成人アトピー性皮膚炎患者における自家マイクロバイオーム移植の動態特性の評価

本研究は、研究の 3 つの目的に沿って 3 つの実験として実施されます。 各実験には異なる同意書が必要となるため、参加者は 3 つの研究実験すべてに個別に同意することになります。 個々の被験者は、3 つすべてに参加する資格がある場合、3 つすべてのサブ研究に参加できますが、被験者が複数のサブ研究に参加する必要はありません。 合計 10 人の被験者が実験 1 および 2 に登録され、約 14 人の被験者が実験 3 に登録されます。AD 患者の約 75 ～ 80% のみに黄色ブドウ球菌が定着していることを考慮すると、18 名近くのスクリーニングが行われると予想されます。 -20 件の被験者が包含基準を満たす。 研究から撤退した被験者は置き換えられます。

実験 1: 皮膚表面上の移植細菌の経時的安定性の測定

この研究の最初の部分 (実験 1) は、7 回の来院 (スクリーニング、培養、治療、および 3 回のフォローアップ訪問) と資格情報を伝えるための 1 回の電話で構成されます。 すべての診察は UCSD 皮膚科クリニックで行われます。 各訪問の正確な手順については、以下で説明します。

スクリーニング訪問（訪問１、０日目） 研究手順を開始する前に、被験者はまずインフォームドコンセントフォームを確認して署名するよう求められます。 インフォームドコンセントを得た後、包含/除外基準が検討されます。 被験者が研究に必要な基準を満たしているかどうかを評価するために、簡単な病歴と身体検査が行われます。 妊娠の可能性のある女性被験者は、妊娠していないことを確認するために当院で尿妊娠検査を受けます。 包含基準と除外基準を満たす患者は、肘前窩の 1 つの病変性アトピー性皮膚炎の皮膚に対して皮膚スワブ検査を実施します (Kong et al, 2012 は、黄色ブドウ球菌が定着した AD 患者には全身に黄色ブドウ球菌細菌が常在していることを示しました)皮膚表面に存在するため、1 つの綿棒で十分であると予想されます)、また、鼻孔内の黄色ブドウ球菌の存在を検出するために鼻培養綿棒も使用します。 これでスクリーニング訪問は終了となります。 この訪問の合計時間は約 30 分です。

記載された期間内に禁止薬物の適用または使用により包含/除外基準を満たさない被験者は、スクリーニング不合格とみなされます。 これらの患者の皮膚スワブ検査は実施されません。 これらの被験者は、希望があれば、必要な休薬期間（局所薬の場合は7日間、経口薬の場合は28日間）を完了した後、再度スクリーニング来院することができます。

電話 (3 +/- 1 日目) 対象者には、皮膚および鼻腔スワブに黄色ブドウ球菌が増殖したかどうかが 3 営業日以内に電話で通知されます。 皮膚培養がメチシリン感受性黄色ブドウ球菌（MSSA）陽性である被験者が研究に登録される。 これらの参加者には文化訪問の予約が予定されています。 以下のいずれかに該当する被験者は除外されます：黄色ブドウ球菌皮膚培養陰性、またはメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）皮膚培養陽性。 電話での会話には合計約 5 分かかります。

文化訪問（7日目+/-4） 適格な被験者は、スクリーニング訪問から約1週間以内に文化訪問に戻ります。 この訪問中に、対象の上腕の非病変(ADなし)皮膚から4つの培養綿棒を採取します。 これらの培養綿棒は、研究室で処理されるまでトリプシン大豆ブロス（TSB）に入れられ、そこで自家マイクロバイオーム移植に使用する対象の抗菌ペプチドを産生するブドウ球菌種を増殖させるために使用されます。 対象者にはダヴ保湿石鹸のバーも与えられ、再診が完了するまでシャワーを浴びるたびにそれを使用するよう指示される。 スクリーニング来院時（来院 1）で黄色ブドウ球菌の鼻培養陽性が確認された被験者には、ムピロシン軟膏のチューブも投与されます。 彼らは、治療訪問の5日前から1日2回、両側の前鼻孔にムピロシンを塗布するよう指導されます。 所要時間は合計で約 10 分です。

治療来院（２８日±７日目） 黄色ブドウ球菌スクリーニング培養物が陽性である適格対象を研究に登録し、スクリーニング来院から約２８日後にクリニックに戻るよう指示する。 この 3 週間の待機期間により、研究室スタッフは対象の内因性 AMP 産生細菌を増殖させ、治療来院時に適用するためにセタフィルと混合する準備をすることができます。 現実のシナリオを可能な限りシミュレートするために、被験者はこの研究中、入浴、シャワー、運動などの通常の活動を続けることが許可されます。 この訪問は、被験者がこの訪問から7日以内に腕に局所AD治療を行っていないこと、または経口AD治療を28日以内に行っていないことを確認するための薬歴を含む、被験者の暫定病歴を検討することから始まります。 スクリーニング来院時に黄色ブドウ球菌（＋）の鼻培養を行った被験者については、再度鼻培養を実施する。 次に、すべての被験者に対して、被験者の両側の腕に焦点を当てた身​​体検査を実施し、腕の皮膚にひび割れ、破損、または感染症の痕跡がないことを確認します。 次に、ダイヤル液体抗菌石鹸で洗浄し、続いて 70%、次に 80% のアルコールに浸した滅菌ガーゼで腕を拭くという計画で両腕を前処理します。 アルコールが乾いたら、被験者の個別のAMTクリームを手袋をはめた研究コーディネーターの手で各腕に薄く塗布します。 クリームを塗布してから 5 分後、片方の肘前窩の湿疹のある皮膚、および同じ腕の皮膚の非病変領域に対して定量的洗浄が行われます。 洗浄ごとに、面積約 3.5 cm2 の滅菌ステンレス鋼シリンダーを皮膚表面にしっかりと保持し、2.5 mL の滅菌ストリッピング液 (SSFN) をシリンダー内に注意深く注入します。 次に、滅菌ゴムポリスマンを使用して皮膚を60秒間マッサージします。 SSFN はピペットで吸引され、滅菌試験管に移されます。 このプロセス全体が同じ部位でもう一度繰り返され、液体が一緒にプールされます。 プールされた液体は、コロニー計数法によって研究室で分析され、皮膚表面上の生菌コロニーの数が決定されます。 次に、病変のある皮膚と病変のない皮膚の両方の皮膚綿棒が採取されます。 これで訪問診療は終了となります。 この訪問には約 30 分かかると予想されます。

フォローアップ訪問 フォローアップ訪問中、各被験者は病変皮膚および非病変皮膚の定量的洗浄および病変皮膚および非病変皮膚の皮膚綿棒を採取するために診療所に戻ります。 登録された 10 人の被験者は 2 つのグループに分けられ、各グループは異なる時点で追跡調査のために戻ります。 登録する最初の 5 人の患者は最初のグループに割り当てられ、移植後 1、4、8、24 時間後に追跡調査のために再来院されます。 次に登録する 5 人の患者は 2 番目のグループに割り当てられ、移植後 1、2、4、7 日の時点で追跡調査のために再来院します。 最終追跡時点での定量的洗浄により、その参加者の研究は終了します。 次回の訪問にはそれぞれ約 20 分かかります。

病変皮膚および非病変皮膚の両方における移植されたブドウ球菌種の平均生存率が各時点でプロットされます。 このデータから、移植後の細菌の減少速度を計算することができ、細菌の半減期が得られます。

実験 2: 正常な皮膚上の微生物の平均濃度と同様の移植細菌密度 (約 105/cm2) を達成するために必要な自家マイクロバイオーム移植クリームの塗布量の定常状態を確立するため

実験 2 は、4 回のオフィス訪問 (スクリーニング、培養、治療、フォローアップ) と、資格情報を伝えるための 1 回の電話で構成されます。 すべての診察は UCSD 皮膚科クリニックで行われます。 実験 1 と実験 2 の両方に参加する被験者は、実験 2 の研究手順を開始する前に、少なくとも AMT クリームの半減期の 10 倍に相当する期間待機する必要があります。実験 3 のスクリーニング、電話、および培養訪問は次のとおりです。実験1と同じです。 治療来院およびフォローアップ来院は実験 1 のものとは若干異なり、変更点に下線を付けて以下に説明します。

治療来院（２８日±７日目） 黄色ブドウ球菌スクリーニング培養物が陽性である適格な被験者は研究に登録され、スクリーニング来院から約２８日後に治療来院のためにクリニックに戻るよう指示される。 培養と治療来院の間のこの 3 週間の待機期間により、検査スタッフは対象の内因性 AMP 産生細菌を増殖させ、治療来院時に適用するためにセタフィルと混合する準備をすることができます。 現実のシナリオを可能な限りシミュレートするために、被験者はこの研究中、入浴、シャワー、運動などの通常の活動を続けることが許可されます。 この訪問は、被験者がこの訪問から7日以内に腕に局所AD治療を行っていないこと、または経口AD治療を28日以内に行っていないことを確認するための薬歴を含む、被験者の暫定病歴を検討することから始まります。 スクリーニング来院時に黄色ブドウ球菌（＋）の鼻培養を行った被験者については、再度鼻培養を実施する。 次に、すべての被験者に対して、被験者の両側の腕に焦点を当てた身​​体検査を実施し、腕の皮膚にひび割れ、破損、または感染症の痕跡がないことを確認します。 次に、ダイヤル液体抗菌石鹸で腕を洗浄し、その後、滅菌ガーゼを使用して 70% アルコール、続いて 80% アルコールで腕を拭くという計画で片腕を前処理します。 アルコールが乾いたら、被験者の個別のAMTクリームを被験者の片方の腕に、研究コーディネーターの手袋をはめた手で薄く塗布します。 5分後、AMTクリームで治療した腕の肘前窩の湿疹のある皮膚、および同じ腕の非病変皮膚領域に対して定量的洗浄が行われます。 洗浄ごとに、面積約 3.5 cm2 の滅菌ステンレス鋼シリンダーを皮膚表面にしっかりと保持し、2.5 mL の滅菌ストリッピング液 (SSFN) をシリンダー内に注意深く注入します。 次に、滅菌ゴムポリスマンを使用して皮膚を60秒間マッサージします。 SSFN はピペットで吸引され、滅菌試験管に移されます。 このプロセス全体が 2 回繰り返され、流体が一緒にプールされます。 プールされた液体は研究室で PCR によって分析され、存在する細菌の数と種類が特定されます。 病変のある皮膚と病変のない皮膚の皮膚スワブも完成します。 その後、被験者には自分の AMT クリームと手袋の使い捨てのアリコートが与えられ、持ち帰ることができます。 彼らは、実験 1 の結果から計算された半減期に基づいて決定された投与間隔で、治​​療訪問中に適用されたのと同じ腕にアリコートの 1 つを合計 6 回投与するように指示されます (投与スケジュール)定常状態に達すると予測されます）。 クリームを塗布する前に手を洗い、手袋を着用するよう指導されます。 これで訪問診療は終了となります。 この訪問には約 30 分かかると予想されます。

フォローアップ訪問（AMT クリームの 7 回目の塗布時に行われます） フォローアップ訪問中に、対象は病変皮膚と非病変皮膚の定量的洗浄のためにクリニックに戻り、S の量を決定します。今回の訪問では.aureus。 病変のある皮膚と病変のない皮膚の皮膚スワブ検査も行われます。 この訪問で実験 2 は終了します。所要時間は約 15 分です。

追加の考慮事項: この実験では、正常な皮膚上の微生物の平均濃度 (約 105/cm2) と同様の細菌密度を使用して、AMT の定常状態の存在量を確立することが目標です。 実験 1 の結果を使用して、被験者の皮膚表面上の細菌の半減期を推定できます。 実験 1 で決定された AMT クリームの半減期は短く、場合によっては数時間程度になる可能性があります。 AMT クリームが移植細菌の急速な減少を示し、AMT の適用頻度をさらに増やすのが現実的ではなく (TID よりも多いと想定)、AMT の投与量を標準的な 108 細菌/細菌から実質的に増やすことができない場合は、 gm、10 gm/m2 で塗布すると、被験者は最大実用用量 (40gm/m2 で 109 細菌/gm) を最大実用頻度 (TID) で塗布します。これを 1 週間実施して、細菌の数を決定します。この治療アプローチの後に存在します。 これは、Costello らのデータからは考えられませんが、 2009 年には、研究を進めるためにこのバックアップ計画を策定したいと考えています。 これらの結果は定常状態を表すものではありませんが、データはその後の臨床試験の計画を可能にする、または長期適用アプローチにはさらなる分析の価値がないと結論付けるのに十分です。

実験 3: 参加者の皮膚上の黄色ブドウ球菌の定常状態の存在量を測定する

実験 3 は、6 回のオフィス訪問 (スクリーニング、培養、治療、および 3 回のフォローアップ訪問) と、資格情報を伝えるための 1 回の電話で構成されます。 すべての診察は UCSD 皮膚科クリニックで行われます。 実験 2 に参加した被験者は、実験 3 の研究手順を開始する前に、少なくとも AMT クリームの 10 半減期に相当する期間待機する必要があります。実験 3 のスクリーニング、電話、および培養訪問は、実験 3 と同じです。実験1の場合。 治療来院およびフォローアップ来院は実験 1 のものとは若干異なり、変更点に下線を付けて以下に説明します。

治療来院（２８日±７日目） 黄色ブドウ球菌スクリーニング培養物が陽性である適格対象を研究に登録し、スクリーニング来院から約２８日後にクリニックに戻るよう指示する。 この 3 週間の待機期間により、研究室スタッフは対象の内因性 AMP 産生細菌を増殖させ、治療来院時に適用するためにセタフィルと混合する準備をすることができます。 AMP 産生細菌も、病原性がないことを確認するためにスクリーニングされます。 現実のシナリオを可能な限りシミュレートするために、被験者はこの研究中、入浴、シャワー、運動などの通常の活動を続けることが許可されます。 この訪問は、被験者がこの訪問から7日以内に腕に局所AD治療を行っていないこと、または経口AD治療を28日以内に行っていないことを確認するための薬歴を含む、被験者の暫定病歴を検討することから始まります。 スクリーニング来院時に黄色ブドウ球菌（＋）の鼻培養を行った被験者については、再度鼻培養を実施する。 次に、すべての被験者に対して、被験者の両側の腕に焦点を当てた身​​体検査を実施し、腕の皮膚にひび割れ、破損、または感染症の痕跡がないことを確認します。 局所的な SCORAD および湿疹重症度スケールは、各肘前窩で完成します。 次に、TEWL メーターを使用して、各肘前窩の TEWL を測定します。 次に、ダイヤル液体抗菌石鹸で洗浄し、続いて 70%、次に 80% のアルコールで腕を拭くという計画で両腕を前処理します。 アルコールが乾いたら、治験コーディネーターの手袋をはめた手で被験者の個別のAMTクリームを片方の腕に薄く塗り、もう片方の腕にはセタフィルローションだけを塗ります。 二重盲検法で研究を実施できるように、2 つのクリームには「右」または「左」のラベルが付けられます（被験者と臨床研究者/コーディネーターの両方が、どちらの腕がどの治療を受けたかが分からなくなります）。 5 分後、両方の肘前窩の湿疹性皮膚と両腕の非病変皮膚の領域で定量的洗浄が実行されます。 洗浄ごとに、面積約 3.5 cm2 の滅菌ステンレス鋼シリンダーを皮膚表面にしっかりと保持し、2.5 mL の滅菌ストリッピング液 (SSFN) をシリンダー内に注意深く注入します。 次に、滅菌ゴムポリスマンを使用して皮膚を60秒間マッサージします。 SSFN はピペットで吸引され、滅菌試験管に移されます。 このプロセス全体が 2 回繰り返され、流体が一緒にプールされます。 プールされた液体は、コロニー計数法によって研究室で分析され、この時点で皮膚上の生菌の量が決定されます。 両腕の病変皮膚および非病変皮膚の皮膚スワブも採取して、皮膚上に存在する各細菌の種類と存在量を確認します。 次に被験者は、個別化された AMT クリームとセタフィル ローションのみの使い捨てアリコートと手袋を受け取り、実験 1 で決定された投与間隔 (ただし、TID を超えないように) で 1 つのアリコートを割り当てられた腕に塗布するように指示されます。 すべてのアリコートには、アリコートがコントロールのセタフィル ローションであるか AMT クリームであるかに基づいて、どちらの腕に適用するかに応じて、「左」または「右」のラベルが付けられます。 2 つの製品は外観と一貫性が同一であるため、被験者は 2 つの製品を区別できないはずです。 すべての被験者は、各アリコートを塗布する前に手を洗い、清潔な手袋を着用するように指示されます。 これで訪問診療は終了となります。 今回の訪問には約 60 分かかると予想されます。

フォローアップ訪問 1、2、および 3 (それぞれ 33 日 +/- 2 日、38 日 +/- 2 日、および 43 日 +/- 2 日) 被験者は、治療訪問後約 5 日ごとにクリニックに戻り、フォローアップ訪問。 この訪問中に、AMT クリームに対する副作用が記録されます。 次に、局所的な SCORAD および湿疹重症度スケールを使用して、被験者の各肘前窩の湿疹の重症度をスコア化します。 各肘前窩の TEWL も測定されます。 次に、各腕の肘前窩領域および各腕の非病変皮膚領域で定量的洗浄が実行されます。 次に、両腕の病変のある皮膚と病変のない皮膚の皮膚スワブ検査が行われます。 被験者は、どちらの腕に塗布するかに応じて「左」または「右」のラベルが貼られた、AMT クリームとセタフィル ローションの両方の新しく調製された使い捨てアリコートを受け取ります（フォローアップ訪問 1 および 2 の場合のみ）。 これらの活動により、研究訪問と研究関連のすべての手順が終了します。 次回の訪問にはそれぞれ約 45 分かかります。