie CTL: Pokud není k dispozici žádná odpovídající linie, pacient bude zaregistrován, aby bylo možné posoudit proveditelnost přístupu a shromáždit se také případný výsledek.

Linka CTL je k dispozici, ale stav pacienta se mění: Klinický průběh pacientů se změnami mezi screeningem a infuzí nebude podán CTL a bude sledován případný výsledek.

Údaje o přežití budou shromažďovány tak, že transplantační centrum požádá o předložení rutinního formuláře nezbytných údajů o transplantaci, který je zasílán do databáze výsledků transplantace kmenových buněk po 100 dnech a 1 roce a obsahuje údaje o stavu přežití a další ukazatele výsledků.

Kritéria pro výběr CTL linie: Obecně bude vybrána linie odpovídající nejvyššímu počtu HLA lokusů. Shoda na úrovni alely bude preferována, ale bude přijata hladina antigenu nebo HLA-A a HLA-B. Bude však také věnována pozornost typu infekce a aktivitě linie proti tomuto viru. Například pro pacienta s adenovirovou infekcí by byla výhodnější linie, která odpovídá na 2 lokusech, ale která rozpoznává adenovirus zprostředkovaný těmito antigeny, než linie odpovídající 3 lokusům, ale bez prokázané aktivity proti adenoviru. Předseda protokolu prodiskutuje každý případ s hlavními zkoušejícími v každém centru, aby určil optimální linii CTL pro každého pacienta. Pokud se shoduje více než jedna linie a není dostatek buněk k pokrytí dalších infuzí, bude rezervována druhá linie CTL v případě, že jsou opodstatněné další infuze. Pacienti s částečnou odpovědí jsou způsobilí k podání další dávky.

Premedikace: Pacienti budou premedikováni Benadrylem 1 mg/kg (max. 50 mg) IV a Tylenolem 10 mg/kg (max. 650 mg) PO.

Pacienti budou sledováni podle ústavních standardů pro podávání krevních produktů a minimálně budou sledováni podle níže uvedeného: • Pacienti by měli zůstat na klinice alespoň jednu hodinu • Pacienti by měli zůstat na kontinuální pulzní oxymetrii alespoň 30 minut • Vitální funkce by měly být monitorovány na konci infuze a poté po 30 a 60 minutách

Podpůrná péče: Pacientům bude poskytnuta podpůrná péče pro akutní nebo chronickou toxicitu, včetně krevních složek nebo antibiotik, a případně další intervence.

Pokud má pacient částečnou odpověď, může dostat až 4 další dávky v minimálně 2týdenních intervalech a pokud splní kritéria způsobilosti pro následující linie. Tyto dávky by pocházely z původní infuzní linie, pokud by bylo k dispozici dostatečné množství lahviček, ale mohou pocházet z jiné linie, pokud v původní linii není dostatek buněk.

Následná hodnocení: Načasování následných návštěv je založeno na datu infuze CTL. Pokud má pacient více dávek CTL, plán se na začátku znovu resetuje, takže sledování se vztahuje k poslední dávce CTL.

Sledování proběhne za 7 dní, 14 dní, 21 dní, 28 dní, 42 dní, 90 dní, 180 dní a 365 dní (+/- 2 dny do 8. týdne a +/- 14 dní pro 90. dny, 120 a +/- 28 dní po dobu 6 a 12 měsíců, po registraci..)

Následující hodnocení jsou považována za standardní péči, pokud nejsou níže označena „ * “:

Před infuzí: 1. Anamnéza a fyzické vyšetření včetně výšky a hmotnosti 2. Virové zátěže na EBV, adenovirus, CMV 3. Bioptické místo onemocnění, pokud je to vhodné 4. Zobrazovací studie, pokud je to vhodné 5. Kompletní informace o stádiu akutní GVHD a klasifikaci včetně hodnocení vyrážky, průjmu, nevolnosti/zvracení, hmotnosti a jaterních testů 6. CBC s diferenciálem, počet krevních destiček 7. Testy jaterních funkcí (bilirubin, alkalická fosfatáza, AST, ALT) plus kreatinin 8. Hladina takrolimu/cyklosporinu 9. * Vzorky pro laboratorní studie

Po infuzi: 1. Virové zátěže pro CMV, EBV, adenovirus týdně v 1., 2., 3., 4. a 6. týdnu a 3., 6. a 12. měsíci. 2. Kompletní informace o stádiu a klasifikaci akutní GVHD včetně hodnocení vyrážky, průjmu, nevolnosti/zvracení, hmotnosti a jaterních funkčních testů týdně do 45. dne 3. Chronické hodnocení GVHD (pokud je přítomno) 3, 6, 9 a 12 měsíců 4. CBC s diferenciálem a počtem krevních destiček v 1., 2., 3., 4. a 6. týdnu. 5. Toxicita související s infuzí do 24 hodin a hodnocení toxicity týdně do 30. dne a akutní GVHD do 45. dne 6. Dávka steroidů týdně do 42. dne a 3., 6. a 9. měsíce 7. *Vzorky pro laboratorní studie ve dnech 0, 14, 28 a 90 8. Infekce do 42. dne a ve 3, 6 a 12 měsících

Doplňkové laboratorní studie budou zahrnovat: 1) Hodnocení virově specifické imunity založené na hladinách CTL, jak je měřeno testy ELISPOT nebo tetramerovými testy. 2) Perzistence infundovaných T buněk na základě PCR pro nesdílený antigen

Hlášení úmrtí pacienta: Informace o úmrtí příjemce musí být zadány do webového systému zadávání dat do 24 hodin od zjištění úmrtí pacienta. Není-li příčina smrti v té době známa, nemusí být v té době zaznamenána. Jakmile je však zjištěna příčina smrti, je nutné formulář aktualizovat.

Hodnocení dárce: - Kompletní anamnéza a fyzikální vyšetření - CBC, trombocyty, diferenciál - Celková bílkovina, albumin, celkový bilirubin, alkalická fosfatáza, ALT, AST, - protilátka HIV-1, protilátka HIV-2, HIV NAT, HTLV-1/2 protilátky, HBsantigen, HBc protilátka, HCV NAT, CMV protilátka, RPR, test NAT na západonilský virus a Chagas – ABO a Rh typizace – Po dokončení hodnocení transplantační lékař zaznamená do lékařských záznamů příjemce a dárce, že testy byly vyhodnoceny a dárce je přijatelný.