Linfociti T citotossici (CTL) specifici del virus allogenico con corrispondenza HLA più stretta (CHALLAH)

I pazienti possono essere sottoposti a screening per l'ingresso nello studio quando hanno una malattia persistente nonostante la terapia standard come definito nei criteri di inclusione. A quel punto verrà effettuata una ricerca delle linee disponibili. Le linee sono state generate da donatori HSCT che hanno acconsentito all'uso di CTL non richiesti per il loro destinatario per la ricerca o da donatori normali. Tutti i donatori sono stati sottoposti a screening e ritenuti idonei come donatori di trapianti. Produrremo anche linee aggiuntive con l'obiettivo di coprire i tipi di HLA comuni e ci consulteremo con l'NMDP per determinare quali tipi di HLA sarebbero desiderabili. Ulteriori donatori saranno sottoposti a screening da un medico del centro donatori di trapianti e dovranno essere ritenuti idonei prima che una linea possa essere prodotta.

Linee CTL: utilizzeremo linee CTL specifiche per trivirus generate come descritto in precedenza. La generazione di linee CTL specifiche per trivirus richiede la generazione di diversi componenti da PBMC. La linea CTL sarà derivata da cellule T del sangue periferico del donatore, mediante stimolazioni multiple con cellule presentanti l'antigene (APC) che presentano antigeni di CMV, EBV e adenovirus ed espansione con interleuchina-2 (IL-2). Le APC utilizzate per stimolare ed espandere le cellule T CMV-specifiche saranno derivate da cellule mononucleate e linfociti B del paziente.

Per avviare la linea CTL specifica per il trivirus, le PBMC saranno trasdotte con un vettore adenovirus (Ad5f35-pp65) che esprime l'antigene immunodominante di CMV, pp65. La frazione di monociti di PBMC esprimeva e presentava epitopi peptidici di CMV-pp65 alla frazione di cellule T specifica per CMV di PBMC, mentre le proteine ​​del virione del vettore adenovirus venivano elaborate e presentate alla frazione di cellule T specifica per adenovirus.

Per espandere le cellule T specifiche del trivirus abbiamo utilizzato linee cellulari linfoblastoidi B trasformate da EBV (EBV-LCL) trasdotte con Ad5f35-pp65. Questa trasduzione consente agli EBV-LCL di presentare CMV-pp65 e peptidi del virione dell'adenovirus alle cellule T, nonché antigeni EBV espressi endogenamente.

Gli EBV-LCL derivano dai linfociti PBMC-B mediante infezione con un ceppo di laboratorio di grado clinico del virus di Epstein-Barr (EBV). Per generare l'EBV-LCL sono necessari circa 5 x 10^6 PBMC o da 5 a 10 ml di sangue

Al termine del periodo di coltura CTL, la frequenza delle cellule T specifiche per ciascun virus è stata determinata utilizzando reagenti tetramerici, se disponibili. Per testare la specificità antigenica funzionale del CTL utilizzeremo librerie di peptidi sovrapposte per pp65 e adenovirus hexon e LCL autologhi e allogenici nei test Elispot ed eseguiremo test di citotossicità utilizzando blasti PHA non modificati e LCL non trasdotti o trasdotti con Adhexon e pepmix CMVpp65 O LCL trasdotta con Ad5f35-null e Ad5f35-pp65. Alcune linee avranno aliquote inviate per un'ulteriore caratterizzazione al NIH dove i dottori Melenhorst e Barrett stanno sviluppando test per prevedere l'alloreattività in cui esaminano le cellule T specifiche dell'antigene del virus utilizzando un ampio pannello di cellule T attivate come cellule presentanti l'antigene (T-APC). Queste righe saranno etichettate solo con il numero del componente e non avranno identificatori del soggetto.

Le linee CTL saranno anche controllate per identità, fenotipo e sterilità e criopreservate prima della somministrazione secondo SOP. I criteri di rilascio per la somministrazione del CTL ai pazienti includono vitalità >70%, coltura negativa per batteri e funghi per almeno 7 giorni, test delle endotossine inferiore o uguale a 5EU/ml, risultato negativo per Mycoplasma, <2% cellule B CD19 positive, <2% di monociti CD14 positivi (o <2% di cellule CD83 positive se le cellule dendritiche sono state utilizzate come stimolatori) e identità HLA.

Nessuna linea CTL corrispondente disponibile: se non è disponibile alcuna linea CTL corrispondente, il paziente verrà registrato in modo da poter valutare la fattibilità dell'approccio e verrà raccolto anche l'esito finale.

Linea CTL disponibile ma modifiche dello stato del paziente: il decorso clinico dei pazienti che cambia tra lo screening e l'infusione non riceverà il CTL e sarà seguito per l'esito finale.

I dati sulla sopravvivenza verranno raccolti chiedendo al centro trapianti di inviare il modulo Dati essenziali del trapianto di routine che viene inviato al Database dei risultati del trapianto di cellule staminali a 100 giorni e 1 anno e include dati sullo stato di sopravvivenza e altre misure di esito.

Criteri per la selezione della linea CTL: in generale verrà selezionata la linea corrispondente al maggior numero di loci HLA. Sarà preferita la corrispondenza a livello di allele ma sarà accettato il livello di antigene o HLA-A e HLA-B. Tuttavia si terrà conto anche del tipo di infezione e dell'attività della linea contro quel virus. Ad esempio, per un paziente con infezione da adenovirus, una linea che corrisponde a 2 loci ma che ha il riconoscimento dell'adenovirus mediato attraverso quegli antigeni sarebbe preferibile a una linea che corrisponde a 3 loci ma senza attività dimostrata contro l'adenovirus. Il presidente del protocollo discuterà ogni caso con i principali ricercatori di ciascun centro per determinare la linea CTL ottimale per ciascun paziente. Se più di una linea corrisponde e non vi sono celle sufficienti per coprire ulteriori infusioni, verrà riservata una seconda linea CTL nel caso in cui siano necessarie ulteriori infusioni. I pazienti con una risposta parziale possono ricevere una dose aggiuntiva.

Premedicazione: i pazienti saranno premedicati con Benadryl 1 mg/kg (max 50 mg) IV e Tylenol 10 mg/kg (max 650 mg) PO.

I pazienti saranno monitorati secondo gli standard istituzionali per la somministrazione di emoderivati ​​e come minimo saranno monitorati secondo quanto segue: • I pazienti devono rimanere in clinica per almeno un'ora • I pazienti devono rimanere in pulsossimetria continua per almeno 30 minuti • I segni vitali devono essere monitorati alla fine dell'infusione, quindi a 30 e 60 minuti

Cure di supporto: i pazienti riceveranno cure di supporto per tossicità acuta o cronica, inclusi componenti del sangue o antibiotici e altri interventi appropriati.

Se un paziente ha una risposta parziale, è idoneo a ricevere fino a 4 dosi aggiuntive a intervalli minimi di 2 settimane e se soddisfa i criteri di idoneità per le linee successive. Queste dosi proverrebbero dalla linea di infusione originale se fossero disponibili fiale sufficienti, ma potrebbero provenire da un'altra linea se non ci sono cellule sufficienti nella linea originale.

Valutazioni di follow-up: la tempistica delle visite di follow-up si basa sulla data dell'infusione del CTL. Se un paziente ha più dosi di CTL, il programma si ripristina nuovamente all'inizio, quindi il follow-up si riferisce all'ultima dose di CTL.

Il follow-up avverrà a 7 giorni, 14 giorni, 21 giorni, 28 giorni, 42 giorni, 90 giorni, 180 giorni e 365 giorni (+/- 2 giorni fino alla settimana 8 e +/- 14 giorni per i giorni 90, 120, e +/- 28 giorni per 6 e 12 mesi, post-immatricolazione..)

Le seguenti valutazioni sono considerate standard di cura a meno che non siano identificate di seguito da "*":

Pre-infusione: 1. Anamnesi ed esame fisico inclusi altezza e peso 2. Carichi virali per EBV, adenovirus, CMV 3. Sito bioptico della malattia, se appropriato 4. Studi di imaging, se appropriato 5. Informazioni complete sulla stadiazione e classificazione della GVHD acuta, comprese le valutazioni di rash, diarrea, nausea/vomito, peso e test di funzionalità epatica 6. Emocromo con differenziale, conta piastrinica 7. Test di funzionalità epatica (bilirubina, fosfatasi alcalina, AST, ALT) più creatinina 8. Livello di tacrolimus/ciclosporina 9. * Campioni per studi di laboratorio

Post-infusione: 1. Carichi virali per CMV, EBV, adenovirus settimanali a 1, 2, 3, 4 e 6 settimane e 3, 6 e 12 mesi. 2. Informazioni complete sulla stadiazione e classificazione della GVHD acuta, comprese le valutazioni di rash, diarrea, nausea/vomito, peso e test di funzionalità epatica settimanali fino al giorno 45 3. Valutazione della GVHD cronica (se presente) 3, 6, 9 e 12 mesi 4. Emocromo con conta differenziale e piastrinica a 1, 2, 3, 4 e 6 settimane. 5. Tossicità correlate all'infusione entro 24 ore e valutazione della tossicità settimanale fino al giorno 30 e GVHD acuta fino al giorno 45 6. Dose di steroidi settimanale fino al giorno 42 e 3, 6 e 9 mesi 7. * Campioni per studi di laboratorio nei giorni 0, 14, 28 e 90 8. Infezioni fino al giorno 42 e a 3, 6 e 12 mesi

Gli studi di laboratorio ausiliari includeranno: 1) Valutazione dell'immunità virus-specifica basata sui livelli di CTL misurati mediante analisi ELISPOT o analisi del tetramero. 2) Persistenza delle cellule T infuse basata sulla PCR per l'antigene non condiviso

Segnalazione dei decessi dei pazienti: le informazioni sul decesso del destinatario devono essere inserite nel sistema di inserimento dati basato sul Web entro 24 ore dalla conoscenza del decesso di un paziente. Se la causa della morte è sconosciuta in quel momento, non è necessario registrarla in quel momento. Tuttavia, una volta determinata la causa della morte, il modulo deve essere aggiornato.

Valutazione del donatore: - Anamnesi completa ed esame fisico - CBC, piastrine, differenziale - Proteine ​​totali, albumina, bilirubina totale, fosfatasi alcalina, ALT, AST, - Anticorpi HIV-1, anticorpi HIV-2, HIV NAT, HTLV-1/2 anticorpi, antigene HB, anticorpo HBc, HCV NAT, anticorpo CMV, RPR, West Nile virus NAT e test di Chagas - tipizzazione ABO e Rh - Al termine della valutazione, il Medico Trapianto annoterà nella cartella clinica del ricevente e del donatore che i test sono stati valutati e il donatore è accettabile.