HLA와 가장 근접하게 일치하는 동종이계 바이러스 특이적 세포독성 T-림프구(CTL) (CHALLAH)

환자는 포함 기준에 정의된 표준 요법에도 불구하고 지속적인 질병이 있는 경우 연구 등록을 위해 선별될 수 있습니다. 이 단계에서 사용 가능한 라인에 대한 검색이 수행됩니다. 연구를 위해 수혜자에게 필요하지 않은 CTL 사용에 동의한 HSCT 기증자 또는 일반 기증자로부터 라인이 생성되었습니다. 모든 기증자를 선별하여 이식 기증자로 적격한 것으로 간주했습니다. 우리는 또한 일반적인 HLA 유형을 다루는 것을 목표로 추가 라인을 제조할 것이며 어떤 HLA 유형이 바람직한지 결정하기 위해 NMDP와 협의할 것입니다. 추가 기증자는 이식 기증자 센터 의사에 의해 선별되며 라인을 제조하기 전에 적격한 것으로 간주되어야 합니다.

CTL 라인: 앞에서 설명한 대로 생성된 트리바이러스 특정 CTL 라인을 사용합니다. 트리바이러스 특정 CTL 라인을 생성하려면 PBMC에서 여러 가지 구성 요소를 생성해야 합니다. CTL 라인은 CMV, EBV 및 아데노바이러스 항원을 제시하는 항원 제시 세포(APC)로 여러 번 자극하고 인터루킨-2(IL-2)로 확장함으로써 기증자 말초 혈액 T 세포에서 파생될 것입니다. CMV 특정 T 세포를 자극하고 확장하는 데 사용되는 APC는 환자의 단핵 세포와 B 림프구에서 파생됩니다.

트리바이러스 특이적 CTL 라인을 개시하기 위해, PBMC는 CMV의 면역우성 항원인 pp65를 발현하는 아데노바이러스 벡터(Ad5f35-pp65)로 형질도입될 것이다. PBMC의 단핵구 분획은 PBMC의 CMV 특이적 T 세포 분획에 CMV-pp65 펩티드 에피토프를 발현 및 제시하는 한편, 아데노바이러스 벡터로부터의 비리온 단백질은 처리되어 아데노바이러스 특이적 T 세포 분획에 제시되었다.

트리바이러스-특이적 T 세포를 확장하기 위해 Ad5f35-pp65로 형질도입된 EBV-형질전환된 B 림프모구 세포주(EBV-LCL)를 사용했습니다. 이러한 형질도입은 EBV-LCL이 CMV-pp65 및 아데노바이러스 비리온 펩티드를 T 세포뿐만 아니라 내인성으로 발현된 EBV 항원에 제시할 수 있게 합니다.

EBV-LCL은 PBMC-B 림프구에서 임상 등급의 실험실용 Epstein-Barr 바이러스(EBV) 균주로 감염되어 파생됩니다. EBV-LCL을 생성하려면 약 5 x 10^6 PBMC 또는 5~10mL의 혈액이 필요합니다.

CTL 배양 기간 종료 시, 각 바이러스에 특이적인 T 세포의 빈도를 가능한 경우 사량체 시약을 사용하여 결정했습니다. CTL의 기능적 항원 특이성을 테스트하기 위해 Elispot 분석에서 pp65 및 아데노바이러스 헥손과 자가 및 동종이계 LCL에 대한 중복 펩티드 라이브러리를 사용하고 Adhexon 및 CMVpp65 pepmix OR LCL로 형질도입되거나 변환되지 않은 변형되지 않은 PHA 모세포 및 LCL을 사용하여 세포독성 분석을 수행합니다. Ad5f35-null 및 Ad5f35-pp65로 변환되었습니다. 일부 라인은 Melenhorst 박사와 Barrett 박사가 항원 제시 세포(T-APC)로 활성화된 T 세포의 광범위한 패널을 사용하여 바이러스 항원 특이적 T 세포를 검사하는 동종 반응성을 예측하기 위한 분석을 개발하고 있는 NIH에 추가 특성화를 위해 분취량을 보낼 것입니다. 이 줄에는 구성 요소 번호만 표시되며 주제 식별자는 없습니다.

CTL 계통은 또한 동일성, 표현형 및 무균성에 대해 확인되고 SOP에 따라 투여 전에 동결 보존됩니다. 환자에게 CTL을 투여하기 위한 출시 기준에는 생존율 >70%, 최소 7일 동안 박테리아 및 진균에 대한 음성 배양, 5EU/ml 이하의 내독소 테스트, 마이코플라스마에 대한 음성 결과, <2% CD19 양성 B 세포, <2% CD14 양성 단핵구(또는 수지상 세포가 자극제로 사용된 경우 <2% CD83 양성 세포) 및 HLA 동일성.

일치하는 CTL 라인 없음: 일치하는 라인이 없는 경우 접근 방식의 타당성을 평가하고 최종 결과도 수집할 수 있도록 환자가 등록됩니다.

CTL 라인을 사용할 수 있지만 환자 상태 변경: 스크리닝과 주입 사이에 변경되는 환자의 임상 과정에는 CTL이 제공되지 않으며 최종 결과에 대해 추적됩니다.

생존 데이터는 100일 및 1년에 줄기 세포 이식 결과 데이터베이스로 전송되는 일상적인 이식 필수 데이터 양식을 제출하도록 이식 센터에 요청하여 수집되며 생존 상태 및 기타 결과 측정에 대한 데이터가 포함됩니다.

CTL 라인 선택 기준: 일반적으로 가장 많은 수의 HLA 유전자좌에서 일치하는 라인이 선택됩니다. 대립 유전자 수준에서의 일치가 선호되지만 항원 수준 또는 HLA-A 및 HLA-B가 허용됩니다. 그러나 감염 유형과 해당 바이러스에 대한 라인의 활동도 고려해야 합니다. 예를 들어, 아데노바이러스 감염 환자의 경우 2개 유전자좌에서 일치하지만 이러한 항원을 통해 매개되는 아데노바이러스를 인식하는 계통이 3개 유전자좌에서 일치하지만 아데노바이러스에 대해 입증된 활성이 없는 계통보다 바람직할 것입니다. 프로토콜 의장은 각 환자에 대한 최적의 CTL 라인을 결정하기 위해 각 센터의 수석 조사관과 각 사례를 논의합니다. 하나 이상의 라인이 일치하고 추가 주입을 처리하기에 세포가 충분하지 않은 경우 추가 주입이 필요한 경우 두 번째 CTL 라인이 예약됩니다. 부분 반응이 있는 환자는 추가 용량을 받을 자격이 있습니다.

사전 투약: 환자는 Benadryl 1mg/kg(최대 50mg) IV 및 Tylenol 10mg/kg(최대 650mg) PO로 사전 투약됩니다.

환자는 혈액 제제 투여에 대한 제도적 표준에 따라 모니터링되며 최소한 아래에 따라 모니터링됩니다. • 환자는 최소 1시간 동안 진료소에 있어야 합니다. 활력 징후는 주입 종료 후 30분 및 60분에 모니터링해야 합니다.

지지 요법: 환자는 혈액 성분 또는 항생제 및 기타 적절한 개입을 포함하여 급성 또는 만성 독성에 대한 지지 요법을 받게 됩니다.

환자가 부분 반응을 보이는 경우 최소 2주 간격으로 최대 4회 ​​추가 용량을 받을 수 있으며 후속 라인에 대한 적격성 기준을 충족할 수 있습니다. 이러한 용량은 충분한 바이알을 사용할 수 있는 경우 원래 주입된 라인에서 제공되지만 원래 라인에 세포가 충분하지 않은 경우 다른 라인에서 제공될 수 있습니다.

후속 평가: 후속 방문 시기는 CTL 주입 날짜를 기준으로 합니다. 환자에게 여러 CTL 용량이 있는 경우 일정이 처음에 다시 재설정되므로 후속 조치는 마지막 CTL 용량과 관련됩니다.

후속 조치는 7일, 14일, 21일, 28일, 42일, 90일, 180일 및 365일(8주까지 +/- 2일, 90일에 +/- 14일, 120, 6개월 및 12개월 +/- 28일, 등록 후..)

아래에 " * "로 식별되지 않는 한 다음 평가는 표준 치료로 간주됩니다.

사전 주입: 1. 신장 및 체중을 포함한 병력 및 신체 검사 2. EBV, 아데노바이러스, CMV에 대한 바이러스 부하 3. 해당되는 경우 생검 질병 부위 4. 해당되는 경우 영상 연구 5. 평가를 포함한 전체 급성 GVHD 병기 및 등급 정보 발진, 설사, 메스꺼움/구토, 체중 및 간 기능 검사 6. 감별 CBC, 혈소판 수 7. 간 기능 검사(빌리루빈, 알칼리 포스파타제, AST, ALT) 및 크레아티닌 8. 타크롤리무스/사이클로스포린 수치 9. * 샘플 실험실 연구

주입 후: 1. 1, 2, 3, 4 및 6주 및 3, 6 및 12개월에 매주 CMV, EBV, 아데노바이러스에 대한 바이러스 로드. 2. 45일까지 매주 발진, 설사, 메스꺼움/구토, 체중 및 간 기능 검사의 평가를 포함한 완전한 급성 GVHD 병기 및 등급 정보 3. 만성 GVHD 평가(있는 경우) 3, 6, 9 및 12개월 4. CBC 1, 2, 3, 4, 6주 차에 감별 및 혈소판 수. 5. 24시간 이내의 주입 관련 독성 및 30일까지 매주 독성 평가 및 45일까지 급성 GVHD 6. 42일 및 3, 6 및 9개월까지 매주 스테로이드 용량 7. * 0일, 14일, 28 및 90 8. 42일까지 및 3, 6 및 12개월에 감염

보조 실험실 연구에는 다음이 포함됩니다. 2) 비공유 항원에 대한 PCR 기반 주입된 T 세포의 지속성

환자 사망 보고: 수신자 사망 정보는 환자 사망을 알게 된 후 24시간 이내에 웹 기반 데이터 입력 시스템에 입력해야 합니다. 당시 사망 원인을 알 수 없는 경우에는 기록할 필요가 없습니다. 그러나 일단 사망 원인이 결정되면 양식을 업데이트해야 합니다.

기증자 평가: - 완전한 병력 및 신체 검사 - CBC, 혈소판, 감별 - 총 단백질, 알부민, 총 빌리루빈, 알칼리 포스파타제, ALT, AST, - HIV-1 항체, HIV-2 항체, HIV NAT, HTLV-1/2 항체, HBsantigen, HBc 항체, HCV NAT, CMV 항체, RPR, 웨스트 나일 바이러스 NAT 및 샤가스 검사 - ABO 및 Rh 유형 - 평가가 완료되면 이식 의사는 수혜자와 기증자의 의료 기록에 검사가 평가되었으며 기증자가 허용됩니다.