Estudo para explorar os efeitos dos probióticos nos níveis de endotoxina em pacientes com diabetes mellitus tipo 2

Projeto

Neste estudo de 26 semanas, de centro único, duplo-cego, randomizado, controlado por placebo, 60 pacientes com DM2 serão tratados com probióticos e 60 serão tratados com placebo. As intervenções serão feitas nas semanas 0, 4, 8, 12 e 26 de todos os indivíduos. Os pacientes alocados no grupo de probióticos receberão cápsulas contendo quatro cepas de bactérias liofilizadas, a saber, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Bifidobacterium bifidum e Streptococcus termófilos (Bio-plus®, Supherb, Israel), na dose diária de 2 × 1010 UFC. Os participantes do grupo placebo receberão cápsulas contendo fibras não fermentáveis ​​à base de trigo, conforme usado em outro ensaio clínico [Pereg et al, 2011].

Recrutamento de Pacientes

O recrutamento de pacientes para este estudo será possível graças à colaboração com centros de cuidados primários em Riad e o Programa de Pesquisa de Biomarcadores, Faculdade de Ciências, King Saud University.

Critério de inclusão

• DM2 estável e bem controlado (HbA1c < 7,5% e nenhuma mudança nas medicações antidiabéticas orais durante os últimos 6 meses)
• Idade 20-75 anos
• Fornecimento de consentimento informado por escrito

Critério de exclusão

• Doença gastrointestinal crônica (exceto SII)
• Antibióticos sistêmicos dentro de 6 semanas antes da inclusão
• Uso de probióticos dentro de 3 meses antes da inclusão (o Apêndice A lista os produtos atualmente comercializados internacionalmente e disponíveis para compra na Arábia Saudita)
• Ingestão regular de insulina ou análogos de insulina, antibióticos ou probióticos, antiácidos, bloqueadores dos receptores H2, inibidores da bomba de prótons, loperamida, colestriramina, suplementos ω3, fibratos, corticosteróides ou esteróides sexuais
• Consumo diário de álcool > 30 g
• Imunodeficiência significativa
• Doença valvular cardíaca conhecida
• Amamentando ou grávida
• Etnia não árabe
• Participação em outro ensaio clínico nos últimos 6 meses
• Incapacidade legal

Alocação para tratamento

Após a confirmação da elegibilidade e obtenção do consentimento informado por escrito, os pacientes receberão um número de sujeito exclusivo da empresa de probióticos, que também realizará a randomização (estratificada por gênero). tratamento recebido. Os pacientes elegíveis serão alocados (1:1) para tratamento por 26 semanas com suplemento de probióticos ou placebo. Os sujeitos serão instruídos a

• Ingerir 1 cápsula antes do pequeno-almoço e 1 cápsula antes do jantar, directamente ou misturado com iogurte normal.
• As cápsulas serão conservadas no frigorífico após a abertura do frasco.

Tratamento de Dados e Manutenção de Registros

O formulário de relato de caso (CRF) será usado para registrar os dados de todos os participantes e será preenchido pela enfermeira pesquisadora, que também inserirá os dados em um banco de dados eletrônico.

Horário de estudo e local

Após a inclusão, todos os tratamentos posteriores serão administrados no centro de atendimento primário onde o sujeito foi recrutado (consulte o apêndice C para consultas agendadas). Uma enfermeira pesquisadora e uma nutricionista pesquisadora serão responsáveis ​​por todo o contato com os pacientes. Os médicos associados à equipe de pesquisa estarão disponíveis se surgirem problemas.

Aquisição de Dados Clínicos e Avaliação da Conformidade

• A história médica, incluindo a presença de doenças crônicas, medicação regular, hábitos tabágicos e alcoólicos, será registrada antes da inclusão.
• Os hábitos nutricionais serão avaliados por meio de um questionário padronizado de recordação de 14 dias, que será discutido com um nutricionista
• Alterações na medicação durante o período do estudo serão registradas
• As medidas antropométricas serão feitas usando métodos padronizados. A altura será medida no início do tratamento. Peso (em roupas leves sem sapatos ou itens nos bolsos), circunferência da cintura (medida no plano horizontal ao nível do umbigo) e circunferência do quadril (medida no plano horizontal ao nível do trocânter maior) serão medidos no início e fim do tratamento.
• A ultrassonografia hepática será realizada na triagem ou no início do tratamento para determinar a presença ou ausência de um fígado brilhante indicativo de esteatose. Pacientes com fígado gorduroso e transaminases hepáticas > 1,5 × o limite superior do normal serão encaminhados para um hepatologista.
• A adesão será monitorada nas semanas 4, 8, 12 e 26. Os pacientes trarão as cápsulas recebidas anteriormente ao centro de atendimento primário para calcular o número médio de cápsulas ingeridas por dia.

Aquisição de Dados Bioquímicos de Rotina e Amostras Biológicas

• As amostras de sangue obtidas serão analisadas no Programa de Pesquisa de Biomarcadores para dosagem de glicose, HbA1c, insulina, peptídeo C, colesterol total, HDL-colesterol, LDL-colesterol, triglicerídeos, alanina aminotransferase e aspartato aminotransferase.
• Amostras de sangue em jejum serão coletadas nas semanas 0, 8 e 26. O sangue venoso periférico será coletado em tubos apirogênicos sem qualquer anticoagulante. Os tubos serão imediatamente colocados em gelo, deixados para coagular e centrifugados (2500 × g por 10 min a 4 ° C) dentro de 2 horas após a coleta. As amostras de soro serão armazenadas a -80°C até o uso. Pelo menos duas amostras de soro de 2 mL serão coletadas em cada ponto de tempo.
• Amostras de fezes serão coletadas pedindo aos pacientes que armazenem a amostra em um saco plástico lacrado em seu freezer até a transferência para a clínica. (amostras colhidas nos mesmos pontos em que são solicitadas para amostras de sangue. Uma vez na clínica, as amostras serão divididas, congeladas e armazenadas a -80°C. Alterações na microbiota intestinal serão perfiladas usando sequenciamento marcado por assinatura (pirosequenciamento) de genes 16S rRNA amplificados, seguido por análise automatizada de bioinformática. A RT-PCR direcionada também será usada para examinar espécies bacterianas, como Enterobacteria e Bifdobacteria, em relação ao conjunto universal de primers bacterianos. Pirosequenciamento e RT-PCR serão realizados em uma sub-coorte (n=15) de pacientes considerando os achados sistêmicos finais. As amostras serão retidas para estudos subsequentes.

Retirada do assunto

Os sujeitos podem retirar-se do estudo a qualquer momento, a seu próprio pedido, ou podem ser retirados a qualquer momento, a critério do investigador, por razões de segurança, comportamentais ou administrativas. Os sujeitos também serão retirados do estudo em caso de:

• Tratamento com antibióticos sistêmicos por > 1 semana durante a semana 0-22
• Qualquer uso de antibióticos sistêmicos durante a semana 22-26

Segurança do paciente

Eventos adversos

Eventos adversos (EAs) são sinais ou sintomas indesejáveis ​​que ocorrem durante o estudo e podem ou não ter relação causal com o tratamento. Todos os EAs considerados possivelmente, provavelmente ou definitivamente relacionados ao produto em teste serão registrados nos CRFs.

Eventos Adversos Graves

Eventos adversos graves (SAEs) são definidos como eventos que são fatais, ameaçam a vida, incapacitam, incapacitam ou resultam em hospitalização ou prolongam a internação ou resultam em malformação. Todos os SAEs serão registrados no CRF, sejam eles relacionados ao produto em teste ou não. De acordo com estudos anteriores (9), os probióticos são muito seguros e qualquer SAE que possa estar possivelmente, provavelmente ou definitivamente relacionado ao produto em teste será considerado inesperado. Todos os SAEs inesperados serão relatados imediatamente à Agência Reguladora de Medicamentos e Produtos de Saúde (MHRA). Qualquer SAE que possa estar relacionado ao teste levará imediatamente à descontinuação do produto em teste.

Aspectos Éticos e Regulatórios

O estudo será realizado de acordo com o protocolo e os princípios éticos que têm sua origem na Declaração de Helsinque, bem como com o Conselho Internacional de Orientação de Harmonização de Boas Práticas Clínicas. Esses documentos afirmam que o consentimento informado dos participantes é uma pré-condição essencial para a participação no estudo clínico. O estudo começará somente após a obtenção da aprovação do conselho de revisão ética local do Centro de Pesquisa da Faculdade de Medicina da King Saud University.

Planejar análises de dados

Como este estudo foi projetado para avaliar os efeitos fisiológicos, em vez de apoiar as indicações clínicas para o tratamento com probióticos no DM2, planejamos realizar análises por protocolo. Apenas indivíduos tratados com pelo menos 80% das doses planejadas por pelo menos 80% do tempo serão considerados como tratados pelo protocolo.

Os dados brutos serão inseridos em um software estatístico (Statistical Package for the Social Sciences), SPSS versão 16.5 (Chicago, IL, EUA). A preparação do conjunto de dados será feita antes das análises. Serão feitas estatísticas descritivas; as frequências serão apresentadas em porcentagem (%). Variáveis ​​contínuas serão apresentadas como média ± desvio padrão. As variáveis ​​que exibem variáveis ​​não gaussianas serão transformadas antes das análises. A análise de covariância de medidas repetidas (ANCOVA) será usada para comparar os grupos, o que representará uma combinação de análise de variância (ANOVA) e regressão linear. Variáveis ​​confusas e fixas, como idade e sexo, bem como IMC, serão obtidas se a correspondência adequada não for alcançada antes de medidas repetidas. Correções post-hoc de Banjamini-Hohberg serão feitas para comparações múltiplas. Para comparação de 2 grupos, será feito teste T independente para variáveis ​​contínuas e Mann-Whitney para variáveis ​​não contínuas. A análise de eventos adversos (se houver) será feita usando o teste qui-quadrado e o teste exato de Fisher seguindo as suposições de aleatoriedade, independência e tamanho. A significância será estabelecida em p < 0,05.