Studie zkoumající účinky probiotik na hladiny endotoxinů u pacientů s diabetes mellitus 2.

Design

V této 26týdenní, jednocentrické, dvojitě zaslepené, randomizované, placebem kontrolované studii bude 60 pacientů s T2DM léčeno probiotiky a 60 bude léčeno placebem. Intervence budou provedeny v týdnech 0, 4, 8, 12 a 26 u všech subjektů. Pacienti zařazení do skupiny probiotik dostanou kapsle obsahující čtyři kmeny lyofilizovaných bakterií, a to Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Bifidobacterium bifidum a Streptococcus thermophiles (Bio-plus®, Supherb, Izrael), v denní dávce 2 × 1010 CFU. Účastníci ve skupině s placebem obdrží kapsle obsahující nefermentovatelnou vlákninu na bázi pšenice, jak se používá v jiné klinické studii [Pereg et al, 2011].

Nábor pacientů

Nábor pacientů do této studie bude umožněn díky spolupráci s centry primární péče v celém Rijádu a Biomarkers Research Program, College of Science, King Saud University.

Kritéria pro zařazení

• Stabilní a dobře kontrolovaný T2DM (HbA1c < 7,5 % a žádná změna perorálních antidiabetik během posledních 6 měsíců)
• Věk 20-75 let
• Poskytnutí písemného informovaného souhlasu

Kritéria vyloučení

• Chronické gastrointestinální onemocnění (kromě IBS)
• Systémová antibiotika do 6 týdnů před zařazením
• Užívání probiotik během 3 měsíců před zařazením (Příloha A uvádí produkty, které jsou v současné době prodávány mezinárodně a jsou k dispozici ke koupi v Saúdské Arábii)
• Pravidelný příjem inzulínu nebo analogů inzulínu, antibiotik nebo probiotik, antacidů, blokátorů H2-receptorů, inhibitorů protonové pumpy, loperamidu, cholestryraminu, doplňků ω3, fibrátů, kortikosteroidů nebo pohlavních steroidů
• Denní spotřeba alkoholu > 30 g
• Výrazná imunodeficience
• Známé onemocnění srdečních chlopní
• Kojící nebo těhotná
• Nearabské etnikum
• Účast v jiné klinické studii během posledních 6 měsíců
• Právní nezpůsobilost

Přidělení k léčbě

Po potvrzení způsobilosti a získání písemného informovaného souhlasu bude pacientům přiděleno jedinečné číslo subjektu probiotickou společností, která také provede randomizaci (stratifikovanou podle pohlaví). Pacienti a lékaři v centru primární péče budou zaslepeni. přijatá léčba. Způsobilí pacienti budou rozděleni (1:1) na léčbu po dobu 26 týdnů buď probiotickým doplňkem nebo placebem. Subjekty budou poučeny

• Užívejte 1 kapsli před snídaní a 1 kapsli před večeří, buď přímo nebo rozmíchanou ve standardním jogurtu.
• Kapsle budou po otevření sklenice uloženy v chladničce.

Manipulace s daty a vedení záznamů

Pro záznam dat za všechny účastníky bude sloužit Case report form (CRF), který vyplní výzkumná sestra, která údaje také zanese do elektronické databáze.

Studijní plán a umístění

Po zařazení bude veškerá další léčba vedena v centru primární péče, kam byl subjekt přijat (plánované návštěvy viz příloha C). Za veškerý kontakt s pacienty bude zodpovědná výzkumná sestra a výzkumný dietolog. V případě problémů budou k dispozici lékaři spojení s výzkumným týmem.

Získávání klinických údajů a hodnocení shody

• Před zařazením bude zaznamenána anamnéza, včetně přítomnosti chronických onemocnění, pravidelné medikace, kouření a alkoholu.
• Výživové návyky budou hodnoceny pomocí standardizovaného 14denního dotazníku, který bude prodiskutován s dietologem.
• Změny v medikaci během období studie budou zaznamenány
• Antropometrická měření budou prováděna standardizovanými metodami. Výška bude změřena na začátku léčby. Hmotnost (v lehkém oblečení bez bot nebo věcí v kapsách), obvod pasu (měřeno jako vodorovná rovina na úrovni pupku) a obvod boků (měřeno jako vodorovná rovina na úrovni trochanter major) budou měřeny v začátek a konec léčby.
• Ultrasonografie jater bude provedena buď při screeningu, nebo na začátku léčby, aby se určila přítomnost nebo nepřítomnost jasných jater, které svědčí pro steatózu. Pacientům se ztučněním jater a jaterních transamináz > 1,5 × horní hranice normy bude nabídnuto doporučení k hepatologovi.
• Dodržování bude sledováno ve 4., 8., 12. a 26. týdnu. Pacienti přinesou své dříve obdržené tobolky do centra primární péče, aby vypočítali průměrný počet tobolek požitých za den.

Získávání rutinních biochemických dat a biologických vzorků

• Získané krevní vzorky budou analyzovány v Biomarkers Research Program za účelem měření hladin glukózy, HbA1c, inzulínu, C-peptidu, celkového cholesterolu, HDL-cholesterolu, LDL-cholesterolu, triglyceridů, alaninaminotransferázy a aspartátaminotransferázy.
• Vzorky krve nalačno budou odebrány v týdnu 0, 8 a 26. Periferní žilní krev bude odebrána do apyrogenních zkumavek bez jakéhokoli antikoagulantu. Zkumavky se okamžitě umístí do ledu, nechají se koagulovat a centrifugují (2500 x g po dobu 10 minut při 4 °C) do 2 hodin od odběru. Vzorky séra budou až do použití skladovány při -80 °C. V každém časovém bodě budou odebrány alespoň dva 2ml vzorky séra.
• Vzorky stolice budou odebrány tak, že pacient požádá, aby vzorek skladoval v igelitovém uzavíratelném sáčku v mrazáku až do převozu na kliniku. (vzorky odebrané na stejných místech, jako jsou požadovány pro odběry krve. Jakmile budou na klinice, vzorky se rozdělí, bleskově zmrazí a skladují při -80 °C. Změny ve střevní mikroflórě budou profilovány pomocí sekvenování s signaturou (pyrosequencing) amplifikovaných 16S rRNA genů s následnou automatizovanou bioinformatickou analýzou. Cílená RT-PCR bude také použita ke zkoumání bakteriálních druhů, jako jsou Enterobacteria a Bifdobacteria, ve srovnání s univerzální sadou bakteriálních primerů. Pyrosekvenování a RT-PCR budou provedeny u podskupiny (n=15) pacientů s ohledem na konečné systémové nálezy. Vzorky budou uchovány pro následné studie.

Stažení předmětu

Subjekty mohou odstoupit ze studie kdykoli na vlastní žádost nebo mohou být kdykoli odvolány na základě uvážení zkoušejícího z bezpečnostních, behaviorálních nebo administrativních důvodů. Subjekty budou také vyřazeny ze studia v případě:

• Léčba systémovými antibiotiky po dobu > 1 týdne během týdne 0-22
• Jakékoli použití systémových antibiotik během týdne 22-26

Bezpečnost pacientů

Nežádoucí příhody

Nežádoucí příhody (AE) jsou nežádoucí příznaky nebo symptomy, které se objevují během studie a mohou nebo nemusí být v příčinné souvislosti s léčbou. Všechny AE, o kterých se uvažuje, že mohou, pravděpodobně nebo určitě souvisí s testovaným produktem, budou zaznamenány na CRF.

Závažné nežádoucí příhody

Závažné nežádoucí příhody (SAE) jsou definovány jako příhody, které jsou smrtelné, život ohrožující, invalidizující, zneschopňující nebo mají za následek hospitalizaci nebo prodlužují pobyt v nemocnici nebo vedou k malformaci. Všechny SAE budou zaznamenány do CRF, ať už se vztahují k testovanému produktu nebo ne. Podle předchozích studií (9) jsou probiotika velmi bezpečná a jakákoli SAE, která by mohla být možná, pravděpodobně nebo určitě související s testovaným produktem, bude považována za neočekávanou. Všechny neočekávané SAE budou okamžitě hlášeny Úřadu pro regulaci léčiv a zdravotních produktů (MHRA). Jakákoli SAE, která by mohla souviset s testem, okamžitě povede k ukončení testování produktu.

Etické a regulační aspekty

Studie bude provedena v souladu s protokolem a etickými principy, které mají svůj původ v Helsinské deklaraci a také s Mezinárodní radou pro harmonizaci pokynů pro správnou klinickou praxi. Tyto dokumenty uvádějí, že informovaný souhlas subjektů je nezbytným předpokladem pro účast v klinické studii. Studie bude zahájena až po získání souhlasu místního etického kontrolního výboru College of Medicine Research Center, King Saud University.

Plán pro analýzy dat

Vzhledem k tomu, že tato studie je navržena tak, aby zhodnotila fyziologické účinky spíše než aby podporovala klinické indikace léčby probiotiky u T2DM, plánujeme provádět analýzy podle protokolu. Pouze subjekty léčené alespoň 80 % plánovaných dávek po alespoň 80 % doby budou považovány za léčené podle protokolu.

Nezpracovaná data budou zadána do statistického softwaru (Statistical Package for the Social Sciences), SPSS verze 16.5 (Chicago, IL, USA). Příprava datového souboru bude provedena před analýzami. Bude provedena popisná statistika; četnosti budou uvedeny v procentech (%). Spojité proměnné budou prezentovány jako průměr ± standardní odchylka. Proměnné vykazující negaussovské proměnné budou před analýzami transformovány. K porovnání skupin bude použita analýza opakovaných měření kovariance (ANCOVA), která bude představovat kombinaci analýzy rozptylu (ANOVA) a lineární regrese. Pokud před opakovanými měřeními nebylo dosaženo správné shody, budou použity matoucí a pevné proměnné, jako je věk a pohlaví, stejně jako BMI. Post-hoc Banjamini-Hohbergovy korekce budou provedeny pro vícenásobná srovnání. Pro srovnání 2 skupin bude proveden nezávislý T-test pro spojité proměnné a Mann-Whitney pro nespojité proměnné. Analýza nežádoucích jevů (pokud existují) bude provedena pomocí Chi-Square testu a Fisherova exaktního testu za předpokladu náhodnosti, nezávislosti a velikosti. Významnost bude nastavena na p < 0,05.