Studie for å utforske effekten av probiotika på endotoksinnivåer hos pasienter med type 2 diabetes mellitus

Design

I denne 26 uker lange, enkeltsenter, dobbeltblinde, randomiserte, placebokontrollerte studien vil 60 pasienter med T2DM bli behandlet med probiotika og 60 vil bli behandlet med placebo. Intervensjoner vil bli gjort i uke 0, 4, 8, 12 og 26 fra alle fag. Pasienter som er allokert til probiotikagruppen vil motta kapsler som inneholder fire stammer av frysetørkede bakterier, nemlig Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Bifidobacterium bifidum og Streptococcus thermophiles (Bio-plus®, Supherb, Israel), i en daglig dose på 1 × 102 CFU. Deltakere i placebogruppen vil motta kapsler som inneholder hvetebaserte ikke-fermenterbare fibre, som brukt i en annen klinisk studie [Pereg et al, 2011].

Rekruttering av pasienter

Rekruttering av pasienter til denne studien vil bli muliggjort gjennom samarbeid med primærhelsesentre i hele Riyadh og Biomarkers Research Program, College of Science, King Saud University.

Inklusjonskriterier

• Stabil og godt kontrollert T2DM (HbA1c < 7,5 % og ingen endring i orale antidiabetiske medisiner de siste 6 månedene)
• Alder 20-75 år
• Utlevering av skriftlig informert samtykke

Eksklusjonskriterier

• Kronisk gastrointestinal sykdom (unntatt IBS)
• Systemiske antibiotika innen 6 uker før inkludering
• Bruk av probiotika innen 3 måneder før inkludering (vedlegg A viser produkter som for tiden markedsføres internasjonalt og tilgjengelig for kjøp i Saudi-Arabia)
• Regelmessig inntak av insulin eller insulinanaloger, antibiotika eller probiotika, antacida, H2-reseptorblokkere, protonpumpehemmere, loperamid, kolestryramin, ω3-tilskudd, fibrater, kortikosteroider eller sexsteroider
• Daglig alkoholforbruk > 30 g
• Betydelig immunsvikt
• Kjent hjerteklaffsykdom
• Ammende eller gravid
• Ikke-arabisk etnisitet
• Deltakelse i en annen klinisk studie i løpet av de siste 6 månedene
• Juridisk manglende evne

Tildeling til behandling

Etter bekreftelse på kvalifisering og innhentet skriftlig informert samtykke, vil pasientene få et unikt emnenummer av probiotikaselskapet, som også vil utføre randomiseringen (stratifisert for kjønn), Pasientene og klinikerne ved primærhelsesenteret vil bli blindet for mottatt behandling. De kvalifiserte pasientene vil bli allokert (1:1) til behandling i 26 uker med enten probiotikatilskuddet eller placebo. Emner vil bli instruert til

• Innta 1 kapsel før frokost og 1 kapsel før kveldsmåltid, enten direkte eller blandet i standard yoghurt.
• Kapslene oppbevares i kjøleskapet etter at glasset er åpnet.

Datahåndtering og journalføring

Case report form (CRF) vil bli brukt til å registrere data for alle deltakere, og fylles ut av forskningssykepleieren, som også vil legge inn dataene i en elektronisk database.

Studieplan og plassering

Etter inkludering vil alle videre behandlinger administreres ved primærhelsesenteret der forsøkspersonen ble rekruttert (se vedlegg C for planlagte besøk). En forskningssykepleier og en forskningskostholdsveileder vil stå for all kontakt med pasienter. Leger tilknyttet forskerteamet vil være tilgjengelig dersom det oppstår problemer.

Innhenting av kliniske data og vurdering av samsvar

• Sykehistorie, inkludert tilstedeværelse av kroniske sykdommer, vanlige medisiner, røyke- og alkoholvaner, vil bli registrert før inkludering.
• Ernæringsvaner vil bli vurdert ved hjelp av et standardisert 14-dagers tilbakekallingsskjema, som vil bli diskutert med en ernæringsfysiolog
• Endringer i medisinering i løpet av studieperioden vil bli registrert
• Antropometriske målinger vil bli utført ved bruk av standardiserte metoder. Høyde vil bli målt ved behandlingsstart. Vekt (i lette klær uten sko eller gjenstander i lommer), midjeomkrets (målt som et horisontalt plan i nivå med navlen) og hofteomkrets (målt som et horisontalt plan i nivå med trochanter major) vil bli målt ved start og slutt på behandlingen.
• Leverultrasonografi vil bli utført enten ved screening eller ved behandlingsstart for å fastslå tilstedeværelse eller fravær av en lys lever som indikerer steatose. Pasienter med fettlever og levertransaminaser > 1,5 × øvre normalgrense vil bli tilbudt henvisning til hepatolog.
• Overholdelse vil bli overvåket i uke 4, 8, 12 og 26. Pasienter vil ta med sine tidligere mottatte kapsler til primærhelsesenteret for å beregne gjennomsnittlig antall kapsler inntatt per dag.

Innhenting av rutinemessige biokjemiske data og biologiske prøver

• Blodprøver som innhentes vil bli analysert ved Biomarkers Research Program for å måle nivåer av glukose, HbA1c, insulin, C-peptid, totalkolesterol, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, triglyserider, alaninaminotransferase og aspartataminotransferase.
• Fastende blodprøver vil bli tatt i uke 0, 8 og 26. Perifert veneblod vil trekkes inn i pyrogenfrie rør uten antikoagulant. Rørene plasseres umiddelbart i is, får koagulere og sentrifugeres (2500 × g i 10 minutter ved 4 °C) innen 2 timer etter oppsamling. Serumprøver vil bli lagret ved -80°C frem til bruk. Minst to 2-ml serumprøver vil bli samlet inn på hvert tidspunkt.
• Avføringsprøver vil bli tatt ved å be pasientene om å oppbevare prøven i en forseglbar plastpose i fryseren frem til overføring til klinikken. (prøver tatt på samme punkter som de er forespurt for blodprøver. Vel fremme på klinikken vil prøvene bli delt, hurtigfryst og lagret ved -80°C. Endringer i tarmmikrobiota vil bli profilert ved hjelp av signaturmerket sekvensering (pyrosequencing) av amplifiserte 16S rRNA-gener etterfulgt av automatisert bioinformatikkanalyse. Målrettet RT-PCR vil også bli brukt til å undersøke bakteriearter som Enterobacteria og Bifdobacteria i forhold til det universelle bakterielle primersettet. Pyrosekvensering og RT-PCR vil bli utført i en sub-kohort (n=15) av pasienter med tanke på de endelige systemiske funnene. Prøver vil bli oppbevart for senere studier.

Emneuttak

Forsøkspersoner kan trekke seg fra rettssaken når som helst etter eget ønske, eller de kan trekkes når som helst etter etterforskerens skjønn av sikkerhetsmessige, atferdsmessige eller administrative årsaker. Emnene vil også bli trukket fra studiet i tilfelle:

• Behandling med systemisk antibiotika i > 1 uke i uke 0-22
• Eventuell bruk av systemisk antibiotika i uke 22-26

Pasientsikkerhet

Uønskede hendelser

Bivirkninger (AE) er uønskede tegn eller symptomer som oppstår i løpet av studien og kan være årsaksmessig relatert til behandlingen eller ikke. Alle AEer som vurderes som mulig, sannsynligvis eller definitivt relatert til testproduktet vil bli registrert på CRF-er.

Alvorlige uønskede hendelser

Alvorlige bivirkninger (SAE) er definert som hendelser som er dødelige, livstruende, invalidiserende, invalidiserende eller resulterer i sykehusinnleggelse eller forlenger sykehusopphold, eller resulterer i misdannelser. Alle SAE-er vil bli registrert i CRF, enten de er relatert til testproduktet eller ikke. I følge tidligere studier (9) er probiotika svært trygge, og enhver SAE som kan være mulig, sannsynligvis eller definitivt relatert til testproduktet vil bli sett på som uventet. Alle uventede SAE-er vil umiddelbart bli rapportert til Medicines and Healthcare products Regulatory Agency (MHRA). Enhver SAE som kan være relatert til testen vil umiddelbart føre til seponering av testproduktet.

Etiske og regulatoriske aspekter

Studien vil bli utført i samsvar med protokollen og de etiske prinsippene som har sitt opphav i Helsinki-erklæringen samt med International Council for Harmonization Guidance on Good Clinical Practice. Disse dokumentene sier at informert samtykke fra forsøkspersoner er en vesentlig forutsetning for deltakelse i den kliniske studien. Studien vil først starte etter å ha fått godkjenning fra det lokale etiske utvalget ved College of Medicine Research Center, King Saud University.

Plan for dataanalyser

Siden denne studien er designet for å vurdere de fysiologiske effektene i stedet for å støtte kliniske indikasjoner for behandling med probiotika ved T2DM, planlegger vi å utføre analyser i henhold til protokollen. Bare forsøkspersoner behandlet med minst 80 % av de planlagte dosene i minst 80 % av tiden vil bli vurdert som behandlet i henhold til protokollen.

Rådata vil bli lagt inn i en statistisk programvare (Statistical Package for the Social Sciences), SPSS versjon 16.5 (Chicago, IL, USA). Utarbeidelse av datasett vil bli gjort før analyser. Det vil bli gjort beskrivende statistikk; frekvenser vil bli presentert i prosent (%). Kontinuerlige variabler vil bli presentert som gjennomsnitt ± standardavvik. Variabler som viser ikke-Gaussiske variabler vil bli transformert før analyser. Gjentatte tiltaksanalyse av kovarians (ANCOVA) vil bli brukt for å sammenligne grupper, som vil representere en kombinasjon av variansanalyse (ANOVA) og lineær regresjon. Forvirrende og faste variabler som alder og kjønn, samt BMI vil bli tatt dersom riktig matching ikke er oppnådd før gjentatte tiltak. Post-hoc Banjamini-Hohberg korreksjoner vil bli gjort for flere sammenligninger. For sammenligning av 2 grupper vil det bli gjort uavhengig T-test for kontinuerlige variabler og Mann-Whitney for ikke-kontinuerlige variabler. Analyse av uønskede hendelser (hvis noen) vil bli gjort ved å bruke Chi-Square test og Fishers eksakte test etter antakelser om tilfeldighet, uavhengighet og størrelse. Signifikans vil bli satt til p < 0,05.