Tanulmány a probiotikumok endotoxinszintre gyakorolt ​​hatásának feltárására 2-es típusú cukorbetegségben szenvedő betegeknél

Tervezés

Ebben a 26 hetes, egyközpontos, kettős vak, randomizált, placebo-kontrollos vizsgálatban 60 T2DM-ben szenvedő beteget kezelnek probiotikumokkal és 60-at placebóval. A beavatkozásokat a 0., 4., 8., 12. és 26. héten kell elvégezni minden tantárgyból. A probiotikumok csoportjába besorolt ​​betegek négy fagyasztva szárított baktériumtörzset, nevezetesen Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Bifidobacterium bifidum és Streptococcus thermophiles (Bio-plus®, Supherb, Izrael) tartalmazó kapszulákat kapnak napi 10102 × 0102-es adagban. CFU. A placebo-csoport résztvevői búzaalapú, nem fermentálható rostokat tartalmazó kapszulákat kapnak, amint azt egy másik klinikai vizsgálatban is használták [Pereg et al, 2011].

Betegek toborzása

A betegek bevonása ebbe a vizsgálatba a Rijád-szerte működő alapellátási központokkal és a Szaúd Király Egyetem Tudományos Kollégiumának Biomarkers Kutatási Programjával való együttműködés révén válik lehetővé.

Befogadási kritériumok

• Stabil és jól kontrollált T2DM (HbA1c < 7,5%, és nem változott az orális antidiabetikus gyógyszerek az elmúlt 6 hónapban)
• Életkor 20-75 év
• Írásbeli tájékoztatáson alapuló beleegyezés megadása

Kizárási kritériumok

• Krónikus gyomor-bélrendszeri betegség (kivéve IBS)
• Szisztémás antibiotikumok a felvétel előtt 6 héten belül
• A probiotikumok felhasználása a felvételt megelőző 3 hónapon belül (az A melléklet felsorolja a jelenleg nemzetközileg forgalmazott és Szaúd-Arábiában megvásárolható termékeket)
• Inzulin vagy inzulinanalógok, antibiotikumok vagy probiotikumok, antacidok, H2-receptor-blokkolók, protonpumpa-gátlók, loperamid, kolesztiramin, ω3-kiegészítők, fibrátok, kortikoszteroidok vagy szexszteroidok rendszeres bevitele
• Napi alkoholfogyasztás > 30 g
• Jelentős immunhiány
• Ismert szívbillentyű-betegség
• Szoptató vagy terhes
• Nem arab etnikum
• Részvétel egy másik klinikai vizsgálatban az elmúlt 6 hónapban
• Jogi cselekvőképtelenség

A kezeléshez való hozzárendelés

A jogosultság megerősítése és az írásos beleegyező nyilatkozat megszerzése után a betegek egyedi alanyszámot kapnak a probiotikumokat gyártó cégtől, aki elvégzi a randomizálást is (nemre rétegezve). kezelésben részesült. A jogosult betegeket (1:1) 26 hétig probiotikum-kiegészítővel vagy placebóval kezelik. Az alanyok utasítást kapnak

• Fogyasszon 1 kapszulát reggeli előtt és 1 kapszulát vacsora előtt, közvetlenül vagy normál joghurtba keverve.
• A kapszulákat az edény felnyitása után hűtőszekrényben kell tárolni.

Adatkezelés és nyilvántartás

Az esetjelentés űrlapon (CRF) rögzítik majd az összes résztvevő adatait, és a kutatónővér tölti ki, aki az adatokat egy elektronikus adatbázisba is beviszi.

Tanulmányi időrend és helyszín

A felvételt követően minden további kezelést abban az alapellátási központban kezelnek, ahol az alanyt toborozták (lásd a C. mellékletet a tervezett látogatásokról). Egy kutatónővér és egy kutató dietetikus lesz felelős a betegekkel való minden kapcsolatért. A kutatócsoporthoz tartozó orvosok rendelkezésre állnak, ha problémák merülnek fel.

Klinikai adatok beszerzése és a megfelelőség értékelése

• A kórtörténetet, beleértve a krónikus betegségek jelenlétét, a rendszeres gyógyszeres kezelést, a dohányzási és alkoholfogyasztási szokásokat, a felvétel előtt rögzítik.
• A táplálkozási szokásokat egy szabványos, 14 napos visszahívási kérdőív segítségével értékeljük, amelyet dietetikussal beszélünk meg.
• A vizsgálati időszak alatt a gyógyszeres kezelésben bekövetkezett változásokat rögzítjük
• Az antropometriai méréseket szabványosított módszerekkel végezzük. A magasságot a kezelés kezdetén mérik. A súly (könnyű ruházatban, cipő vagy zsebben lévő tárgyak nélkül), a derékkörfogatot (vízszintes síkban a köldök szintjén mérve) és a csípő kerületét (vízszintes síkban a trochanter major szintjén mérve) a a kezelés kezdete és vége.
• Máj ultrahangvizsgálatot végeznek a szűréskor vagy a kezelés kezdetén, hogy megállapítsák a steatosisra utaló fényes máj jelenlétét vagy hiányát. Azok a betegek, akiknél a zsírmáj és a máj transzamináz szintje meghaladja a normálérték felső határának 1,5-szeresét, hepatológushoz fordulnak.
• A megfelelést a 4., 8., 12. és 26. héten fogják ellenőrizni. A betegek a korábban kapott kapszuláikat beviszik az alapellátási központba, hogy kiszámítsák a naponta bevitt kapszulák átlagos számát.

Rutin biokémiai adatok és biológiai minták beszerzése

• A kapott vérmintákat a Biomarkers Research Programban elemzik a glükóz, HbA1c, inzulin, C-peptid, összkoleszterin, HDL-koleszterin, LDL-koleszterin, trigliceridek, alanin-aminotranszferáz és aszpartát-aminotranszferáz szintjének mérése céljából.
• Az éhgyomri vérmintákat a 0., 8. és 26. héten veszik. A perifériás vénás vért pirogénmentes csövekbe szívják, antikoaguláns nélkül. A csöveket azonnal jégbe helyezzük, hagyjuk megalvadni, és a begyűjtést követő 2 órán belül centrifugáljuk (2500 × g 10 percig 4 °C-on). A szérummintákat felhasználásig -80°C-on tároljuk. Minden időpontban legalább két 2 ml-es szérummintát vesznek.
• A székletmintát úgy veszik, hogy megkérik a betegeket, hogy a mintát egy lezárható műanyag zacskóban tárolják a fagyasztójukban, amíg a klinikára szállítják. (a mintákat ugyanazokon a pontokon veszik, ahol a vérvételhez kérik. A klinikán a mintákat szétosztják, gyorsfagyasztják és -80°C-on tárolják. A bélmikrobióta változásait az amplifikált 16S rRNS gének aláírás-címkézett szekvenálása (piroszekvenálás) segítségével profilozzák, amelyet automatizált bioinformatikai elemzés követ. A célzott RT-PCR-t a baktériumfajok, például az Enterobacteria és a Bifdobacteria vizsgálatára is használják az univerzális bakteriális primerkészlethez képest. A piroszekvenálást és az RT-PCR-t a betegek egy alcsoportjában (n=15) végezzük, figyelembe véve a végső szisztémás eredményeket. A mintákat a későbbi vizsgálatokhoz megőrzik.

Tárgy visszavonása

A vizsgálati alanyok saját kérelmükre bármikor kiléphetnek a vizsgálatból, illetve biztonsági, magatartási vagy adminisztratív okokból a vizsgáló döntése alapján bármikor visszavonhatók. Az alanyokat akkor is kivonják a vizsgálatból, ha:

• Szisztémás antibiotikum kezelés > 1 hétig a 0-22. héten
• Bármilyen szisztémás antibiotikum-használat a 22-26. héten

Betegbiztonság

Mellékhatások

A nemkívánatos események (AE) nemkívánatos jelek vagy tünetek, amelyek a vizsgálat során jelentkeznek, és lehet, hogy ok-okozati összefüggésben állnak a kezeléssel. Minden lehetséges, valószínűnek vagy határozottan a teszttermékhez kapcsolódó AE rögzítésre kerül a CRF-eken.

Súlyos nemkívánatos események

Súlyos nemkívánatos események (SAE) olyan események, amelyek halálos kimenetelűek, életveszélyesek, fogyatékosságot okoznak, cselekvőképtelenné teszik, vagy kórházi kezelést vagy kórházi tartózkodás meghosszabbítását, illetve fejlődési rendellenességet eredményeznek. Minden SAE rögzítésre kerül a CRF-ben, függetlenül attól, hogy kapcsolódnak-e a teszttermékhez vagy sem. Korábbi tanulmányok szerint (9) a probiotikumok nagyon biztonságosak, és minden olyan SAE, amely esetleg, valószínűleg vagy határozottan összefügg a teszttermékkel, váratlannak minősül. Minden váratlan SAE-t azonnal jelentenek a Gyógyszer- és Egészségügyi Termékszabályozási Ügynökségnek (MHRA). Bármilyen, a teszttel kapcsolatos SAE azonnal a teszttermék leállításához vezet.

Etikai és szabályozási szempontok

A vizsgálatot a Helsinki Nyilatkozatból, valamint a Nemzetközi Harmonizációs Tanács a Helyes Klinikai Gyakorlatra vonatkozó útmutatójából eredeztethető protokollnak és etikai elveknek megfelelően hajtják végre. Ezek a dokumentumok kimondják, hogy az alanyok tájékozott beleegyezése elengedhetetlen előfeltétele a klinikai vizsgálatban való részvételnek. A vizsgálat csak azután kezdődik, hogy megkapta a jóváhagyást a King Saud Egyetem Orvostudományi Kutatóközpontjának helyi etikai felülvizsgálati bizottságától.

Tervezze meg az adatelemzéseket

Mivel ezt a vizsgálatot a fiziológiai hatások felmérésére tervezték, nem pedig a probiotikumokkal való kezelés klinikai indikációinak alátámasztására a T2DM-ben, ezért a protokoll szerinti elemzéseket tervezzük. Csak azokat az alanyokat tekintik kezeltnek, akiket a tervezett dózisok legalább 80%-ával az idő legalább 80%-án keresztül kezeltek.

A nyers adatokat egy statisztikai szoftverbe (Statistical Package for the Social Sciences), SPSS 16.5 verzió (Chicago, IL, USA) kell bevinni. Az adatsor elkészítése az elemzések előtt történik. Leíró statisztikák készülnek; a gyakoriságok százalékban (%) lesznek megadva. A folytonos változók átlag ± szórásként jelennek meg. A nem Gauss-féle változókat mutató változókat az elemzések előtt transzformáljuk. A csoportok összehasonlítására a kovariancia ismételt mérési analízisét (ANCOVA) használjuk, amely a varianciaanalízis (ANOVA) és a lineáris regresszió kombinációját képviseli. Zavarba ejtő és rögzített változókat, például életkort és nemet, valamint BMI-t kell figyelembe venni, ha az ismételt intézkedések előtt nem sikerült megfelelő egyezést elérni. Post-hoc Banjamini-Hohberg korrekciókat hajtanak végre többszörös összehasonlításhoz. A két csoport összehasonlításához független T-tesztet kell végezni a folytonos változókra, és Mann-Whitney-t a nem folytonos változókra. A nemkívánatos események elemzését (ha vannak) Chi-négyzet teszttel és Fisher-féle egzakt teszttel kell elvégezni, a véletlenszerűség, függetlenség és méret feltételezéseit követve. A szignifikancia értéke p < 0,05.