Lymphocytes T cytotoxiques (CTL) allogéniques spécifiques au virus HLA les plus étroitement appariés (CHALLAH)

Les patients peuvent être dépistés pour entrer dans l'étude lorsqu'ils ont une maladie persistante malgré un traitement standard tel que défini dans les critères d'inclusion. À ce stade, une recherche sera effectuée parmi les lignes disponibles. Des lignées ont été générées à partir de donneurs HSCT qui ont consenti à l'utilisation de CTL non requis pour leur receveur pour la recherche ou à partir de donneurs normaux. Tous les donneurs ont été sélectionnés et jugés éligibles en tant que donneurs de greffe. Nous fabriquerons également des lignes supplémentaires dans le but de couvrir les types HLA courants et consulterons le NMDP pour déterminer quels types HLA seraient souhaitables. Les donneurs supplémentaires seront sélectionnés par un médecin du centre de donneurs de greffe et doivent être jugés éligibles avant qu'une lignée puisse être fabriquée.

Lignées CTL : Nous utiliserons des lignées CTL spécifiques au trivirus générées comme décrit précédemment. La génération de lignées CTL spécifiques au trivirus nécessite la génération de plusieurs composants différents à partir de PBMC. La lignée CTL sera dérivée de cellules T du sang périphérique du donneur, par stimulations multiples avec des cellules présentatrices d'antigène (APC) présentant les antigènes CMV, EBV et adénovirus et expansion avec l'interleukine-2 (IL-2). Les APC utilisées pour stimuler et développer les lymphocytes T spécifiques du CMV seront dérivées de cellules mononucléaires et de lymphocytes B de patients.

Pour initier la lignée CTL spécifique du trivirus, les PBMC seront transduits avec un vecteur adénoviral (Ad5f35-pp65) exprimant l'antigène immunodominant du CMV, pp65. La fraction de monocytes de PBMC a exprimé et présenté des épitopes peptidiques CMV-pp65 à la fraction de lymphocytes T spécifiques au CMV du PBMC, tandis que les protéines de virion du vecteur adénovirus ont été traitées et présentées à la fraction de lymphocytes T spécifique à l'adénovirus.

Pour développer les cellules T spécifiques du trivirus, nous avons utilisé des lignées de cellules lymphoblastoïdes B transformées par EBV (EBV-LCL) transduites avec Ad5f35-pp65. Cette transduction permet aux EBV-LCL de présenter les peptides du virion CMV-pp65 et adénovirus aux lymphocytes T ainsi que les antigènes EBV exprimés de manière endogène.

Les EBV-LCL sont dérivés de lymphocytes PBMC-B par infection avec une souche de laboratoire de qualité clinique du virus d'Epstein-Barr (EBV). Environ 5 x 10 ^ 6 PBMC, ou 5 à 10 mL de sang sont nécessaires pour générer l'EBV-LCL

A la fin de la période de culture des CTL, la fréquence des cellules T spécifiques de chaque virus a été déterminée en utilisant des réactifs tétramères si disponibles. Pour tester la spécificité antigénique fonctionnelle du CTL, nous utiliserons des bibliothèques de peptides qui se chevauchent pour pp65 et l'hexon d'adénovirus et des LCL autologues et allogéniques dans les tests Elispot et nous effectuerons des tests de cytotoxicité en utilisant des blastes PHA non modifiés et des LCL non transduits ou transduits avec Adhexon et CMVpp65 pepmix OR LCL transduit avec Ad5f35-null et Ad5f35-pp65. Certaines lignées auront des aliquotes envoyées pour une caractérisation plus poussée au NIH où les Drs Melenhorst et Barrett développent des tests pour prédire l'alloréactivité où ils examinent les cellules T spécifiques de l'antigène du virus en utilisant un large panel de cellules T activées comme cellules présentatrices d'antigène (T-APC). Ces lignes seront étiquetées avec le numéro de composant uniquement et n'auront pas d'identificateurs de sujet.

Les lignées CTL seront également vérifiées pour l'identité, le phénotype et la stérilité, et cryoconservées avant l'administration selon le SOP. Les critères de libération pour l'administration des CTL aux patients incluent la viabilité > 70 %, une culture négative pour les bactéries et les champignons pendant au moins 7 jours, un test d'endotoxine inférieur ou égal à 5 UE/ml, un résultat négatif pour les mycoplasmes, < 2 % de lymphocytes B CD19 positifs, <2 % de monocytes CD14 positifs (ou <2 % de cellules CD83 positives si des cellules dendritiques ont été utilisées comme stimulateurs) et identité HLA.

Aucune ligne CTL correspondante disponible : si aucune ligne correspondante n'est disponible, le patient sera enregistré afin que la faisabilité de l'approche puisse être évaluée et que le résultat final soit également collecté.

Ligne CTL disponible mais changement de l'état du patient : L'évolution clinique des patients qui change entre le dépistage et la perfusion ne recevra pas le CTL et sera suivie pour le résultat éventuel.

Les données de survie seront recueillies en demandant au centre de transplantation de soumettre le formulaire de routine Transplant Essential Data qui est envoyé à la base de données sur les résultats de la transplantation de cellules souches à 100 jours et 1 an et comprend des données sur l'état de survie et d'autres mesures de résultats.

Critères de sélection de la lignée CTL : En général, la lignée correspondant au plus grand nombre de locus HLA sera sélectionnée. L'appariement au niveau de l'allèle sera préféré mais le niveau d'antigène sera accepté ou HLA-A et HLA-B. Cependant, il sera également tenu compte du type d'infection et de l'activité de la lignée contre ce virus. Par exemple, pour un patient infecté par un adénovirus, une lignée qui correspond à 2 loci mais qui a une reconnaissance de l'adénovirus médiée par ces antigènes serait préférable à une lignée qui correspond à 3 loci mais sans activité démontrée contre l'adénovirus. Le responsable du protocole discutera de chaque cas avec les chercheurs principaux de chaque centre afin de déterminer la ligne CTL optimale pour chaque patient. Si plus d'une ligne correspond et qu'il n'y a pas suffisamment de cellules pour couvrir des perfusions supplémentaires, une deuxième ligne CTL sera réservée au cas où des perfusions supplémentaires seraient justifiées. Les patients avec une réponse partielle sont éligibles pour recevoir une dose supplémentaire.

Prémédications : Les patients recevront une prémédication avec Benadryl 1 mg/kg (max 50 mg) IV et Tylenol 10 mg/kg (max 650 mg) PO.

Les patients seront surveillés conformément aux normes institutionnelles pour l'administration de produits sanguins et au minimum seront surveillés comme suit : • Les patients doivent rester à la clinique pendant au moins une heure • Les patients doivent rester sous oxymétrie de pouls continue pendant au moins 30 minutes • Les signes vitaux doivent être surveillés à la fin de la perfusion puis à 30 et 60 minutes

Soins de soutien : les patients recevront des soins de soutien en cas de toxicité aiguë ou chronique, y compris des composants sanguins ou des antibiotiques, et d'autres interventions, le cas échéant.

Si un patient a une réponse partielle, il est éligible pour recevoir jusqu'à 4 doses supplémentaires à un minimum de 2 semaines d'intervalle et s'il répond aux critères d'éligibilité pour les lignes suivantes. Ces doses proviendraient de la lignée perfusée d'origine si suffisamment de flacons étaient disponibles, mais peuvent provenir d'une autre lignée s'il n'y a pas suffisamment de cellules dans la lignée d'origine.

Évaluations de suivi : Le calendrier des visites de suivi est basé sur la date de perfusion des CTL. Si un patient reçoit plusieurs doses de CTL, le programme se réinitialise au début, de sorte que le suivi se rapporte à la dernière dose de CTL.

Le suivi aura lieu à 7 jours, 14 jours, 21 jours, 28 jours, 42 jours, 90 jours, 180 jours et 365 jours (+/- 2 jours jusqu'à la semaine 8, et +/- 14 jours pour les jours 90, 120, et +/- 28 jours pour 6 et 12 mois, post-inscription..)

Les évaluations suivantes sont considérées comme des normes de soins, sauf si elles sont identifiées ci-dessous par " * ":

Pré-perfusion : 1. Antécédents et examen physique, y compris la taille et le poids 2. Charges virales pour l'EBV, l'adénovirus, le CMV 3. Biopsie du site de la maladie, le cas échéant 4. Études d'imagerie, le cas échéant 5. Informations complètes sur la stadification et le classement de la GVHD aiguë, y compris les évaluations d'éruptions cutanées, de diarrhée, de nausées/vomissements, de poids et de tests de la fonction hépatique 6. NFS avec différentiel, numération plaquettaire 7. Tests de la fonction hépatique (bilirubine, phosphatase alcaline, AST, ALT) plus créatinine 8. Taux de tacrolimus/cyclosporine 9. * Échantillons pour études de laboratoire

Post-perfusion : 1. Charges virales pour CMV, EBV, adénovirus hebdomadaires à 1, 2, 3, 4 et 6 semaines et 3, 6 et 12 mois. 2. Informations complètes sur la stadification et le classement de la GVHD aiguë, y compris les évaluations des éruptions cutanées, de la diarrhée, des nausées/vomissements, du poids et des tests de la fonction hépatique chaque semaine jusqu'au jour 45 3. Évaluation de la GVHD chronique (le cas échéant) 3, 6, 9 et 12 mois 4. NFS avec numération différentielle et plaquettaire à 1, 2, 3, 4 et 6 semaines. 5. Toxicités liées à la perfusion dans les 24 heures et évaluation de la toxicité hebdomadaire jusqu'au jour 30 et GVHD aiguë jusqu'au jour 45 6. Dose de stéroïdes hebdomadaire jusqu'au jour 42, et 3, 6 et 9 mois 7. * Échantillons pour les études de laboratoire aux jours 0, 14, 28 et 90 8. Infections jusqu'au jour 42 et à 3, 6 et 12 mois

Les études de laboratoire auxiliaires comprendront : 1) L'évaluation de l'immunité spécifique au virus basée sur les niveaux de CTL mesurés par des tests ELISPOT ou des tests tétramères. 2) Persistance des lymphocytes T infusés sur la base de la PCR pour l'antigène non partagé

Signalement des décès de patients : les informations sur le décès du destinataire doivent être saisies dans le système de saisie de données en ligne dans les 24 heures suivant la connaissance du décès d'un patient. Si la cause du décès est inconnue à ce moment-là, il n'est pas nécessaire de l'enregistrer à ce moment-là. Cependant, une fois la cause du décès déterminée, le formulaire doit être mis à jour.

Évaluation du donneur : - Antécédents complets et examen physique - NFS, plaquettes, différentiel - Protéines totales, albumine, bilirubine totale, phosphatase alcaline, ALT, AST, - Anticorps VIH-1, Anticorps VIH-2, NAT VIH, HTLV-1/2 anticorps, antigène HBs, anticorps HBc, NAT du VHC, anticorps du CMV, RPR, NAT du virus du Nil occidental et tests de Chagas - Typage ABO et Rh - Une fois l'évaluation terminée, le médecin transplanteur notera dans les dossiers médicaux du receveur et du donneur que les tests ont été évalués et le donneur est acceptable.