Undersøgelse for at udforske virkningerne af probiotika på endotoksinniveauer hos type 2-diabetes mellituspatienter

Design

I denne 26-ugers, enkelt-center, dobbeltblinde, randomiserede, placebo-kontrollerede undersøgelse vil 60 patienter med T2DM blive behandlet med probiotika og 60 vil blive behandlet med placebo. Interventioner vil blive udført i uge 0, 4, 8, 12 og 26 fra alle fag. Patienter allokeret til probiotikagruppen vil modtage kapsler indeholdende fire stammer af frysetørrede bakterier, nemlig Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Bifidobacterium bifidum og Streptococcus thermophiles (Bio-plus®, Supherb, Israel), i en daglig dosis på 1 × 10102 CFU. Deltagerne i placebogruppen vil modtage kapsler, der indeholder hvedebaserede ikke-fermenterbare fibre, som brugt i et andet klinisk forsøg [Pereg et al, 2011].

Rekruttering af patienter

Rekruttering af patienter til denne undersøgelse vil blive muliggjort gennem samarbejde med primære plejecentre i hele Riyadh og Biomarkers Research Program, College of Science, King Saud University.

Inklusionskriterier

• Stabil og velkontrolleret T2DM (HbA1c < 7,5 % og ingen ændring i oral antidiabetisk medicin i løbet af de sidste 6 måneder)
• Alder 20-75 år
• Afgivelse af skriftligt informeret samtykke

Eksklusionskriterier

• Kronisk mave-tarmsygdom (undtagen IBS)
• Systemiske antibiotika inden for 6 uger før inklusion
• Brug af probiotika inden for 3 måneder før inklusion (bilag A viser produkter, der i øjeblikket markedsføres internationalt og kan købes i Saudi-Arabien)
• Regelmæssig indtagelse af insulin eller insulinanaloger, antibiotika eller probiotika, antacida, H2-receptorblokkere, protonpumpehæmmere, loperamid, cholestryramin, ω3 kosttilskud, fibrater, kortikosteroider eller kønssteroider
• Dagligt alkoholforbrug > 30 g
• Betydelig immundefekt
• Kendt hjerteklapsygdom
• Ammende eller gravid
• Ikke-arabisk etnicitet
• Deltagelse i et andet klinisk forsøg inden for de sidste 6 måneder
• Juridisk manglende evne

Tildeling til behandling

Efter bekræftelse af berettigelse og indhentet skriftligt informeret samtykke vil patienterne få et unikt emnenummer af probiotikavirksomheden, som også vil udføre randomiseringen (stratificeret for køn). Patienterne og klinikerne på det primære plejecenter vil blive blindet for modtaget behandling. De berettigede patienter vil blive allokeret (1:1) til behandling i 26 uger med enten probiotikatilskud eller placebo. Emner vil blive instrueret til

• Indtag 1 kapsel før morgenmad og 1 kapsel før aftensmaden, enten direkte eller blandet i standardyoghurt.
• Kapslerne vil blive opbevaret i køleskabet, efter at glasset er blevet åbnet.

Datahåndtering og registrering

Case report form (CRF) vil blive brugt til at registrere data for alle deltagere, og vil blive udfyldt af forskningssygeplejersken, som også vil indtaste dataene i en elektronisk database.

Studietidsplan og sted

Efter inklusion vil alle yderligere behandlinger blive styret på det primære plejecenter, hvor forsøgspersonen blev rekrutteret (se bilag C for planlagte besøg). En forskningssygeplejerske og en forskningsdiætist vil stå for al kontakt med patienterne. Læger tilknyttet forskerholdet vil være til rådighed, hvis der opstår problemer.

Indhentning af kliniske data og vurdering af compliance

• Sygehistorie, herunder tilstedeværelse af kroniske sygdomme, regelmæssig medicinering, ryge- og alkoholvaner, vil blive registreret før inklusion.
• Ernæringsvaner vil blive vurderet ved hjælp af et standardiseret 14-dages tilbagekaldelsesspørgeskema, som vil blive drøftet med en diætist
• Ændringer i medicin i løbet af undersøgelsesperioden vil blive registreret
• Antropometriske målinger vil blive udført ved hjælp af standardiserede metoder. Højden vil blive målt ved starten af ​​behandlingen. Vægt (i let tøj uden sko eller genstande i lommer), taljeomkreds (målt som et vandret plan i niveau med navlen) og hofteomkreds (målt som et vandret plan i niveau med trochanter major) vil blive målt ved start og afslutning af behandlingen.
• Leverultralyd vil blive udført enten ved screening eller i starten af ​​behandlingen for at bestemme tilstedeværelsen eller fraværet af en lys lever, der indikerer steatose. Patienter med fedtlever og levertransaminaser > 1,5 × den øvre normalgrænse vil blive tilbudt henvisning til en hepatolog.
• Overholdelse vil blive overvåget i uge 4, 8, 12 og 26. Patienterne vil bringe deres tidligere modtagne kapsler til det primære plejecenter for at beregne det gennemsnitlige antal kapsler, der indtages pr. dag.

Indsamling af rutinemæssige biokemiske data og biologiske prøver

• De opnåede blodprøver vil blive analyseret ved Biomarkers Research Program for at måle niveauer af glucose, HbA1c, insulin, C-peptid, total kolesterol, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, triglycerider, alaninaminotransferase og aspartataminotransferase.
• Fastende blodprøver vil blive udtaget i uge 0, 8 og 26. Perifert veneblod vil blive trukket ind i pyrogenfrie rør uden antikoagulant. Rørene placeres straks i is, får lov til at koagulere og centrifugeres (2500 xg i 10 minutter ved 4°C) inden for 2 timer efter opsamling. Serumprøver vil blive opbevaret ved -80°C indtil brug. Mindst to 2-ml serumprøver vil blive indsamlet på hvert tidspunkt.
• Afføringsprøver vil blive taget ved at bede patienterne om at opbevare prøven i en plastpose, der kan forsegles i deres fryser, indtil overførsel til klinikken. (prøver taget på de samme steder, som de anmodes om til blodprøver. Når de er på klinikken, vil prøverne blive delt, lynfrosset og opbevaret ved -80°C. Ændringer i tarmmikrobiota vil blive profileret ved hjælp af signaturmærket sekventering (pyrosequencing) af amplificerede 16S rRNA-gener efterfulgt af automatiseret bioinformatikanalyse. Målrettet RT-PCR vil også blive brugt til at undersøge bakteriearter såsom Enterobacteria og Bifdobacteria i forhold til det universelle bakterielle primersæt. Pyrosequencing og RT-PCR vil blive udført i en sub-kohorte (n=15) af patienter under hensyntagen til de endelige systemiske fund. Prøver vil blive opbevaret til efterfølgende undersøgelser.

Emne tilbagetrækning

Forsøgspersoner kan trække sig tilbage fra retssagen til enhver tid efter eget ønske, eller de kan trækkes tilbage til enhver tid efter efterforskerens skøn af sikkerhedsmæssige, adfærdsmæssige eller administrative årsager. Emnerne vil også blive trukket tilbage fra undersøgelsen i tilfælde af:

• Behandling med systemisk antibiotika i > 1 uge i uge 0-22
• Enhver brug af systemisk antibiotika i uge 22-26

Patientsikkerhed

Uønskede hændelser

Uønskede hændelser (AE'er) er uønskede tegn eller symptomer, der opstår under undersøgelsen og kan være årsagsrelaterede til behandlingen. Alle AE'er, der anses for muligvis, sandsynligvis eller helt sikkert relateret til testproduktet, vil blive registreret på CRF'er.

Alvorlige uønskede hændelser

Alvorlige bivirkninger (SAE) er defineret som hændelser, der er fatale, livstruende, invaliderende, invaliderende eller resulterer i hospitalsindlæggelse eller forlænger hospitalsophold eller resulterer i misdannelser. Alle SAE'er vil blive registreret i CRF, uanset om de er relateret til testproduktet eller ej. Ifølge tidligere undersøgelser (9) er probiotika meget sikre, og enhver SAE, der muligvis, sandsynligvis eller helt sikkert er relateret til testproduktet, vil blive betragtet som uventet. Alle uventede SAE'er vil straks blive rapporteret til Medicines and Healthcare Products Regulatory Agency (MHRA). Enhver SAE, der kan være relateret til testen, vil øjeblikkeligt føre til afbrydelse af testproduktet.

Etiske og regulatoriske aspekter

Undersøgelsen vil blive udført i overensstemmelse med protokollen og de etiske principper, der har deres oprindelse i Helsinki-erklæringen samt med International Council for Harmonization Guidance on Good Clinical Practice. Disse dokumenter angiver, at forsøgspersoners informerede samtykke er en væsentlig forudsætning for deltagelse i den kliniske undersøgelse. Undersøgelsen vil først påbegyndes efter at have opnået godkendelse fra det lokale etiske bedømmelsesudvalg ved College of Medicine Research Center, King Saud University.

Plan for dataanalyser

Da dette forsøg er designet til at vurdere de fysiologiske effekter i stedet for at understøtte kliniske indikationer for behandling med probiotika i T2DM, planlægger vi at udføre pr. protokol analyser. Kun forsøgspersoner behandlet med mindst 80 % af de planlagte doser i mindst 80 % af tiden vil blive betragtet som behandlet efter protokol.

Rådata vil blive indtastet i en statistisk software (Statistical Package for the Social Sciences), SPSS version 16.5 (Chicago, IL, USA). Udarbejdelse af datasæt vil blive udført forud for analyser. Der vil blive lavet beskrivende statistikker; frekvenser vil blive præsenteret i procent (%). Kontinuerlige variable vil blive præsenteret som middel ± standardafvigelse. Variabler, der udviser ikke-Gaussiske variabler, vil blive transformeret før analyser. Analyse af kovarians med gentagne mål (ANCOVA) vil blive brugt til at sammenligne grupper, som vil repræsentere en kombination af variansanalyse (ANOVA) og lineær regression. Forstyrrende og faste variabler såsom alder og køn samt BMI vil blive taget, hvis korrekt matchning ikke er opnået forud for gentagne målinger. Post-hoc Banjamini-Hohberg korrektioner vil blive udført for flere sammenligninger. Til sammenligning af 2 grupper vil der blive udført uafhængig T-test for kontinuerte variable og Mann-Whitney for ikke-kontinuerlige variable. Analyse af uønskede hændelser (hvis nogen) vil blive udført ved hjælp af Chi-Square test og Fishers eksakte test efter antagelser om tilfældighed, uafhængighed og størrelse. Signifikansen vil blive sat til p < 0,05.