2型糖尿病患者のエンドトキシンレベルに対するプロバイオティクスの効果を調べる研究

デザイン

この 26 週間の単施設二重盲検ランダム化プラセボ対照試験では、2 型糖尿病患者 60 人がプロバイオティクスで治療され、60 人がプラセボで治療されます。 介入は、すべての被験者から0、4、8、12、および26週に行われます。 プロバイオティクス群に割り当てられた患者は、フリーズドライ細菌の 4 株、すなわちラクトバチルス アシドフィルス、ラクトバチルス ブルガリクス、ビフィドバクテリウム ビフィダム、およびストレプトコッカス好熱菌 (Bio-plus®、Supherb、イスラエル) を 1 日 2 × 1010 の用量で含むカプセルを受け取ります。 CFU。 プラセボ群の参加者は、別の臨床試験で使用されているように、小麦ベースの非発酵性繊維を含むカプセルを受け取ります [Pereg et al, 2011].

患者募集

この研究への患者の募集は、リヤド全体のプライマリケアセンターおよびキングサウド大学理学部のバイオマーカー研究プログラムとの協力によって可能になります。

包含基準

• -安定し、十分に制御された2型糖尿病（HbA1c < 7.5％、および過去6か月間の経口抗糖尿病薬の変更なし）
• 年齢 20 ～ 75 歳
• 書面によるインフォームドコンセントの提供

除外基準

• 慢性消化器病（IBSを除く）
• -組み入れ前6週間以内の全身抗生物質
• 含める前の3か月以内のプロバイオティクスの使用（付録Aは、現在国際的に販売されており、サウジアラビアで購入できる製品をリストしています）
• インスリンまたはインスリン類似体、抗生物質またはプロバイオティクス、制酸剤、H2受容体遮断薬、プロトンポンプ阻害薬、ロペラミド、コレストリラミン、ω3サプリメント、フィブラート、コルチコステロイドまたは性ステロイドの定期的な摂取
• 1 日のアルコール消費量 > 30 g
• 重大な免疫不全
• -既知の心臓弁膜症
• 授乳中または妊娠中
• 非アラブ民族
• -過去6か月以内の別の臨床試験への参加
• 法律上の無能

治療への割り当て

適格性を確認し、書面によるインフォームド コンセントを取得した後、患者にはプロバイオティクス会社から一意の被験者番号が与えられ、無作為化 (性別で階層化) も行われます。プライマリ ケア センターの患者と臨床医は、治療を受けた。 適格な患者は、プロバイオティクスサプリメントまたはプラセボのいずれかによる26週間の治療に（1：1）割り当てられます。 被験者は次のように指示されます。

• 朝食前に 1 カプセル、夕食前に 1 カプセルを直接または通常のヨーグルトに混ぜて摂取してください。
• カプセルは、開封後は冷蔵庫で保管します。

データの取り扱いと記録管理

ケースレポートフォーム（CRF）は、すべての参加者のデータを記録するために使用され、データを電子データベースに入力する研究看護師によって完成されます。

勉強の日程と場所

組み入れ後、それ以降のすべての治療は、被験者が募集されたプライマリケアセンターで管理されます（予定された訪問については付録Cを参照）。 研究看護師と研究栄養士は、患者とのすべての接触に責任を負います。 問題が発生した場合は、研究チームに関連する医師が対応します。

臨床データの取得とコンプライアンスの評価

• 慢性疾患の存在、定期的な投薬、喫煙およびアルコール習慣を含む病歴は、含める前に記録されます。
• 栄養習慣は、標準化された14日間のリコールアンケートを使用して評価され、栄養士と話し合います
• 研究期間中の投薬の変更が記録されます
• 人体測定は、標準化された方法を使用して行われます。 治療開始時に身長を測ります。 体重（靴やポケットに物を入れていない軽装の場合）、胴囲（臍の高さで水平面として測定）、および腰囲（大転子の高さで水平面として測定）は、治療の開始と終了。
• 肝臓の超音波検査は、脂肪症を示す明るい肝臓の有無を判断するために、スクリーニング時または治療開始時に行われます。 脂肪肝および肝トランスアミナーゼが正常上限の1.5倍を超える患者は、肝臓専門医への紹介が提供されます。
• コンプライアンスは、4、8、12、および 26 週目に監視されます。 患者は、以前に受け取ったカプセルをプライマリケアセンターに持ってきて、1日に摂取したカプセルの平均数を計算します.

ルーチンの生化学データと生体サンプルの取得

• 得られた血液サンプルは、バイオマーカー研究プログラムで分析され、グルコース、HbA1c、インスリン、C-ペプチド、総コレステロール、HDL-コレステロール、LDL-コレステロール、トリグリセリド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼのレベルが測定されます。
• 空腹時血液サンプルは、0、8、26 週目に採取されます。 末梢静脈血は、抗凝固剤なしで発熱物質を含まないチューブに引き込まれます。 チューブを直ちに氷中に置き、凝固させ、採取後2時間以内に遠心分離する（4℃で2500×gで10分間）。 血清サンプルは、使用するまで-80°Cで保存されます。 各時点で少なくとも 2 つの 2 mL 血清サンプルが収集されます。
• 便のサンプルは、診療所に移送されるまで冷凍庫内のプラスチック製の密封可能なバッグにサンプルを保管するように患者に依頼することによって採取されます。 (血液サンプルを要求された時点で採取されたサンプル。 診療所に到着したら、サンプルを分割し、瞬間凍結し、-80°C で保存します。 腸内細菌叢の変化は、増幅された 16S rRNA 遺伝子の署名タグ付きシーケンス (パイロシーケンス) とそれに続く自動バイオインフォマティクス分析を使用してプロファイリングされます。 ターゲットRT-PCRは、ユニバーサル細菌プライマーセットと比較して、腸内細菌やビフドバクテリアなどの細菌種を調べるためにも使用されます。 最終的な全身所見を考慮して、患者のサブコホート（n = 15）でパイロシーケンシングとRT-PCRを実施します。 サンプルはその後の研究のために保持されます。

被験者の離脱

被験者は、自らの要請によりいつでも治験から脱退することができ、また安全、行動または管理上の理由により、治験責任医師の裁量によりいつでも脱退することができます。 被験者は、次の場合にも研究から除外されます。

• 0～22週の間に1週間を超える全身性抗生物質による治療
• -22〜26週目の全身抗生物質の使用

患者の安全

有害事象

有害事象（AE）は、研究中に発生する望ましくない徴候または症状であり、治療に因果関係がある場合とない場合があります。 試験製品に関連する可能性がある、おそらく、または確実に関連すると考えられるすべての AE は、CRF に記録されます。

重篤な有害事象

重篤な有害事象 (SAE) は、致命的、生命を脅かす、障害を引き起こす、無力化する、または入院または入院期間の延長、または奇形をもたらす事象として定義されます。 すべての SAE は、試験製品に関連するかどうかにかかわらず、CRF に記録されます。 以前の研究 (9) によると、プロバイオティクスは非常に安全であり、試験製品に関連している可能性がある、おそらく関連している、または確実に関連している可能性のある SAE は予期しないものと見なされます。 予期しない SAE はすべて、医薬品およびヘルスケア製品規制庁 (MHRA) に直ちに報告されます。 テストに関連する可能性のある SAE は、直ちにテスト製品の中止につながります。

倫理的および規制的側面

この研究は、ヘルシンキ宣言に由来するプロトコルと倫理原則、および優れた臨床実践に関する調和ガイダンス国際評議会に従って実施されます。 これらの文書には、被験者のインフォームド コンセントが臨床研究への参加の必須前提条件であることが記載されています。 この研究は、キングサウド大学医学部研究センターの地元の倫理審査委員会から承認を得た後にのみ開始されます。

データ分析の計画

この試験は、2型糖尿病におけるプロバイオティクスによる治療の臨床的適応をサポートするのではなく、生理学的効果を評価するように設計されているため、プロトコル分析ごとに実行する予定です. 少なくとも 80% の時間、計画された用量の少なくとも 80% で治療された被験者のみが、プロトコルごとに治療されたと見なされます。

生データは、統計ソフトウェア (社会科学の統計パッケージ)、SPSS バージョン 16.5 (シカゴ、イリノイ州、米国) に入力されます。 データセットの準備は、分析の前に行われます。 記述統計が行われます。頻度はパーセンテージ (%) で表示されます。 連続変数は、平均 ± 標準偏差として表示されます。 非ガウス変数を示す変数は、分析の前に変換されます。 反復測定共分散分析 (ANCOVA) を使用してグループを比較します。これは、分散分析 (ANOVA) と線形回帰の組み合わせを表します。 測定を繰り返す前に適切なマッチングが達成されなかった場合は、年齢や性別などの交絡変数と固定変数、および BMI が取得されます。 ポストホック Banjamini-Hohberg 補正は、複数の比較に対して行われます。 2 つのグループを比較するために、独立した T 検定が連続変数に対して行われ、Mann-Whitney が非連続変数に対して行われます。 有害事象（存在する場合）の分析は、ランダム性、独立性、およびサイズの仮定に従って、カイ二乗検定およびフィッシャーの正確確率検定を使用して行われます。 有意性は p < 0.05 に設定されます。