Mest HLA-matchade allogena virusspecifika cytotoxiska T-lymfocyter (CTL) (CHALLAH)

Patienter kan screenas för inträde i studien när de har ihållande sjukdom trots standardterapi enligt definitionen i inklusionskriterierna. I det skedet kommer en sökning att göras av tillgängliga rader. Linjer genererades från HSCT-givare som samtyckte till användningen av CTL som inte krävs för deras mottagare för forskning eller från normala givare. Alla donatorer screenades och bedömdes vara kvalificerade som transplantationsdonatorer. Vi kommer också att tillverka ytterligare linjer med målet att täcka vanliga HLA-typer och kommer att samråda med NMDP för att avgöra vilka HLA-typer som skulle vara önskvärda. Ytterligare donatorer kommer att screenas av en transplantationsdonatorcentrumläkare och måste anses vara behöriga innan en linje kan tillverkas.

CTL-linjer: Vi kommer att använda trivirusspecifika CTL-linjer genererade enligt beskrivningen tidigare. Generering av trivirusspecifika CTL-linjer kräver generering av flera olika komponenter från PBMC. CTL-linjen kommer att härledas från donatorns perifera blod-T-celler, genom multipla stimuleringar med antigenpresenterande celler (APC) som presenterar CMV-, EBV- och adenovirusantigener och expansion med interleukin-2 (IL-2). APC:erna som används för att stimulera och expandera de CMV-specifika T-cellerna kommer att härröra från patientens mononukleära celler och B-lymfocyter.

För att initiera den trivirusspecifika CTL-linjen kommer PBMC att transduceras med en adenovirusvektor (Ad5f35-pp65) som uttrycker det immundominanta antigenet av CMV, pp65. Monocytfraktionen av PBMC uttryckte och presenterade CMV-pp65-peptidepitoper för den CMV-specifika T-cellsfraktionen av PBMC, medan virionproteinerna från adenovirusvektorn bearbetades och presenterades för den adenovirusspecifika T-cellsfraktionen.

För att expandera trivirusspecifika T-celler använde vi EBV-transformerade B-lymfoblastoidcellinjer (EBV-LCL) transducerade med Ad5f35-pp65. Denna transduktion tillåter EBV-LCL att presentera CMV-pp65 och adenovirusvirionpeptider till T-cellerna såväl som endogent uttryckta EBV-antigener.

EBV-LCL härrör från PBMC-B-lymfocyter genom infektion med en laboratoriestam av klinisk kvalitet av Epstein-Barr-virus (EBV). Cirka 5 x 10^6 PBMC, eller 5 till 10 ml blod krävs för att generera EBV-LCL

Vid slutet av CTL-odlingsperioden bestämdes frekvensen av T-celler specifika för varje virus med användning av tetramerreagens om tillgängliga. För att testa CTL:s funktionella antigenspecificitet kommer vi att använda överlappande peptidbibliotek för pp65 och adenovirushexon och autologa och allogena LCL:er i Elispot-analyser och vi kommer att utföra cytotoxicitetsanalyser med omodifierade PHA-blaster och LCL:er otransducerade eller transducerade med Adhexon och CMVppOR65 LCL pepmix 65 omvandlas med Ad5f35-null och Ad5f35-pp65. Vissa linjer kommer att ha alikvoter skickade för ytterligare karakterisering till NIH där Drs Melenhorst och Barrett utvecklar analyser för att förutsäga alloreaktivitet där de undersöker virusantigenspecifika T-celler med hjälp av en omfattande panel av aktiverade T-celler som antigenpresenterande celler (T-APC). Dessa rader kommer endast att märkas med komponentnummer och kommer inte att ha ämnesidentifierare.

CTL-linjerna kommer också att kontrolleras med avseende på identitet, fenotyp och sterilitet, och kryokonserveras före administrering enligt SOP. Frisättningskriterier för administrering av CTL till patienter inkluderar viabilitet >70 %, negativ odling för bakterier och svampar i minst 7 dagar, endotoxintestning mindre än eller lika med 5EU/ml, negativt resultat för Mycoplasma, <2 % CD19-positiva B-celler, <2% CD14-positiva monocyter (eller <2% CD83-positiva celler om dendritiska celler användes som stimulatorer) och HLA-identitet.

Ingen matchad CTL-linje tillgänglig: Om ingen matchad linje är tillgänglig kommer patienten att registreras så att tillvägagångssättets genomförbarhet kan bedömas och det slutliga resultatet kommer också att samlas in.

CTL-linje tillgänglig men patientstatusändringar: Patienternas kliniska förlopp som ändras mellan screening och infusion kommer inte att ges CTL och kommer att följas för eventuellt resultat.

Överlevnadsdata kommer att samlas in genom att be transplantationscentret att skicka in rutinformuläret Transplant Essential Data som skickas till stamcellstransplantationsresultatdatabasen efter 100 dagar och 1 år och inkluderar data om överlevnadsstatus och andra resultatmått.

Kriterier för val av CTL-linje: I allmänhet kommer linjematchningen vid det högsta antalet HLA-loci att väljas. Matchning på allelnivå kommer att föredras men antigennivå kommer att accepteras eller HLA-A och HLA-B. Men hänsyn kommer också att tas till typen av infektion och aktiviteten hos linjen mot det viruset. Till exempel för en patient med adenovirusinfektion skulle en linje som matchar vid 2 loci men som har igenkänning av adenovirus medierad genom dessa antigener vara att föredra framför en linje matchad vid 3 loci men utan påvisad aktivitet mot adenovirus. Protokollordföranden kommer att diskutera varje fall med huvudutredarna vid varje center för att fastställa den optimala CTL-linjen för varje patient. Om mer än en linje matchar och det inte finns tillräckligt med celler för att täcka ytterligare infusioner kommer en andra CTL-linje att reserveras i händelse av att ytterligare infusioner är motiverade. Patienter med partiellt svar är berättigade att få en extra dos.

Premedicinering: Patienterna kommer att premedicineras med Benadryl 1 mg/kg (max 50 mg) IV och Tylenol 10 mg/kg (max 650 mg) PO.

Patienterna kommer att övervakas i enlighet med institutionella standarder för administrering av blodprodukter och kommer åtminstone att övervakas enligt nedan: • Patienterna ska vara kvar på kliniken i minst en timme • Patienterna ska vara på kontinuerlig pulsoximetri i minst 30 minuter. Vitala tecken bör övervakas i slutet av infusionen och sedan efter 30 och 60 minuter

Stödjande vård: Patienterna kommer att få stödjande vård för akut eller kronisk toxicitet, inklusive blodkomponenter eller antibiotika, och andra åtgärder vid behov.

Om en patient har ett partiellt svar är de berättigade att få upp till 4 ytterligare doser med minst 2 veckors intervall och om de uppfyller behörighetskriterierna för efterföljande rader. Dessa doser skulle komma från den ursprungliga infunderade linjen om tillräckligt många injektionsflaskor fanns tillgängliga, men kan komma från en annan linje om det inte finns tillräckligt med celler i den ursprungliga linjen.

Uppföljningsbedömningar: Tidpunkten för uppföljningsbesök baseras på datumet för CTL-infusion. Om en patient har flera CTL-doser återställs schemat igen i början så uppföljningen avser den senaste CTL-dosen.

Uppföljning kommer att ske efter 7 dagar, 14 dagar, 21 dagar, 28 dagar, 42 dagar, 90 dagar, 180 dagar och 365 dagar (+/- 2 dagar upp till vecka 8, och +/- 14 dagar för dag 90, 120, och +/- 28 dagar för 6 och 12 månader, efter registrering..)

Följande bedömningar anses vara standardiserade om de inte identifieras nedan med " * ":

Pre-infusion: 1. Anamnes och fysisk undersökning inklusive längd och vikt 2. Viral belastning för EBV, adenovirus, CMV 3. Biopsisjukdomsställe, om så är lämpligt 4. Avbildningsstudier, om lämpligt 5. Komplettera akut GVHD stadieindelning och graderingsinformation inklusive bedömningar av utslag, diarré, illamående/kräkningar, vikt- och leverfunktionstester 6. CBC med differential, trombocytantal 7. Leverfunktionstester (bilirubin, alkaliskt fosfatas, ASAT, ALT) plus kreatinin 8. Takrolimus/ciklosporinnivå 9. * Prover för laboratoriestudier

Post-infusion: 1. Viral belastning för CMV, EBV, adenovirus varje vecka efter 1, 2, 3, 4 och 6 veckor och 3, 6 och 12 månader. 2. Komplettera akut GVHD stadieindelning och graderingsinformation inklusive bedömningar av hudutslag, diarré, illamående/kräkningar, vikt och leverfunktionstester varje vecka fram till dag 45 3. Kronisk GVHD utvärdering (om sådan finns) 3, 6, 9 och 12 månader 4. CBC med differential- och trombocytantal vid 1, 2, 3, 4 och 6 veckor. 5. Infusionsrelaterade toxiciteter inom 24 timmar och toxicitetsutvärdering varje vecka fram till dag 30 och akut GVHD fram till dag 45 6. Steroiddos veckovis fram till dag 42 och 3, 6 och 9 månader 7. * Prover för laboratoriestudier dag 0, 14, 28 och 90 8. Infektioner till och med dag 42 och vid 3, 6 och 12 månader

Kompletterande laboratoriestudier kommer att omfatta: 1) Bedömning av virusspecifik immunitet baserat på CTL-nivåer mätt med ELISPOT-analyser eller tetrameranalyser. 2) Persistens av infunderade T-celler baserat på PCR för icke-delat antigen

Rapportering av patientdödsfall: Information om mottagarens dödsfall måste matas in i det webbaserade datainmatningssystemet inom 24 timmar efter kännedom om en patients död. Om dödsorsaken är okänd vid den tidpunkten behöver den inte registreras vid den tidpunkten. Men när dödsorsaken har fastställts måste formuläret uppdateras.

Givarutvärdering: - Fullständig historia och fysisk undersökning - CBC, blodplättar, differential - Totalt protein, albumin, totalt bilirubin, alkaliskt fosfatas, ALT, AST, - HIV-1 antikropp, HIV-2 antikropp, HIV NAT, HTLV-1/2 antikroppar, HBsantigen, HBc-antikropp, HCV NAT, CMV-antikropp, RPR, West Nile-virus NAT och Chagas-testning - ABO- och Rh-typning - När utvärderingen är klar kommer transplantationsläkaren att anteckna i mottagarens och givarens journaler att testerna har utvärderats och givaren är acceptabel.