Tutkimus probioottien vaikutuksista endotoksiinitasoihin tyypin 2 diabetespotilailla

Design

Tässä 26-viikkoisessa yksikeskuksessa, kaksoissokkoutetussa, satunnaistetussa, lumekontrolloidussa tutkimuksessa 60 T2DM-potilasta hoidetaan probiooteilla ja 60 lumelääkettä. Interventiot tehdään viikoilla 0, 4, 8, 12 ja 26 kaikista aiheista. Probioottiryhmään kuuluvat potilaat saavat kapseleita, jotka sisältävät neljä pakastekuivattua bakteerikantaa, nimittäin Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Bifidobacterium bifidum ja Streptococcus thermophiles (Bio-plus®, Supherb, Israel), vuorokausiannoksena 1010 × 10102 × CFU. Lumeryhmän osallistujat saavat kapseleita, jotka sisältävät vehnäpohjaisia ​​ei-fermentoituvia kuituja, kuten käytettiin toisessa kliinisessä tutkimuksessa [Pereg et al, 2011].

Potilaiden rekrytointi

Potilaiden rekrytoinnin tähän tutkimukseen mahdollistaa yhteistyö perusterveydenhuollon keskusten kanssa kaikkialla Riadissa ja Biomarkers Research Program, College of Science, King Saud University.

Sisällyttämiskriteerit

• Stabiili ja hyvin hallinnassa oleva T2DM (HbA1c < 7,5 % ja ei muutosta suun kautta otettavissa diabeteslääkkeissä viimeisen 6 kuukauden aikana)
• Ikä 20-75 vuotta
• Kirjallisen tietoisen suostumuksen antaminen

Poissulkemiskriteerit

• Krooninen ruoansulatuskanavan sairaus (paitsi IBS)
• Systeemiset antibiootit 6 viikon sisällä ennen sisällyttämistä
• Probioottien käyttö 3 kuukauden sisällä ennen sisällyttämistä (liitteessä A luetellaan tuotteet, joita tällä hetkellä markkinoidaan kansainvälisesti ja jotka ovat ostettavissa Saudi-Arabiassa)
• Säännöllinen insuliinin tai insuliinianalogien, antibioottien tai probioottien, antasidien, H2-reseptorin salpaajien, protonipumpun estäjien, loperamidin, kolestryramiinin, ω3-lisäaineiden, fibraattien, kortikosteroidien tai sukupuolisteroidien nauttiminen
• Päivittäinen alkoholinkulutus > 30 g
• Merkittävä immuunipuutos
• Tunnettu sydänläppäsairaus
• Imetys tai raskaana oleva
• Ei-arabialainen etnisyys
• Osallistuminen toiseen kliiniseen tutkimukseen viimeisen 6 kuukauden aikana
• Oikeudellinen toimintakyvyttömyys

Määräraha hoitoon

Kelpoisuuden vahvistamisen ja kirjallisen tietoisen suostumuksen saamisen jälkeen probioottiyhtiö antaa potilaille yksilöllisen aihenumeron, joka myös suorittaa satunnaistuksen (sukupuolen mukaan). Potilaat ja lääkärit perusterveydenhuollossa sokeutuvat saanut hoitoa. Sopivat potilaat jaetaan (1:1) hoitoon 26 viikon ajan joko probiootilla tai lumelääkeellä. Tutkittavia opastetaan

• Nauti 1 kapseli ennen aamiaista ja 1 kapseli ennen ilta-ateriaa joko suoraan tai tavalliseen jogurttiin sekoitettuna.
• Kapselit säilytetään jääkaapissa purkin avaamisen jälkeen.

Tietojen käsittely ja kirjaaminen

Kaikkien osallistujien tiedot tallennetaan tapausraporttilomakkeelle (CRF), jonka täyttää tutkimussairaanhoitaja, joka syöttää tiedot myös sähköiseen tietokantaan.

Opiskeluaikataulu ja -paikka

Sisällytyksen jälkeen kaikki muut hoidot hoidetaan perusterveydenhuollon keskuksessa, johon tutkittava on rekrytoitu (katso liite C aikataulutetut käynnit). Tutkimussairaanhoitaja ja tutkimusravitsemusterapeutti vastaavat kaikesta yhteydenpidosta potilaisiin. Tutkimusryhmään liittyvät lääkärit ovat käytettävissä, jos ongelmia ilmenee.

Kliinisten tietojen hankinta ja vaatimustenmukaisuuden arviointi

• Sairaushistoria, mukaan lukien krooniset sairaudet, säännölliset lääkitykset, tupakointi- ja alkoholitottumukset, kirjataan ennen sisällyttämistä.
• Ravintotottumuksia arvioidaan standardoidulla 14 päivän palautuskyselyllä, josta keskustellaan ravitsemusterapeutin kanssa.
• Tutkimusjakson aikana tehdyt lääkityksen muutokset kirjataan
• Antropometriset mittaukset tehdään standardoiduilla menetelmillä. Pituus mitataan hoidon alussa. Paino (kevyissä vaatteissa ilman kenkiä tai esineitä taskuissa), vyötärön ympärysmitta (mitattuna vaakatasossa navan tasolta) ja lantion ympärysmitta (mitattuna vaakatasossa trochanter majorin tasolla) mitataan hoidon alku ja loppu.
• Maksan ultraäänitutkimus tehdään joko seulonnan yhteydessä tai hoidon alussa sen määrittämiseksi, onko steatoosiin viittaavan kirkkaan maksan olemassaolo tai puuttuminen. Potilaille, joiden rasvamaksa ja maksan transaminaasiarvot ovat > 1,5 x normaalin yläraja, tarjotaan lähete hepatologille.
• Vaatimusten noudattamista seurataan viikoilla 4, 8, 12 ja 26. Potilaat tuovat aiemmin saamansa kapselit perusterveydenhuoltoon laskeakseen vuorokaudessa nautittujen kapseleiden keskimäärän.

Rutiininomaisten biokemiallisten tietojen ja biologisten näytteiden hankinta

• Otetut verinäytteet analysoidaan Biomarkers Research Programme -ohjelmassa glukoosi-, HbA1c-, insuliini-, C-peptidi-, kokonaiskolesteroli-, HDL-kolesteroli-, LDL-kolesteroli-, triglyseridi-, alaniiniaminotransferaasi- ja aspartaattiaminotransferaasitasojen mittaamiseksi.
• Paastoverinäytteet otetaan viikolla 0, 8 ja 26. Perifeerinen laskimoveri vedetään pyrogeenittomiin putkiin ilman antikoagulanttia. Putket asetetaan välittömästi jäihin, niiden annetaan koaguloitua ja sentrifugoidaan (2500 x g 10 minuuttia 4 °C:ssa) 2 tunnin sisällä keräämisestä. Seeruminäytteitä säilytetään -80°C:ssa käyttöön asti. Joka ajankohtana kerätään vähintään kaksi 2 ml:n seeruminäytettä.
• Ulostenäytteet otetaan pyytämällä potilaita säilyttämään näyte suljettavassa muovipussissa pakastimessaan klinikalle siirtämiseen asti. (näytteet otetaan samoista pisteistä kuin niitä pyydetään verinäytteille. Kun näytteet ovat saapuneet klinikalle, ne jaetaan, pakastetaan ja säilytetään -80 °C:ssa. Muutokset suoliston mikrobiotassa profiloidaan käyttämällä amplifioitujen 16S-rRNA-geenien tunnusmerkittyä sekvensointia (pyrosekvensointia), jota seuraa automaattinen bioinformatiikka-analyysi. Kohdennettua RT-PCR:ää käytetään myös bakteerilajien, kuten enterobakteerien ja bifdobakteerien, tutkimiseen suhteessa yleiseen bakteerialukesarjaan. Pyrosekvensointi ja RT-PCR suoritetaan potilaiden alaryhmälle (n=15) ottaen huomioon lopulliset systeemiset löydökset. Näytteet säilytetään myöhempiä tutkimuksia varten.

Aiheen peruuttaminen

Koehenkilöt voivat milloin tahansa vetäytyä tutkimuksesta omasta pyynnöstään tai hänet voidaan vetäytyä milloin tahansa tutkijan harkinnan mukaan turvallisuus-, käyttäytymis- tai hallinnollisista syistä. Koehenkilöt poistetaan tutkimuksesta myös seuraavissa tapauksissa:

• Hoito systeemisillä antibiooteilla > 1 viikon ajan viikolla 0-22
• Kaikki systeemisten antibioottien käyttö viikolla 22-26

Potilasturvallisuus

Vastoinkäymiset

Haittatapahtumat (AE) ovat ei-toivottuja merkkejä tai oireita, joita esiintyy tutkimuksen aikana ja jotka voivat olla tai olla kausaalisesti yhteydessä hoitoon. Kaikki testituotteeseen mahdollisesti, todennäköisesti tai varmasti liittyvät AE-tapahtumat kirjataan CRF:iin.

Vakavat haittatapahtumat

Vakavat haittatapahtumat (SAE) määritellään tapauksiksi, jotka ovat kuolemaan johtavia, hengenvaarallisia, vammauttavia, toimintakyvyttömiä tai johtavat sairaalahoitoon tai pidentävät sairaalassaoloaikaa tai johtavat epämuodostumiin. Kaikki SAE-tapahtumat kirjataan CRF:ään riippumatta siitä, liittyvätkö ne testituotteeseen vai eivät. Aiempien tutkimusten (9) mukaan probiootit ovat erittäin turvallisia, ja kaikki mahdollisesti, todennäköisesti tai varmasti testituotteeseen liittyvä SAE katsotaan odottamattomaksi. Kaikista odottamattomista SAE-tapauksista ilmoitetaan välittömästi lääke- ja terveysalan tuotteiden sääntelyvirastolle (MHRA). Kaikki testiin mahdollisesti liittyvät SAE-oireet johtavat välittömästi testituotteen lopettamiseen.

Eettiset ja sääntelynäkökohdat

Tutkimus suoritetaan Helsingin julistuksesta lähtöisin olevien protokollan ja eettisten periaatteiden sekä kansainvälisen hyvän kliinisen käytännön opastuksen kansainvälisen harmonisointineuvoston mukaisesti. Näissä asiakirjoissa todetaan, että koehenkilöiden tietoinen suostumus on olennainen edellytys kliiniseen tutkimukseen osallistumiselle. Tutkimus aloitetaan vasta saatuaan hyväksynnän King Saud Universityn College of Medicine Research Centerin paikalliselta eettiseltä tarkastuslautakunnalta.

Suunnittele data-analyysit

Koska tämä tutkimus on suunniteltu arvioimaan fysiologisia vaikutuksia eikä tukemaan kliinisiä indikaatioita probioottihoidolle T2DM:ssä, aiomme suorittaa protokollan mukaisia ​​analyyseja. Vain henkilöt, joita hoidetaan vähintään 80 %:lla suunnitelluista annoksista vähintään 80 % ajasta, katsotaan hoidetuiksi protokollan mukaan.

Raakadata syötetään tilastoohjelmistoon (Statistical Package for the Social Sciences), SPSS-versio 16.5 (Chicago, IL, USA). Aineisto valmistellaan ennen analyyseja. Kuvaavat tilastot tehdään; taajuudet esitetään prosentteina (%). Jatkuvat muuttujat esitetään keskiarvona ± keskihajonna. Muuttujat, joissa on ei-gaussisia muuttujia, muunnetaan ennen analyyseja. Ryhmien vertaamiseen käytetään toistuvien mittausten kovarianssianalyysiä (ANCOVA), joka edustaa varianssianalyysin (ANOVA) ja lineaarisen regression yhdistelmää. Hämmentäviä ja kiinteitä muuttujia, kuten ikä ja sukupuoli, sekä BMI otetaan, jos oikeaa vastaavuutta ei ole saavutettu ennen toistuvia toimenpiteitä. Post-hoc Banjamini-Hohberg-korjaukset tehdään useille vertailuille. Kahden ryhmän vertailua varten tehdään riippumaton T-testi jatkuville muuttujille ja Mann-Whitney ei-jatkuville muuttujille. Haittavaikutusten analyysi (jos sellaisia ​​on) tehdään käyttäen Chi-Square-testiä ja Fisherin tarkkaa testiä satunnaisuutta, riippumattomuutta ja kokoa koskevien oletusten perusteella. Merkitys asetetaan arvoon p < 0,05.