Lähinnä HLA-vastaavat allogeeniset virusspesifiset sytotoksiset T-lymfosyytit (CTL) (CHALLAH)

Potilaat voidaan seuloa tutkimukseen pääsyä varten, jos heillä on jatkuva sairaus huolimatta sisällyttämiskriteereissä määritellystä tavanomaisesta hoidosta. Tässä vaiheessa tehdään haku käytettävissä olevista riveistä. Linjat luotiin HSCT-luovuttajilta, jotka suostuivat sellaisten CTL:ien käyttöön, joita ei vaadittu vastaanottajalta tutkimukseen, tai normaaleista luovuttajista. Kaikki luovuttajat seulottiin ja katsottiin kelpoisiksi elinsiirtoluovuttajiksi. Valmistamme myös lisälinjoja, joiden tavoitteena on kattaa yleiset HLA-tyypit, ja neuvottelemme NMDP:n kanssa määrittääksemme, mitkä HLA-tyypit olisivat toivottavia. Siirteenluovuttajakeskuksen lääkäri seuloa muut luovuttajat, ja heidän on katsottava kelpoisiksi ennen kuin linja voidaan valmistaa.

CTL-linjat: Käytämme trivirusspesifisiä CTL-linjoja, jotka on luotu aiemmin kuvatulla tavalla. Trivirusspesifisten CTL-linjojen luominen edellyttää useiden eri komponenttien generoimista PBMC:stä. CTL-linja johdetaan luovuttajan perifeerisen veren T-soluista useilla stimulaatioilla antigeeniä esittelevillä soluilla (APC), jotka esittelevät CMV-, EBV- ja adenovirusantigeenejä, ja laajentamalla interleukiini-2:lla (IL-2). APC:t, joita käytetään stimuloimaan ja laajentamaan CMV-spesifisiä T-soluja, johdetaan potilaan mononukleaarisista soluista ja B-lymfosyyteistä.

Trivirusspesifisen CTL-linjan aloittamiseksi PBMC transdusoidaan adenovirusvektorilla (Ad5f35-pp65), joka ilmentää CMV:n immunodominanttia antigeeniä pp65. PBMC:n monosyyttifraktio ekspressoi ja esitteli CMV-pp65-peptidiepitooppeja PBMC:n CMV-spesifiselle T-solufraktiolle, kun taas adenovirusvektorin virioniproteiinit prosessoitiin ja esiteltiin adenovirusspesifiselle T-solufraktiolle.

Trivirusspesifisten T-solujen laajentamiseen käytimme EBV-transformoituja B-lymfoblastoidisolulinjoja (EBV-LCL), jotka oli transdusoitu Ad5f35-pp65:llä. Tämä transduktio sallii EBV-LCL:ien esitellä CMV-pp65- ja adenovirusvirionipeptidejä T-soluille sekä endogeenisesti ekspressoituneita EBV-antigeenejä.

EBV-LCL:t ovat peräisin PBMC-B-lymfosyyteistä infektoimalla kliinisen Epstein-Barr-viruksen (EBV) laboratoriokannan kanssa. EBV-LCL:n muodostamiseen tarvitaan noin 5 x 10^6 PBMC tai 5-10 ml verta

CTL-viljelyjakson lopussa kullekin virukselle spesifisten T-solujen esiintymistiheys määritettiin käyttämällä tetrameerireagensseja, jos niitä oli saatavilla. CTL:n toiminnallisen antigeenispesifisyyden testaamiseksi käytämme päällekkäisiä peptidikirjastoja pp65:lle ja adenoviruksen heksonille sekä autologisille ja allogeenisille LCL:ille Elispot-määrityksissä ja suoritamme sytotoksisuusmäärityksiä käyttäen modifioimattomia PHA-blasteja ja LCL:itä, jotka ovat transdusoimattomia tai LCL-soluja, jotka on transdusoitu Adhexonilla ja CMVxpp655:llä. muunnetaan Ad5f35-null:lla ja Ad5f35-pp65:llä. Joistakin linjoista lähetetään alikvootteja lisäkarakterisointia varten NIH:lle, jossa tohtori Melenhorst ja Barrett kehittävät määrityksiä alloreaktiivisuuden ennustamiseksi, jossa he tutkivat virusantigeenispesifisiä T-soluja käyttämällä laajaa aktivoitujen T-solujen paneelia antigeeniä esittelevinä soluina (T-APC). Nämä rivit merkitään vain komponenttinumerolla, eikä niillä ole aihetunnisteita.

CTL-linjojen identiteetti, fenotyyppi ja steriiliys tarkistetaan, ja ne kylmäsäilytetään ennen antamista SOP:n mukaisesti. Vapautumiskriteereitä CTL:n antamiseksi potilaille ovat elinkelpoisuus > 70 %, negatiivinen viljelmä bakteereille ja sienille vähintään 7 päivän ajan, endotoksiinitestaus alle tai yhtä suuri kuin 5EU/ml, negatiivinen tulos mykoplasmalle, <2 % CD19-positiivisia B-soluja, <2 % CD14-positiivisia monosyyttejä (tai <2 % CD83-positiivisia soluja, jos dendriittisoluja käytettiin stimulaattoreina) ja HLA-identiteetti.

Vastaavaa CTL-linjaa ei ole saatavilla: Jos vastaavaa linjaa ei ole saatavilla, potilas rekisteröidään, jotta lähestymistavan toteutettavuus voidaan arvioida ja myös mahdollinen lopputulos kerätään.

CTL-linja saatavilla, mutta potilaan tila muuttuu: Potilaille, jotka vaihtelevat seulonnan ja infuusion välillä, ei anneta CTL:ää, vaan niitä seurataan mahdollisen tuloksen selvittämiseksi.

Eloonjäämistiedot kerätään pyytämällä elinsiirtokeskusta toimittamaan tavanomainen Transplant Essential Data -lomake, joka lähetetään kantasolusiirtojen tulostietokantaan 100 päivän ja vuoden kuluttua ja joka sisältää tiedot eloonjäämistilasta ja muista tulosmittauksista.

CTL-linjan valintakriteerit: Yleensä valitaan linjasovitus suurimmalla määrällä HLA-lokuksia. Vastaavuus alleelitasolla on edullinen, mutta antigeenitaso hyväksytään tai HLA-A ja HLA-B. Kuitenkin myös infektiotyyppi ja linjan aktiivisuus kyseistä virusta vastaan ​​otetaan huomioon. Esimerkiksi potilaalle, jolla on adenovirusinfektio, linja, joka sopii yhteen kahdessa lokuksessa, mutta jossa on noiden antigeenien välittämän adenoviruksen tunnistus, olisi parempi kuin linja, joka vastaa 3 lokusta, mutta jolla ei ole osoitettua aktiivisuutta adenovirusta vastaan. Protokollajohtaja keskustelee kustakin tapauksesta kunkin keskuksen päätutkijoiden kanssa määrittääkseen kullekin potilaalle optimaalisen CTL-linjan. Jos useampi kuin yksi rivi täsmää ja soluja ei ole riittävästi kattamaan lisäinfuusioita, varataan toinen CTL-linja siltä varalta, että lisäinfuusiot ovat perusteltuja. Potilaat, joilla on osittainen vaste, voivat saada lisäannoksen.

Esilääkitys: Potilaille annetaan esilääkitys Benadrylilla 1 mg/kg (max 50 mg) IV ja Tylenolilla 10 mg/kg (enintään 650 mg) PO.

Potilaita seurataan laitosten verivalmisteiden antamista koskevien standardien mukaisesti ja vähintään seuraavien ohjeiden mukaisesti: • Potilaiden tulee olla klinikalla vähintään tunnin ajan. • Potilaiden tulee olla jatkuvassa pulssioksimetriassa vähintään 30 minuutin ajan. Elintoimintoja tulee seurata infuusion lopussa ja 30 ja 60 minuutin kohdalla

Tukihoito: Potilaat saavat tukihoitoa akuutin tai kroonisen toksisuuden varalta, mukaan lukien veren komponentit tai antibiootit, ja muita toimenpiteitä tarvittaessa.

Jos potilaalla on osittainen vaste, hän on oikeutettu saamaan enintään 4 lisäannosta vähintään 2 viikon välein ja jos he täyttävät kelpoisuusvaatimukset seuraaville linjoille. Nämä annokset tulisivat alkuperäisestä infuusiolinjasta, jos saatavilla olisi riittävästi injektiopulloja, mutta ne voivat tulla toisesta linjasta, jos alkuperäisessä linjassa ei ole riittävästi soluja.

Seuranta-arvioinnit: Seurantakäyntien ajoitus perustuu CTL-infuusion päivämäärään. Jos potilaalla on useita CTL-annoksia, aikataulu nollautuu uudelleen alussa, joten seuranta koskee viimeistä CTL-annosta.

Seuranta tapahtuu 7 päivän, 14 päivän, 21 päivän, 28 päivän, 42 päivän, 90 päivän, 180 päivän ja 365 päivän kuluttua (+/- 2 päivää viikkoon 8 asti ja +/- 14 päivää päivien 90 kohdalla, 120 ja +/- 28 päivää 6 ja 12 kuukaudelle, ilmoittautumisen jälkeen..)

Seuraavia arvioita pidetään hoidon standardeina, ellei alla ole merkitty " * ":

Ennen infuusiota: 1. Historia ja fyysinen tutkimus, mukaan lukien pituus ja paino 2. Viruskuormitus EBV:n, adenoviruksen, CMV:n varalta 3. Biopsian sairauskohta tarvittaessa 4. Kuvantamistutkimukset tarvittaessa 5. Täydelliset akuutin GVHD-vaiheen ja luokitustiedot, mukaan lukien arvioinnit ihottuma, ripuli, pahoinvointi/oksentelu, paino- ja maksan toimintakokeet 6. CBC erolla, verihiutaleiden määrä 7. Maksan toimintakokeet (bilirubiini, alkalinen fosfataasi, AST, ALT) plus kreatiniini 8. Takrolimuusi/siklosporiinitaso 9. * Näytteitä laboratoriotutkimukset

Infuusion jälkeinen: 1. CMV:n, EBV:n, adenoviruksen viruskuormitukset viikoittain 1, 2, 3, 4 ja 6 viikon ja 3, 6 ja 12 kuukauden kohdalla. 2. Täydelliset akuutin GVHD-vaiheen ja luokitustiedot, mukaan lukien arvioinnit ihottumasta, ripulista, pahoinvointia/oksentelua, painon ja maksan toimintakokeista viikoittain päivään 45 asti 3. Kroonisen GVHD-arviointi (jos olemassa) 3, 6, 9 ja 12 kuukautta 4. CBC ero ja verihiutaleiden määrä 1, 2, 3, 4 ja 6 viikon kohdalla. 5. Infuusioon liittyvät toksisuudet 24 tunnin sisällä ja toksisuuden arviointi viikoittain päivään 30 asti ja akuutti GVHD päivään 45 asti 6. Steroidiannos viikoittain päivään 42 saakka ja 3, 6 ja 9 kuukautta 7. * Näytteet laboratoriotutkimuksiin päivinä 0, 14, 28 ja 90 8. Infektiot päivään 42 ja 3, 6 ja 12 kuukauden iässä

Apulaboratoriotutkimukset sisältävät: 1) Virusspesifisen immuniteetin arvioinnin CTL-tasojen perusteella mitattuna ELISPOT-määrityksillä tai tetrameerimäärityksillä. 2) Infusoitujen T-solujen pysyvyys ei-jaetun antigeenin PCR:n perusteella

Potilaskuolemien ilmoittaminen: Vastaanottajan kuolemantiedot on syötettävä verkkopohjaiseen tiedonsyöttöjärjestelmään 24 tunnin kuluessa potilaan kuolemasta. Jos kuolinsyy ei ole tuolloin tiedossa, sitä ei tarvitse tuolloin kirjata. Kun kuolinsyy on selvitetty, lomake on kuitenkin päivitettävä.

Luovuttajan arviointi: - Täydellinen historia ja fyysinen tutkimus - CBC, verihiutaleet, ero - Kokonaisproteiini, albumiini, kokonaisbilirubiini, alkalinen fosfataasi, ALT, AST, - HIV-1-vasta-aine, HIV-2-vasta-aine, HIV NAT, HTLV-1/2 vasta-aineet, HBsantigeeni, HBc-vasta-aine, HCV NAT, CMV-vasta-aine, RPR, Länsi-Niilin viruksen NAT ja Chagas-testaus - ABO- ja Rh-tyypitys - Kun arviointi on valmis, siirtolääkäri merkitsee vastaanottajan ja luovuttajan potilastietoihin, että testit on arvioitu ja luovuttaja on hyväksyttävä.