Badanie mające na celu zbadanie wpływu probiotyków na poziom endotoksyn u pacjentów z cukrzycą typu 2

Projekt

W tym 26-tygodniowym, jednoośrodkowym, podwójnie ślepym, randomizowanym badaniu kontrolowanym placebo, 60 pacjentów z T2DM będzie leczonych probiotykami, a 60 placebo. Interwencje będą przeprowadzane w tygodniach 0, 4, 8, 12 i 26 u wszystkich pacjentów. Pacjenci przydzieleni do grupy probiotycznej otrzymają kapsułki zawierające cztery szczepy liofilizowanych bakterii: Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Bifidobacterium bifidum i Streptococcus thermophiles (Bio-plus®, Supherb, Izrael), w dziennej dawce 2 × 1010 CFU. Uczestnicy z grupy placebo otrzymają kapsułki zawierające niefermentowalny błonnik na bazie pszenicy, tak jak zastosowano w innym badaniu klinicznym [Pereg i in., 2011].

Rekrutacja Pacjentów

Rekrutacja pacjentów do tego badania będzie możliwa dzięki współpracy z ośrodkami podstawowej opieki zdrowotnej w całym Rijadzie oraz programem badań biomarkerów, College of Science, King Saud University.

Kryteria przyjęcia

• Stabilna i dobrze kontrolowana T2DM (HbA1c < 7,5% i brak zmian w doustnych lekach przeciwcukrzycowych w ciągu ostatnich 6 miesięcy)
• Wiek 20-75 lat
• Dostarczenie pisemnej świadomej zgody

Kryteria wyłączenia

• Przewlekła choroba przewodu pokarmowego (z wyjątkiem IBS)
• Antybiotyki ogólnoustrojowe w ciągu 6 tygodni przed włączeniem
• Stosowanie probiotyków w ciągu 3 miesięcy przed włączeniem (Załącznik A zawiera listę produktów sprzedawanych obecnie na rynku międzynarodowym i dostępnych w sprzedaży w Arabii Saudyjskiej)
• Regularne przyjmowanie insuliny lub analogów insuliny, antybiotyków lub probiotyków, leków zobojętniających sok żołądkowy, blokerów receptora H2, inhibitorów pompy protonowej, loperamidu, cholestryraminy, suplementów ω3, fibratów, kortykosteroidów lub steroidów płciowych
• Dzienne spożycie alkoholu > 30 g
• Znaczący niedobór odporności
• Znana choroba zastawkowa serca
• Karmienie piersią lub ciąża
• Pochodzenie etniczne niearabskie
• Udział w innym badaniu klinicznym w ciągu ostatnich 6 miesięcy
• Niezdolność prawna

Przydział do leczenia

Po potwierdzeniu kwalifikowalności i uzyskaniu pisemnej świadomej zgody, pacjenci otrzymają unikalny numer podmiotu od firmy probiotycznej, która również przeprowadzi randomizację (z podziałem na płeć). Pacjenci i klinicyści w ośrodku podstawowej opieki zdrowotnej będą zaślepieni na otrzymane leczenie. Kwalifikujący się pacjenci zostaną przydzieleni (1:1) do leczenia przez 26 tygodni suplementem probiotyków lub placebo. Podmioty zostaną poinstruowane, aby

• Spożywać 1 kapsułkę przed śniadaniem i 1 kapsułkę przed wieczornym posiłkiem, bezpośrednio lub zmieszaną ze standardowym jogurtem.
• Kapsułki będą przechowywane w lodówce po otwarciu słoika.

Przetwarzanie danych i prowadzenie rejestrów

Formularz opisu przypadku (CRF) zostanie wykorzystany do zapisania danych dla wszystkich uczestników i zostanie wypełniony przez pielęgniarkę badawczą, która również wprowadzi dane do elektronicznej bazy danych.

Harmonogram i miejsce nauki

Po włączeniu wszystkie dalsze zabiegi będą prowadzone w ośrodku podstawowej opieki zdrowotnej, w którym badany został zrekrutowany (zobacz załącznik C, aby zapoznać się z planowanymi wizytami). Pielęgniarka badawcza i dietetyk badawczy będą odpowiedzialni za cały kontakt z pacjentami. Lekarze związani z zespołem badawczym będą dostępni w razie problemów.

Pozyskiwanie danych klinicznych i ocena zgodności

• Historia medyczna, w tym obecność chorób przewlekłych, regularne przyjmowanie leków, palenie i nawyki alkoholowe, zostanie zarejestrowana przed włączeniem.
• Nawyki żywieniowe zostaną ocenione za pomocą wystandaryzowanego 14-dniowego kwestionariusza przypominającego, który zostanie omówiony z dietetykiem
• Zmiany leków w okresie badania będą rejestrowane
• Pomiary antropometryczne będą wykonywane przy użyciu znormalizowanych metod. Wzrost zostanie zmierzony na początku leczenia. Masa ciała (w ubraniu lekkim bez butów i rzeczy w kieszeniach), obwód talii (mierzony w płaszczyźnie poziomej na wysokości pępka) oraz obwód bioder (mierzony w płaszczyźnie poziomej na wysokości krętarza większego) początek i koniec zabiegu.
• Ultrasonografia wątroby zostanie przeprowadzona podczas badania przesiewowego lub na początku leczenia w celu określenia obecności lub braku jasnego koloru wątroby wskazującego na stłuszczenie. Pacjenci ze stłuszczeniem wątroby i transaminazami wątrobowymi > 1,5 × górnej granicy normy otrzymają skierowanie do hepatologa.
• Zgodność będzie monitorowana w 4, 8, 12 i 26 tygodniu. Pacjenci przyniosą otrzymane wcześniej kapsułki do ośrodka podstawowej opieki zdrowotnej w celu obliczenia średniej liczby kapsułek spożytych w ciągu dnia.

Pozyskiwanie rutynowych danych biochemicznych i próbek biologicznych

• Pobrane próbki krwi zostaną przeanalizowane w programie Biomarkers Research Program w celu pomiaru poziomu glukozy, HbA1c, insuliny, peptydu C, cholesterolu całkowitego, cholesterolu HDL, cholesterolu LDL, trójglicerydów, aminotransferazy alaninowej i aminotransferazy asparaginianowej.
• Próbki krwi na czczo zostaną pobrane w tygodniu 0, 8 i 26. Krew żylna obwodowa zostanie pobrana do wolnych od pirogenów probówek bez antykoagulantu. Probówki zostaną natychmiast umieszczone w lodzie, pozostawione do skoagulowania i odwirowane (2500 xg przez 10 min w 4°C) w ciągu 2 godzin od pobrania. Próbki surowicy będą przechowywane w temperaturze -80°C do momentu użycia. W każdym punkcie czasowym zostaną pobrane co najmniej dwie próbki surowicy o objętości 2 ml.
• Próbki kału zostaną pobrane poprzez poproszenie pacjentów o przechowywanie próbki w plastikowej zamykanej torebce w zamrażarce do czasu przeniesienia do kliniki. (próbki pobrane w tych samych miejscach, w których wymagane są próbki krwi. W klinice próbki zostaną podzielone, szybko zamrożone i przechowywane w temperaturze -80°C. Zmiany w mikroflorze jelitowej będą profilowane za pomocą sekwencjonowania ze znacznikami sygnaturowymi (pirosekwencjonowania) zamplifikowanych genów 16S rRNA, a następnie zautomatyzowanej analizy bioinformatycznej. Ukierunkowana RT-PCR zostanie również wykorzystana do zbadania gatunków bakterii, takich jak Enterobacteria i Bifdobacteria, w odniesieniu do uniwersalnego zestawu starterów bakteryjnych. Pirosekwencjonowanie i RT-PCR zostaną przeprowadzone w subkohorcie (n=15) pacjentów z uwzględnieniem ostatecznych wyników ogólnoustrojowych. Próbki zostaną zachowane do dalszych badań.

Wycofanie podmiotu

Uczestnicy mogą wycofać się z badania w dowolnym momencie na własną prośbę lub mogą zostać wycofani w dowolnym momencie według uznania badacza ze względów bezpieczeństwa, behawioralnych lub administracyjnych. Osoby zostaną również wycofane z badania w przypadku:

• Leczenie ogólnoustrojowymi antybiotykami przez > 1 tydzień w tygodniu 0-22
• Jakiekolwiek stosowanie ogólnoustrojowych antybiotyków w 22-26 tygodniu

Bezpieczeństwo pacjenta

Zdarzenia niepożądane

Zdarzenia niepożądane (AE) to niepożądane oznaki lub objawy, które występują podczas badania i mogą, ale nie muszą, być przyczynowo związane z leczeniem. Wszystkie zdarzenia niepożądane uznane za prawdopodobnie, prawdopodobnie lub zdecydowanie związane z badanym produktem zostaną zapisane w CRF.

Poważne zdarzenia niepożądane

Poważne zdarzenia niepożądane (SAE) definiuje się jako zdarzenia prowadzące do zgonu, zagrażające życiu, powodujące niepełnosprawność, obezwładniające lub skutkujące hospitalizacją lub przedłużeniem pobytu w szpitalu lub skutkujące wadami rozwojowymi. Wszystkie SAE zostaną zapisane w CRF, niezależnie od tego, czy są związane z badanym produktem, czy nie. Zgodnie z wcześniejszymi badaniami (9) probiotyki są bardzo bezpieczne, a wszelkie SAE, które mogą być prawdopodobnie, prawdopodobnie lub definitywnie związane z badanym produktem, będą uważane za nieoczekiwane. Wszystkie nieoczekiwane SAE będą natychmiast zgłaszane do Agencji Regulacyjnej ds. Leków i Produktów Opieki Zdrowotnej (MHRA). Wszelkie SAE, które mogą być związane z testem, natychmiast doprowadzą do zaprzestania stosowania produktu testowego.

Aspekty etyczne i regulacyjne

Badanie zostanie przeprowadzone zgodnie z protokołem i zasadami etycznymi, które mają swoje źródło w Deklaracji Helsińskiej oraz Międzynarodowej Radzie ds. Harmonizacji Wytycznych Dobrej Praktyki Klinicznej. Dokumenty te stwierdzają, że świadoma zgoda uczestników jest niezbędnym warunkiem udziału w badaniu klinicznym. Badanie zostanie rozpoczęte dopiero po uzyskaniu zgody lokalnej komisji ds. oceny etycznej w College of Medicine Research Center, King Saud University.

Zaplanuj analizy danych

Ponieważ to badanie ma na celu ocenę efektów fizjologicznych, a nie wsparcie wskazań klinicznych do leczenia probiotykami w T2DM, planujemy przeprowadzić analizy zgodnie z protokołem. Tylko osoby leczone co najmniej 80% planowanych dawek przez co najmniej 80% czasu będą traktowane jako leczone zgodnie z protokołem.

Surowe dane zostaną wprowadzone do oprogramowania statystycznego (Pakiet Statystyczny dla Nauk Społecznych), SPSS wersja 16.5 (Chicago, IL, USA). Przygotowanie zbioru danych nastąpi przed analizami. Statystyki opisowe zostaną sporządzone; częstotliwości zostaną przedstawione w procentach (%). Zmienne ciągłe zostaną przedstawione jako średnia ± odchylenie standardowe. Zmienne wykazujące zmienne niegaussowskie zostaną przed analizą przekształcone. Analiza kowariancji z powtarzanymi pomiarami (ANCOVA) zostanie wykorzystana do porównania grup, co będzie reprezentować kombinację analizy wariancji (ANOVA) i regresji liniowej. Zakłócające i stałe zmienne, takie jak wiek i płeć, a także BMI zostaną wzięte pod uwagę, jeśli przed powtórzeniem pomiarów nie osiągnięto odpowiedniego dopasowania. Korekty post-hoc Banjaminiego-Hohberga zostaną wykonane dla wielokrotnych porównań. Dla porównania 2 grup zostanie przeprowadzony niezależny test t dla zmiennych ciągłych i Mann-Whitney dla zmiennych nieciągłych. Analiza zdarzeń niepożądanych (jeśli wystąpią) zostanie przeprowadzona przy użyciu testu chi-kwadrat i dokładnego testu Fishera przy założeniu losowości, niezależności i wielkości. Istotność zostanie ustalona na poziomie p < 0,05.