Mest tætte HLA-matchede allogene virusspecifikke cytotoksiske T-lymfocytter (CTL) (CHALLAH)

Patienter kan blive screenet for undersøgelsesindtræden, når de har vedvarende sygdom på trods af standardbehandling som defineret i inklusionskriterierne. På det tidspunkt vil der blive foretaget en søgning af de tilgængelige linjer. Linjer blev genereret fra HSCT-donorer, der gav samtykke til brugen af ​​CTL'er, der ikke var nødvendige for deres modtager til forskning, eller fra normale donorer. Alle donorer blev screenet og anset for at være kvalificerede som transplantationsdonorer. Vi vil også fremstille yderligere linjer med det mål at dække almindelige HLA-typer og vil rådføre os med NMDP for at bestemme, hvilke HLA-typer der ville være ønskelige. Yderligere donorer vil blive screenet af en transplantationsdonorcenterlæge og skal anses for kvalificerede, før en linje kan fremstilles.

CTL-linjer: Vi vil bruge trivirus-specifikke CTL-linjer genereret som beskrevet tidligere. Generering af trivirus-specifikke CTL-linjer kræver generering af flere forskellige komponenter fra PBMC. CTL-linjen vil blive afledt af donor-T-celler fra perifert blod ved multiple stimuleringer med antigen-præsenterende celler (APC'er), der præsenterer CMV-, EBV- og adenovirus-antigener og ekspansion med interleukin-2 (IL-2). APC'erne, der bruges til at stimulere og udvide de CMV-specifikke T-celler, vil være afledt af patientens mononukleære celler og B-lymfocytter.

For at initiere den trivirus-specifikke CTL-linje vil PBMC blive transduceret med en adenovirusvektor (Ad5f35-pp65), der udtrykker det immundominante antigen af ​​CMV, pp65. Monocytfraktionen af ​​PBMC udtrykte og præsenterede CMV-pp65-peptidepitoper for den CMV-specifikke T-cellefraktion af PBMC'et, mens virionproteinerne fra adenovirusvektoren blev behandlet og præsenteret for den adenovirusspecifikke T-cellefraktion.

For at udvide trivirus-specifikke T-celler brugte vi EBV-transformerede B-lymfoblastoide cellelinjer (EBV-LCL'er) transduceret med Ad5f35-pp65. Denne transduktion gør det muligt for EBV-LCL'erne at præsentere CMV-pp65 og adenovirus virion-peptider til T-cellerne såvel som endogent udtrykte EBV-antigener.

EBV-LCL'er er afledt af PBMC-B-lymfocytter ved infektion med en laboratoriestamme af Epstein-Barr-virus (EBV) af klinisk kvalitet. Omkring 5 x 10^6 PBMC eller 5 til 10 ml blod er påkrævet for at generere EBV-LCL

Ved afslutningen af ​​CTL-dyrkningsperioden blev frekvensen af ​​T-celler, der er specifikke for hver virus, bestemt ved anvendelse af tetramerreagenser, hvis de var tilgængelige. For at teste den funktionelle antigenspecificitet af CTL vil vi bruge overlappende peptidbiblioteker for pp65 og adenovirus hexon og autologe og allogene LCL'er i Elispot-assays, og vi vil udføre cytotoksicitetsassays ved hjælp af umodificerede PHA-blaster og LCL'er utransduceret eller transduceret med Adhexon og CMVppOR65 transduceret med Ad5f35-null og Ad5f35-pp65. Nogle linjer vil have alikvoter sendt til yderligere karakterisering til NIH, hvor Drs. Melenhorst og Barrett udvikler assays til at forudsige alloreaktivitet, hvor de undersøger virusantigenspecifikke T-celler ved hjælp af et omfattende panel af aktiverede T-celler som antigenpræsenterende celler (T-APC). Disse linjer vil kun være mærket med komponentnummer og vil ikke have emneidentifikatorer.

CTL-linjerne vil også blive kontrolleret for identitet, fænotype og sterilitet og kryokonserveret før administration i henhold til SOP. Frigivelseskriterier for administration af CTL til patienter omfatter levedygtighed >70 %, negativ kultur for bakterier og svampe i mindst 7 dage, endotoksintest mindre end eller lig med 5EU/ml, negativt resultat for Mycoplasma, <2 % CD19 positive B-celler, <2% CD14 positive monocytter (eller <2% CD83 positive celler, hvis dendritiske celler blev brugt som stimulatorer) og HLA identitet.

Ingen matchet CTL-linje tilgængelig: Hvis ingen matchet linje er tilgængelig, vil patienten blive registreret, så gennemførligheden af ​​tilgangen kan vurderes, og det endelige resultat vil også blive indsamlet.

CTL-linje tilgængelig, men patientstatusændringer: Patienters kliniske forløb, der skifter mellem screening og infusion, vil ikke blive givet CTL og vil blive fulgt for endeligt resultat.

Overlevelsesdata vil blive indsamlet ved at bede transplantationscentret om at indsende den rutinemæssige Transplant Essential Data-formular, der sendes til stamcelletransplantationsresultatdatabasen efter 100 dage og 1 år og inkluderer data om overlevelsesstatus og andre udfaldsmål.

Kriterier for udvælgelse af CTL-linje: Generelt vil linjematchningen ved det højeste antal HLA-loci blive valgt. Matchning på allelniveau vil være at foretrække, men antigenniveau vil blive accepteret eller HLA-A og HLA-B. Der vil dog også blive taget hensyn til typen af ​​infektion og aktiviteten af ​​linjen mod denne virus. For eksempel for en patient med adenovirusinfektion ville en linje, der matcher ved 2 loci, men som har genkendelse af adenovirus medieret gennem disse antigener, være at foretrække frem for en linje matchet ved 3 loci, men uden påvist aktivitet mod adenovirus. Protokollederen vil diskutere hvert enkelt tilfælde med de primære efterforskere på hvert center for at bestemme den optimale CTL-linje for hver patient. Hvis mere end én linje matcher, og der ikke er tilstrækkelige celler til at dække yderligere infusioner, vil en anden CTL-linje blive reserveret i tilfælde af, at yderligere infusioner er berettiget. Patienter med delvis respons er berettiget til at modtage en yderligere dosis.

Præmedicinering: Patienterne vil blive præmedicineret med Benadryl 1 mg/kg (maks. 50 mg) IV og Tylenol 10 mg/kg (maks. 650 mg) PO.

Patienterne vil blive overvåget i henhold til institutionelle standarder for administration af blodprodukter og vil som minimum blive overvåget i henhold til nedenfor: • Patienterne skal forblive i klinikken i mindst en time • Patienterne skal forblive på kontinuerlig pulsoximetri i mindst 30 minutter • Vitale tegn bør overvåges ved afslutningen af ​​infusionen og derefter efter 30 og 60 minutter

Støttende pleje: Patienter vil modtage støttende pleje for akut eller kronisk toksicitet, herunder blodkomponenter eller antibiotika, og anden indgriben efter behov.

Hvis en patient har et delvist respons, er de berettiget til at modtage op til 4 yderligere doser med mindst 2 ugers intervaller, og hvis de opfylder berettigelseskriterierne for efterfølgende linjer. Disse doser ville komme fra den originale infunderede linje, hvis der var tilstrækkelige hætteglas til rådighed, men kan komme fra en anden linje, hvis der ikke er tilstrækkelige celler i den originale linje.

Opfølgningsvurderinger: Tidspunktet for opfølgningsbesøg er baseret på datoen for CTL-infusion. Hvis en patient har flere CTL-doser, nulstilles skemaet igen i begyndelsen, så opfølgningen vedrører den sidste CTL-dosis.

Opfølgning vil finde sted efter 7 dage, 14 dage, 21 dage, 28 dage, 42 dage, 90 dage, 180 dage og 365 dage (+/- 2 dage op til uge 8 og +/- 14 dage for dag 90, 120,- og +/- 28 dage i 6 og 12 måneder, efter tilmelding..)

Følgende vurderinger betragtes som standardbehandling, medmindre de er identificeret nedenfor med " * ":

Præ-infusion: 1. Anamnese og fysisk undersøgelse inklusive højde og vægt 2. Viral belastning for EBV, adenovirus, CMV 3. Biopsisygdomssted, hvis det er relevant 4. Billeddiagnostiske undersøgelser, hvis det er relevant 5. Fuldfør akut GVHD stadieinddeling og klassificeringsinformation inklusive vurderinger af udslæt, diarré, kvalme/opkastning, vægt- og leverfunktionstest 6. CBC med differential, trombocyttal 7. Leverfunktionstest (bilirubin, alkalisk fosfatase, AST, ALT) plus kreatinin 8. Tacrolimus/cyclosporin niveau 9. * Prøver vedr. laboratorieundersøgelser

Post-infusion: 1. Viral belastning for CMV, EBV, adenovirus ugentligt efter 1, 2, 3, 4 og 6 uger og 3, 6 og 12 måneder. 2. Fuldfør akut GVHD stadieinddeling og graderingsinformation, herunder vurderinger af udslæt, diarré, kvalme/opkastning, vægt og leverfunktionstest ugentligt indtil dag 45 3. Kronisk GVHD evaluering (hvis til stede) 3, 6, 9 og 12 måneder 4. CBC med differential- og trombocyttal ved 1, 2, 3, 4 og 6 uger. 5. Infusionsrelaterede toksiciteter inden for 24 timer og toksicitetsevaluering ugentlig indtil dag 30 og akut GVHD indtil dag 45 6. Steroiddosis ugentlig indtil dag 42, og 3, 6 og 9 måneder 7. * Prøver til laboratorieundersøgelser på dag 0, 14, 28 og 90 8. Infektioner til og med dag 42 og efter 3, 6 og 12 måneder

Supplerende laboratorieundersøgelser vil omfatte: 1) Vurdering af virusspecifik immunitet baseret på CTL-niveauer målt ved ELISPOT-assays eller tetramerassays. 2) Persistens af infunderede T-celler baseret på PCR for ikke-delt antigen

Indberetning af patientdødsfald: Oplysningerne om modtagerens dødsfald skal indtastes i det webbaserede dataindtastningssystem inden for 24 timer efter kendskab til en patients død. Hvis dødsårsagen er ukendt på det tidspunkt, skal den ikke registreres på det tidspunkt. Men når dødsårsagen er fastlagt, skal formularen opdateres.

Donorvurdering: - Komplet anamnese og fysisk undersøgelse - CBC, blodplader, differential - Total protein, albumin, total bilirubin, alkalisk fosfatase, ALT, AST, - HIV-1 antistof, HIV-2 antistof, HIV NAT, HTLV-1/2 antistoffer, HBsantigen, HBc antistof, HCV NAT, CMV antistof, RPR, West Nile virus NAT og Chagas test - ABO og Rh typing - Når evalueringen er afsluttet, vil transplantationslægen notere i modtagerens og donorens journaler, at testene er blevet evalueret, og donoren er acceptabel.