Исследование по изучению влияния пробиотиков на уровни эндотоксинов у пациентов с сахарным диабетом 2 типа

Дизайн

В этом 26-недельном одноцентровом двойном слепом рандомизированном плацебо-контролируемом исследовании 60 пациентов с СД2 будут получать пробиотики, а 60 — плацебо. Вмешательства будут проводиться на 0, 4, 8, 12 и 26 неделе для всех субъектов. Пациенты, отнесенные к группе пробиотиков, будут получать капсулы, содержащие четыре штамма лиофилизированных бактерий, а именно Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Bifidobacterium bifidum и Streptococcus thermophiles (Bio-plus®, Supherb, Израиль), в суточной дозе 2 × 1010. КОЕ. Участники группы плацебо получат капсулы, содержащие неферментируемые волокна на основе пшеницы, которые использовались в другом клиническом исследовании [Pereg et al, 2011].

Набор пациентов

Привлечение пациентов к этому исследованию станет возможным благодаря сотрудничеству с центрами первичной медико-санитарной помощи по всему Эр-Рияду и Программой исследования биомаркеров Научного колледжа Университета короля Сауда.

Критерии включения

• Стабильный и хорошо контролируемый СД2 (HbA1c < 7,5% и отсутствие изменений в пероральных противодиабетических препаратах в течение последних 6 месяцев)
• Возраст 20-75 лет
• Предоставление письменного информированного согласия

Критерий исключения

• Хронические заболевания желудочно-кишечного тракта (кроме СРК)
• Системные антибиотики в течение 6 недель до включения
• Использование пробиотиков в течение 3 месяцев до включения (в Приложении А перечислены продукты, которые в настоящее время продаются на международном рынке и доступны для покупки в Саудовской Аравии)
• Регулярный прием инсулина или аналогов инсулина, антибиотиков или пробиотиков, антацидов, блокаторов Н2-рецепторов, ингибиторов протонной помпы, лоперамида, холестрирамина, добавок ω3, фибратов, кортикостероидов или половых стероидов
• Ежедневное потребление алкоголя > 30 г
• Значительный иммунодефицит
• Известный порок сердца
• Кормящая грудью или беременная
• Неарабская этническая принадлежность
• Участие в другом клиническом исследовании в течение последних 6 месяцев
• Юридическая недееспособность

Распределение по лечению

После подтверждения соответствия требованиям и получения письменного информированного согласия компания-производитель пробиотиков присвоит пациентам уникальный номер субъекта, который также проведет рандомизацию (стратификацию по полу). лечение получено. Подходящие пациенты будут распределены (1: 1) на лечение в течение 26 недель либо пробиотическими добавками, либо плацебо. Субъекты будут проинструктированы

• Принимать по 1 капсуле перед завтраком и по 1 капсуле перед ужином либо непосредственно, либо смешав с обычным йогуртом.
• Капсулы будут храниться в холодильнике после открытия банки.

Обработка данных и ведение записей

Форма отчета о болезни (CRF) будет использоваться для записи данных обо всех участниках и будет заполнена медсестрой-исследователем, которая также введет данные в электронную базу данных.

График и место учебы

После включения все дальнейшее лечение будет проводиться в центре первичной медико-санитарной помощи, в котором был нанят субъект (см. приложение C для запланированных посещений). Медсестра-исследователь и диетолог-исследователь несут ответственность за все контакты с пациентами. Врачи, связанные с исследовательской группой, будут доступны, если возникнут проблемы.

Сбор клинических данных и оценка соответствия

• Медицинский анамнез, в том числе наличие хронических заболеваний, регулярный прием лекарств, курение и употребление алкоголя, будет записан перед включением.
• Пищевые привычки будут оцениваться с использованием стандартизированного 14-дневного опросника, который будет обсуждаться с диетологом.
• Изменения в лекарствах в течение периода исследования будут записаны
• Антропометрические измерения будут проводиться стандартизированными методами. Рост будет измерен в начале лечения. Вес (в легкой одежде, без обуви или предметов в карманах), окружность талии (измеряется в горизонтальной плоскости на уровне пупка) и окружность бедер (измеряется в горизонтальной плоскости на уровне большого вертела) будут измеряться в начало и окончание лечения.
• Ультрасонография печени будет проводиться либо при скрининге, либо в начале лечения, чтобы определить наличие или отсутствие яркой печени, указывающей на стеатоз. Пациентам с жировой дистрофией печени и трансаминазами печени, превышающими верхнюю границу нормы в 1,5 раза, будет предложено направление к гепатологу.
• Соблюдение режима будет контролироваться на 4, 8, 12 и 26 неделе. Пациенты приносят свои ранее полученные капсулы в центр первичной медико-санитарной помощи, чтобы рассчитать среднее количество капсул, принимаемых в день.

Сбор рутинных биохимических данных и биологических образцов

• Полученные образцы крови будут проанализированы в рамках Программы исследования биомаркеров для измерения уровней глюкозы, HbA1c, инсулина, С-пептида, общего холестерина, холестерина ЛПВП, холестерина ЛПНП, триглицеридов, аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы.
• Образцы крови натощак будут собираться на 0, 8 и 26 неделе. Периферическую венозную кровь отбирают в апирогенные пробирки без каких-либо антикоагулянтов. Пробирки немедленно помещают на лед, дают коагулировать и центрифугируют (2500×g в течение 10 мин при 4°C) в течение 2 часов после сбора. Образцы сыворотки будут храниться при температуре -80°C до использования. В каждый момент времени будет собираться не менее двух образцов сыворотки объемом 2 мл.
• Образцы стула будут взяты, попросив пациентов хранить образец в пластиковом герметичном пакете в морозильной камере до момента передачи в клинику. (образцы берутся в тех же точках, в которых они запрашиваются для образцов крови. По прибытии в клинику образцы будут разделены, подвергнуты мгновенной заморозке и сохранены при температуре -80°C. Изменения в кишечной микробиоте будут профилированы с использованием сигнатурного секвенирования (пиросеквенирования) амплифицированных генов 16S рРНК с последующим автоматическим биоинформационным анализом. Целевая ОТ-ПЦР также будет использоваться для изучения видов бактерий, таких как энтеробактерии и бифдобактерии, относительно универсального набора бактериальных праймеров. Пиросеквенирование и ОТ-ПЦР будут выполнены в подгруппе (n = 15) пациентов с учетом окончательных системных результатов. Образцы будут сохранены для последующих исследований.

Снятие субъекта

Субъекты могут выйти из исследования в любое время по собственному желанию, или они могут быть исключены в любое время по усмотрению исследователя по соображениям безопасности, поведенческим или административным причинам. Субъекты также будут исключены из исследования в случае:

• Лечение системными антибиотиками в течение > 1 недели в течение 0-22 недель
• Любое использование системных антибиотиков в течение 22-26 недель

Безопасность пациентов

Неблагоприятные события

Нежелательные явления (НЯ) — это нежелательные признаки или симптомы, которые возникают во время исследования и могут быть или не быть причинно связаны с лечением. Все нежелательные явления, которые считаются возможными, вероятными или определенно связанными с тестируемым продуктом, будут зарегистрированы в ИРК.

Серьезные нежелательные явления

Серьезные нежелательные явления (СНЯ) определяются как события, которые являются смертельными, опасными для жизни, инвалидизирующими, инвалидизирующими или приводящими к госпитализации или продлению пребывания в больнице, или приводящими к порокам развития. Все SAE будут записаны в CRF, независимо от того, связаны они с тестируемым продуктом или нет. Согласно предыдущим исследованиям (9), пробиотики очень безопасны, и любое СНЯ, которое может быть, вероятно или определенно связано с тестируемым продуктом, будет расцениваться как неожиданное. Обо всех неожиданных СНЯ будет немедленно сообщено Агентству по регулированию лекарственных средств и изделий медицинского назначения (MHRA). Любое SAE, которое может быть связано с тестом, немедленно приведет к прекращению производства тестового продукта.

Этические и нормативные аспекты

Исследование будет проводиться в соответствии с протоколом и этическими принципами, берущими свое начало в Хельсинкской декларации, а также в соответствии с Руководством по надлежащей клинической практике Международного совета по гармонизации. В этих документах указано, что информированное согласие субъектов является важным предварительным условием для участия в клиническом исследовании. Исследование начнется только после получения одобрения местного этического совета Исследовательского центра Медицинского колледжа Университета короля Сауда.

План анализа данных

Поскольку это исследование предназначено для оценки физиологических эффектов, а не для подтверждения клинических показаний к лечению пробиотиками при СД2, мы планируем проводить анализ в соответствии с протоколом. Только субъекты, получившие не менее 80 % запланированных доз в течение не менее 80 % времени, будут считаться пролеченными в соответствии с протоколом.

Необработанные данные будут введены в статистическое программное обеспечение (Статистический пакет для социальных наук), версия SPSS 16.5 (Чикаго, Иллинойс, США). Подготовка набора данных будет выполнена до проведения анализа. Будет проведена описательная статистика; частоты будут представлены в процентах (%). Непрерывные переменные будут представлены как среднее ± стандартное отклонение. Переменные, демонстрирующие негауссовские переменные, будут преобразованы перед анализом. Ковариационный анализ с повторными измерениями (ANCOVA) будет использоваться для сравнения групп, который будет представлять собой комбинацию дисперсионного анализа (ANOVA) и линейной регрессии. Вмешивающиеся и фиксированные переменные, такие как возраст и пол, а также ИМТ, будут использоваться, если надлежащее соответствие не было достигнуто до повторных измерений. Для множественных сравнений будут сделаны апостериорные поправки Банджамини-Хоберга. Для сравнения двух групп будет проведен независимый Т-критерий для непрерывных переменных и Манна-Уитни для непрерывных переменных. Анализ нежелательных явлений (если таковые имеются) будет проводиться с использованием критерия Хи-квадрат и точного критерия Фишера с учетом предположений о случайности, независимости и размере. Значимость будет установлена ​​на уровне p < 0,05.