Studie zur Untersuchung der Auswirkungen von Probiotika auf den Endotoxinspiegel bei Typ-2-Diabetes-Mellitus-Patienten

Design

In dieser 26-wöchigen, monozentrischen, doppelblinden, randomisierten, placebokontrollierten Studie werden 60 Patienten mit T2DM mit Probiotika und 60 mit Placebo behandelt. Interventionen werden in den Wochen 0, 4, 8, 12 und 26 von allen Fächern durchgeführt. Patienten der Probiotika-Gruppe erhalten Kapseln mit vier gefriergetrockneten Bakterienstämmen, nämlich Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Bifidobacterium bifidum und Streptococcus thermophiles (Bio-plus®, Supherb, Israel), in einer Tagesdosis von 2 × 1010 KBE. Die Teilnehmer der Placebogruppe erhalten Kapseln mit nicht fermentierbaren Ballaststoffen auf Weizenbasis, wie sie in einer anderen klinischen Studie verwendet wurden [Pereg et al, 2011].

Rekrutierung von Patienten

Die Rekrutierung von Patienten für diese Studie wird durch die Zusammenarbeit mit Primärversorgungszentren in ganz Riad und dem Biomarkers Research Program des College of Science der King Saud University ermöglicht.

Einschlusskriterien

• Stabiles und gut kontrolliertes T2DM (HbA1c < 7,5 % und keine Änderung der oralen Antidiabetika in den letzten 6 Monaten)
• Alter 20-75 Jahre
• Bereitstellung einer schriftlichen Einverständniserklärung

Ausschlusskriterien

• Chronische Magen-Darm-Erkrankung (außer Reizdarmsyndrom)
• Systemische Antibiotika innerhalb von 6 Wochen vor Aufnahme
• Verwendung von Probiotika innerhalb von 3 Monaten vor der Aufnahme (Anhang A listet Produkte auf, die derzeit international vermarktet werden und in Saudi-Arabien erhältlich sind)
• Regelmäßige Einnahme von Insulin oder Insulinanaloga, Antibiotika oder Probiotika, Antazida, H2-Rezeptorblockern, Protonenpumpenhemmern, Loperamid, Cholestryramin, ω3-Ergänzungen, Fibraten, Kortikosteroiden oder Sexualsteroiden
• Täglicher Alkoholkonsum > 30 g
• Signifikante Immunschwäche
• Bekannte Herzklappenerkrankung
• Stillen oder schwanger
• Nicht-arabische Ethnizität
• Teilnahme an einer anderen klinischen Studie innerhalb der letzten 6 Monate
• Rechtsunfähigkeit

Zuordnung zur Behandlung

Nach Bestätigung der Eignung und Einholung der schriftlichen Einverständniserklärung erhalten die Patienten vom Probiotika-Unternehmen, das auch die Randomisierung (stratifiziert nach Geschlecht) durchführt, eine eindeutige Probandennummer Behandlung erhalten. Die in Frage kommenden Patienten werden (1:1) einer 26-wöchigen Behandlung mit entweder dem Probiotika-Ergänzungsmittel oder Placebo zugeteilt. Die Probanden werden angewiesen

• 1 Kapsel vor dem Frühstück und 1 Kapsel vor dem Abendessen einnehmen, entweder direkt oder in handelsüblichen Joghurt gemischt.
• Die Kapseln werden nach dem Öffnen des Glases im Kühlschrank aufbewahrt.

Datenverarbeitung und Aufzeichnungen

Das Fallberichtsformular (CRF) wird verwendet, um Daten für alle Teilnehmer aufzuzeichnen, und wird von der Forschungskrankenschwester ausgefüllt, die die Daten auch in eine elektronische Datenbank eingibt.

Studienablauf und -ort

Nach der Aufnahme werden alle weiteren Behandlungen in dem Primärversorgungszentrum durchgeführt, in dem der Proband rekrutiert wurde (siehe Anhang C für geplante Besuche). Eine Forschungskrankenschwester und ein Forschungsernährungsberater sind für den gesamten Kontakt mit Patienten verantwortlich. Bei Problemen stehen dem Forschungsteam zugeordnete Ärzte zur Verfügung.

Erfassung klinischer Daten und Bewertung der Compliance

• Die Krankengeschichte, einschließlich des Vorhandenseins chronischer Krankheiten, regelmäßiger Medikation, Rauch- und Alkoholgewohnheiten, wird vor der Aufnahme aufgezeichnet.
• Die Ernährungsgewohnheiten werden anhand eines standardisierten 14-tägigen Recall-Fragebogens erhoben, der mit einem Ernährungsberater besprochen wird
• Änderungen der Medikation während des Studienzeitraums werden aufgezeichnet
• Anthropometrische Messungen werden mit standardisierten Methoden durchgeführt. Die Körpergröße wird zu Beginn der Behandlung gemessen. Gewicht (in leichter Kleidung ohne Schuhe oder Gegenstände in Taschen), Taillenumfang (gemessen als horizontale Ebene auf Höhe des Nabels) und Hüftumfang (gemessen als horizontale Ebene auf Höhe des Trochanter major) werden am gemessen Beginn und Ende der Behandlung.
• Eine Ultraschalluntersuchung der Leber wird entweder beim Screening oder zu Beginn der Behandlung durchgeführt, um das Vorhandensein oder Fehlen einer hellen Leber festzustellen, die auf eine Steatose hinweist. Patienten mit Fettleber und Lebertransaminasen > 1,5 × der oberen Normgrenze wird eine Überweisung an einen Hepatologen angeboten.
• Die Einhaltung wird in den Wochen 4, 8, 12 und 26 überwacht. Die Patienten bringen ihre zuvor erhaltenen Kapseln zum Primärversorgungszentrum, um die durchschnittliche Anzahl der pro Tag eingenommenen Kapseln zu berechnen.

Erfassung routinemäßiger biochemischer Daten und biologischer Proben

• Die erhaltenen Blutproben werden im Rahmen des Biomarker-Forschungsprogramms analysiert, um die Werte von Glukose, HbA1c, Insulin, C-Peptid, Gesamtcholesterin, HDL-Cholesterin, LDL-Cholesterin, Triglyceriden, Alanin-Aminotransferase und Aspartat-Aminotransferase zu messen.
• Nüchternblutproben werden in Woche 0, 8 und 26 entnommen. Peripheres venöses Blut wird ohne Antikoagulans in pyrogenfreie Röhrchen aufgezogen. Die Röhrchen werden sofort in Eis gelegt, koagulieren gelassen und innerhalb von 2 Stunden nach der Entnahme zentrifugiert (2500 × g für 10 min bei 4 °C). Serumproben werden bis zur Verwendung bei -80 °C gelagert. Zu jedem Zeitpunkt werden mindestens zwei 2-ml-Serumproben entnommen.
• Stuhlproben werden genommen, indem die Patienten gebeten werden, die Probe in einem verschließbaren Plastikbeutel in ihrem Gefrierschrank aufzubewahren, bis sie in die Klinik gebracht werden. (Probenentnahme an denselben Stellen, an denen sie für Blutentnahmen angefordert werden. In der Klinik angekommen, werden die Proben geteilt, schockgefroren und bei -80 °C gelagert. Veränderungen in der Darmmikrobiota werden mithilfe von signaturmarkierter Sequenzierung (Pyrosequencing) von amplifizierten 16S-rRNA-Genen, gefolgt von einer automatisierten bioinformatischen Analyse, profiliert. Gezielte RT-PCR wird auch verwendet, um Bakterienarten wie Enterobakterien und Bifdobakterien im Vergleich zum universellen Bakterien-Primer-Set zu untersuchen. Pyrosequenzierung und RT-PCR werden in einer Subkohorte (n = 15) von Patienten unter Berücksichtigung der endgültigen systemischen Befunde durchgeführt. Die Proben werden für spätere Studien aufbewahrt.

Betreff Widerruf

Die Probanden können jederzeit auf eigenen Wunsch oder nach Ermessen des Prüfarztes aus Sicherheits-, Verhaltens- oder Verwaltungsgründen aus der Studie ausscheiden. Die Fächer werden auch vom Studium ausgeschlossen bei:

• Behandlung mit systemischen Antibiotika für > 1 Woche in Woche 0-22
• Jegliche Anwendung von systemischen Antibiotika in Woche 22-26

Patientensicherheit

Nebenwirkungen

Unerwünschte Ereignisse (AEs) sind unerwünschte Anzeichen oder Symptome, die während der Studie auftreten und möglicherweise in ursächlichem Zusammenhang mit der Behandlung stehen. Alle UEs, die als möglicherweise, wahrscheinlich oder definitiv mit dem Testprodukt in Zusammenhang stehend betrachtet werden, werden auf CRFs aufgezeichnet.

Schwerwiegende unerwünschte Ereignisse

Schwerwiegende unerwünschte Ereignisse (SAE) sind definiert als Ereignisse, die tödlich, lebensbedrohlich, behindernd oder handlungsunfähig sind oder zu einem Krankenhausaufenthalt führen oder den Krankenhausaufenthalt verlängern oder zu Fehlbildungen führen. Alle SUE werden im CRF erfasst, unabhängig davon, ob sie mit dem Testprodukt zusammenhängen oder nicht. Laut früheren Studien (9) sind Probiotika sehr sicher, und alle SAE, die möglicherweise, wahrscheinlich oder definitiv mit dem Testprodukt zusammenhängen, werden als unerwartet angesehen. Alle unerwarteten SUEs werden unverzüglich der Medicines and Healthcare Products Regulatory Agency (MHRA) gemeldet. Alle SAE, die mit dem Test in Zusammenhang stehen könnten, führen sofort zum Abbruch des Testprodukts.

Ethische und regulatorische Aspekte

Die Studie wird in Übereinstimmung mit dem Protokoll und den ethischen Grundsätzen durchgeführt, die ihren Ursprung in der Deklaration von Helsinki sowie in den Leitlinien zur Guten Klinischen Praxis des International Council for Harmonisation haben. Diese Dokumente besagen, dass die informierte Zustimmung der Probanden eine wesentliche Voraussetzung für die Teilnahme an der klinischen Studie ist. Die Studie beginnt erst nach Erhalt der Genehmigung durch die örtliche Ethikkommission des College of Medicine Research Center der King Saud University.

Planen Sie Datenanalysen

Da diese Studie darauf ausgelegt ist, die physiologischen Wirkungen zu bewerten, anstatt klinische Indikationen für die Behandlung mit Probiotika bei T2DM zu unterstützen, planen wir, Per-Protocol-Analysen durchzuführen. Nur Patienten, die mindestens 80 % der Zeit mit mindestens 80 % der geplanten Dosen behandelt wurden, werden gemäß Protokoll behandelt.

Rohdaten werden in eine Statistiksoftware (Statistical Package for the Social Sciences), SPSS Version 16.5 (Chicago, IL, USA) eingegeben. Die Vorbereitung des Datensatzes erfolgt vor den Analysen. Es werden deskriptive Statistiken erstellt; Häufigkeiten werden in Prozent (%) dargestellt. Kontinuierliche Variablen werden als Mittelwert ± Standardabweichung dargestellt. Variablen, die nicht-Gaußsche Variablen aufweisen, werden vor der Analyse transformiert. Die Analyse der Kovarianz mit wiederholten Messungen (ANCOVA) wird verwendet, um Gruppen zu vergleichen, die eine Kombination aus Varianzanalyse (ANOVA) und linearer Regression darstellen. Verwirrende und feste Variablen wie Alter und Geschlecht sowie der BMI werden verwendet, wenn vor wiederholten Messungen kein ordnungsgemäßer Abgleich erreicht wurde. Post-hoc-Banjamini-Hohberg-Korrekturen werden für Mehrfachvergleiche durchgeführt. Zum Vergleich von 2 Gruppen wird ein unabhängiger T-Test für kontinuierliche Variablen und ein Mann-Whitney-Test für nicht kontinuierliche Variablen durchgeführt. Die Analyse unerwünschter Ereignisse (falls vorhanden) erfolgt unter Verwendung des Chi-Quadrat-Tests und des exakten Tests nach Fisher unter Annahme von Zufälligkeit, Unabhängigkeit und Größe. Die Signifikanz wird auf p < 0,05 gesetzt.