Autológ mikrobiomátültetés kinetikai tulajdonságainak értékelése felnőtt atópiás dermatitisz betegeknél

Ezt a vizsgálatot három kísérletben végezzük a vizsgálat három céljának megfelelően. A résztvevők mindhárom vizsgálati kísérlethez külön-külön beleegyeznek, mivel minden kísérlethez más hozzájárulási forma tartozik. Míg az egyes alanyok mindhárom résztanulmányban részt vehetnek, ha mindhárom résztanulmányra jogosultak, a tantárgyaknak nem kell egynél több résztanulmányban részt venniük. Összesen 10 alanyt vonnak be az 1. és 2. kísérletbe, és körülbelül 14 alanyt vonnak be a 3. kísérletbe. Tekintettel arra, hogy az AD-betegeknek csak körülbelül 75-80%-át kolonizálja S. aureus, várhatóan közel 18-at szűrünk. -20 alany teljesíti a felvételi kritériumokat. A vizsgálatból kilépő alanyokat lecseréljük.

1. kísérlet: A bőrfelületen átültetett baktériumok időbeli stabilitásának meghatározása

A vizsgálat első része (1. kísérlet) 7 irodai látogatásból (szűrés, tenyésztés, kezelés és 3 nyomon követési látogatás) és egy telefonhívásból áll majd a jogosultsági információk továbbítására. Minden irodai látogatás az UCSD Bőrgyógyászati ​​Klinikán történik. Az egyes látogatások pontos eljárásait az alábbiakban tárgyaljuk.

Szűrőlátogatás (1. látogatás, 0. nap) A vizsgálati eljárások megkezdése előtt az alanyokat először felkérik, hogy nézzék át és írják alá a beleegyező nyilatkozatot. A tájékozott beleegyezés megszerzése után felülvizsgálják a felvételi/kizárási kritériumokat. Rövid kórtörténetet és fizikális vizsgálatot végeznek, hogy felmérjék, hogy az alany megfelel-e a vizsgálathoz szükséges kritériumoknak. Fogamzóképes korú női alanyok vizeletben terhességi tesztet végeznek rendelőnkben, hogy megbizonyosodjanak arról, hogy nem terhesek. Azon betegeknél, akik megfelelnek a felvételi és kizárási kritériumoknak, az egyik antecubitalis gödröcskében lévő léziós atópiás dermatitisz bőréről pálcikát vesznek (Kong és mtsai, 2012 kimutatták, hogy a S. aureus által kolonizált AD alanyok egész életében S. aureus baktériumok találhatók. bőrfelszínen, ezért azt várjuk, hogy egy pálcika elegendő), valamint egy orrtenyésztő tampon a S. aureus jelenlétének kimutatására az orrban. Ezzel a szűrési látogatás lezárul. A látogatás teljes ideje körülbelül 30 perc lesz.

Azokat a vizsgálati alanyokat, akik nem felelnek meg a felvételi/kizárási kritériumoknak tiltott gyógyszerek feljegyzett időkereten belüli alkalmazása vagy használata miatt, szűrési sikertelennek minősülnek. Ezeknél a betegeknél nem végeznek bőrkenetet. Ezek az alanyok a szükséges kimosódási időszak (7 nap helyi gyógyszeres, 28 nap orális gyógyszeres kezelés) letelte után visszatérhetnek egy újabb szűrővizsgálatra, ha erre kíváncsiak.

Telefon (3. nap +/- 1.) Az alanyokat 3 munkanapon belül telefonon értesítjük arról, hogy bőrükön és orrváladékán S. aureus nőtt-e vagy sem. A meticillinérzékeny S. aureusra (MSSA) pozitív bőrtenyészetben szenvedő alanyokat vonnak be a vizsgálatba. Kultúrlátogatás időpontja lesz ezeknek a résztvevőknek. Az alanyok kizárásra kerülnek, ha a következők bármelyikével rendelkeznek: negatív S. aureus bőrtenyészet vagy meticillin-rezisztens S. aureus (MRSA) pozitív bőrtenyészet. A teljes telefonbeszélgetés körülbelül 5 percet vesz igénybe.

Kultúrlátogatás (7. +/- 4. nap) A jogosult alanyok a szűrési látogatásuk után körülbelül egy héten belül visszatérnek kulturális látogatásra. A látogatás során négy (4) tenyésztési kenetet veszünk az alany nem léziós (nincs AD) bőréről a felkarján. Ezeket a tenyésztendő tamponokat tripsztikus szójalevesbe (TSB) helyezik a laboratóriumi feldolgozásig, ahol az alany antimikrobiális peptidet termelő Staph fajainak növesztésére használják fel az autológ mikrobiomátültetéshez. Az alanyok egy darab Dove hidratáló szappant is kapnak, amelyet zuhanyozáskor kell használniuk az utóvizsgálat befejezéséig. Azok az alanyok, akiknél pozitív S. aureus orrtenyészetet mutattak a szűrővizsgálaton (1. látogatás), egy tubus mupirocin kenőcsöt is kapnak. A kezelési látogatásuk előtt 5 nappal kezdődően napi kétszeri utasításokat kapnak a mupirocin kétoldali alkalmazására az elülső orrba. A teljes látogatás körülbelül 10 percet vesz igénybe.

Kezelési látogatás (28. +/- 7. nap) A + S. aureus szűrési tenyészetekkel rendelkező, jogosult alanyokat bevonják a vizsgálatba, és utasítják őket, hogy a szűrési látogatásuk után körülbelül 28 nappal térjenek vissza a klinikára. Ez a 3 hetes várakozási idő lehetővé teszi a laboratóriumi személyzet számára, hogy szaporítsa és előkészítse az alany endogén AMP-termelő baktériumait a Cetaphil-lel való összekeverésre a kezelési látogatás alkalmával. A valós forgatókönyvek lehető legnagyobb mértékű szimulálása érdekében az alany folytathatja szokásos tevékenységeit a vizsgálat során, beleértve a fürdést, zuhanyozást és a testmozgást. Ez a látogatás az alany időközi kórtörténetének áttekintésével kezdődik, beleértve a gyógyszeres kezelési előzményeket is, hogy megbizonyosodjon arról, hogy a látogatást követő 7 napon belül nem alkalmazott semmilyen lokális AD-kezelést a karján, illetve orális AD-kezelést 28 napon belül. Azoknál az alanyoknál, akiknél S. aureus (+) orrtenyészetet végeztek a szűrővizsgálaton, ismételt orrtenyésztést végeznek. Ezután minden alany esetében fókuszált fizikális vizsgálatot végeznek az alany kétoldali karjain, hogy megbizonyosodjanak arról, hogy a karokon nincs repedés, törés vagy bőrfertőzés. Ezután mindkét kart előkezeljük Dial folyékony antibakteriális szappannal, majd letöröljük a kart 70%-os, majd 80%-os alkohollal átitatott steril gézzel. Miután az alkohol megszáradt, a vizsgálati koordinátor kesztyűs kezei vékony rétegben az alany személyre szabott AMT-krémét kenik fel mindkét karjára. Öt perccel a krém felvitele után mennyiségi lemosást végeznek az egyik antecubitalis fossae ekcémás bőrén, valamint ugyanazon a karon a bőr egy nem léziós területén. Minden mosásnál egy körülbelül 3,5 cm2 területű, steril rozsdamentes acél hengert kell szilárdan a bőrfelülethez tartani, és 2,5 ml steril sztrippelő folyadékot (SSFN) óvatosan csepegtetünk a hengerbe. Ezután a bőrt 60 másodpercig masszírozzák egy steril gumi rendőr segítségével. Az SSFN-t pipettával leszívják, és steril kémcsőbe helyezik át. Ezt az egész folyamatot másodszor is megismételjük ugyanazon a helyen, és a folyadékot egyesítjük. Az összegyűjtött folyadékot a laboratóriumban telepszámláló módszerekkel elemzik, hogy meghatározzák az életképes baktériumkolóniák számát a bőrfelületen. Ezt követően a léziós és a nem léziós bőrről is pálcikát vesznek. Ezzel a kezelési látogatás lezárul. Ez a látogatás várhatóan körülbelül 30 percet vesz igénybe.

Nyomon követési látogatások A nyomon követési látogatások során minden alany visszatér a klinikára, hogy mennyiségileg lemossák a léziós és nem léziós bőrüket, valamint levegyenek egy bőrpálcát a léziós és nem léziós bőrükről. A 10 beiratkozott alanyt két csoportra osztják, és mindegyik csoport különböző időpontokban tér vissza nyomon követésre. Az első öt beiratkozott beteg az első csoportba kerül besorolásra, amely a következő időpontokban tér vissza nyomon követésre: 1, 4, 8 és 24 órával a transzplantáció után. A következő öt beteget a második csoportba sorolják be, és a következő időpontokban térnek vissza nyomon követésre: 1, 2, 4 és 7 nappal a transzplantáció után. A kvantitatív mosás az utolsó követési időpontban lezárja a vizsgálatot az adott résztvevő számára. Minden utóellenőrző látogatás körülbelül 20 percet vesz igénybe.

Az átültetett Staph fajok átlagos túlélését mind a léziós, mind a nem léziós bőrön minden időpontra ábrázoljuk. Ezekből az adatokból ki tudjuk majd számítani a baktériumok pusztulási ütemét az átültetés után, ami biztosítja számunkra a baktérium felezési idejét.

2. kísérlet: Az autológ mikrobiom transzplantációs krém alkalmazásának egyensúlyi állapotának megállapítása, amely ahhoz szükséges, hogy a transzplantált baktériumok sűrűsége hasonló legyen a normál bőrön lévő mikrobák átlagos koncentrációjához, körülbelül 105/cm2

A 2. kísérlet 4 irodalátogatásból (szűrés, tenyésztés, kezelés és nyomon követés), valamint egy telefonhívásból áll majd a jogosultsági információk továbbítására. Minden irodai látogatás az UCSD Bőrgyógyászati ​​Klinikán történik. Azoknak az alanyoknak, akik mind az 1., mind a 2. kísérletben részt vesznek, legalább az AMT krém 10 felezési idejével egyenértékű időt kell várniuk, mielőtt elkezdenék a 2. kísérlet vizsgálati eljárásait. ugyanaz, mint az 1. kísérletnél. A kezelési látogatás és az utóellenőrzés kismértékben eltér az 1. kísérletben szereplőktől, és az alábbiakban ismertetjük, aláhúzott változtatásokkal.

Kezelési látogatás (28. +/- 7. nap) A + S. aureus szűrési tenyészetekkel rendelkező, jogosult alanyokat bevonják a vizsgálatba, és utasítják őket, hogy térjenek vissza a klinikára körülbelül 28 nappal a szűrési látogatásuk után a kezelési látogatás céljából. Ez a 3 hetes várakozási idő a tenyésztési és a kezelési látogatások között lehetővé teszi a laboratóriumi személyzet számára, hogy szaporítsa és előkészítse az alany endogén AMP-termelő baktériumait a Cetaphil-lel való összekeverésre a kezelési látogatás alkalmával. A valós forgatókönyvek lehető legnagyobb mértékű szimulálása érdekében az alany folytathatja szokásos tevékenységeit a vizsgálat során, beleértve a fürdést, zuhanyozást és a testmozgást. Ez a látogatás az alany időközi kórtörténetének áttekintésével kezdődik, beleértve a gyógyszeres kezelési előzményeket is, hogy megbizonyosodjon arról, hogy a látogatást követő 7 napon belül nem alkalmazott semmilyen lokális AD-kezelést a karján, illetve orális AD-kezelést 28 napon belül. Azoknál az alanyoknál, akiknél S. aureus (+) orrtenyészetet végeztek a szűrővizsgálaton, ismételt orrtenyésztést végeznek. Ezután minden alany esetében fókuszált fizikális vizsgálatot végeznek az alany kétoldali karjain, hogy megbizonyosodjanak arról, hogy a karokon nincs repedés, törés vagy bőrfertőzés. Ezután az egyik kart előkezeljük Dial folyékony antibakteriális szappannal, majd a kart 70%-os, majd 80%-os alkohollal steril gézzel töröljük át. Miután az alkohol megszáradt, a vizsgálati koordinátor kesztyűs kezei vékony rétegben az alany személyre szabott AMT-krémét kenik fel az alany egyik karjára. Öt perccel később kvantitatív lemosást végeznek az AMT krémmel kezelt kar antecubitalis fossae ekcémás bőrén, valamint ugyanazon a karon a nem léziós bőrterületen. Minden mosásnál egy körülbelül 3,5 cm2 területű, steril rozsdamentes acél hengert kell szilárdan a bőrfelülethez tartani, és 2,5 ml steril sztrippelő folyadékot (SSFN) óvatosan csepegtetünk a hengerbe. Ezután a bőrt 60 másodpercig masszírozzák egy steril gumi rendőr segítségével. Az SSFN-t pipettával leszívják, és steril kémcsőbe helyezik át. Ezt az egész folyamatot másodszor is megismételjük, és a folyadékot egyesítjük. Az összegyűjtött folyadékot a laboratóriumban PCR-rel elemzik, hogy meghatározzák, hány és milyen típusú baktérium van jelen. A léziós és nem léziós bőrről is elkészül a bőrpálcika. Az alanyok ezután egyszer használatos alikvotokat kapnak saját AMT-krémükből és kesztyűjükből, hogy vigyék magukkal haza. Utasítást kapnak arra, hogy az 1. kísérlet eredményeiből számított felezési idő alapján, összesen 6 adagra (az adagolási ütemezésre) alkalmazzák az egyik aliquot részt ugyanarra a karra, amelyre a kezelési látogatás során alkalmazták. várhatóan eléri az egyensúlyi állapotot). Utasítást kapnak, hogy a krém minden felhordása előtt mossanak kezet és vegyenek fel kesztyűt. Ezzel a kezelési látogatás lezárul. Ez a látogatás várhatóan körülbelül 30 percet vesz igénybe.

Utóellenőrző látogatás (az AMT krém 7. felvitelének időpontjában) Az utóellenőrző vizit során az alanyok visszatérnek a klinikára, hogy kvantitatívan lemossák léziós és nem léziós bőrüket, hogy meghatározzák az S mennyiségét. .aureus ezen a látogatáson. A léziós és nem léziós bőrről is le kell venni a bőrt. Ez a látogatás lezárja a 2. kísérletet. Körülbelül 15 percig fog tartani.

További megfontolások: Ebben a kísérletben az a célunk, hogy megállapítsuk az AMT egyensúlyi állapotú abundanciáját a normál bőrön lévő mikrobák átlagos koncentrációjához hasonló baktériumsűrűséggel, körülbelül 105/cm2. Az 1. kísérlet eredményeit felhasználva megbecsülhetjük a baktériumok felezési idejét az alany bőrfelületén. Lehetséges, hogy az 1. kísérletben meghatározott AMT krém felezési ideje rövid lesz, esetleg akár néhány óra is lehet. Ha az AMT krém a transzplantált baktériumok olyan gyors elvesztését mutatja, hogy nem célszerű tovább növelni az AMT alkalmazási gyakoriságát (amelyet TID-nél nagyobbnak feltételezünk), és az AMT adagja gyakorlatilag nem növelhető a standard 108 baktériumtól/ gm, 10 g/m2 mennyiségben alkalmazva, az alany a maximális gyakorlati adagot (109 baktérium/g 40 g/m2-nél) a maximális gyakorlati gyakorisággal (TID) alkalmazza, és ezt egy hétig tesszük, hogy meghatározzuk, hány baktérium van. jelen van ezen kezelési megközelítés után. Bár ez Costello et al. adataiból nem valószínű. 2009-ben szeretnénk elkészíteni ezt a tartalék tervet, amely lehetővé teszi a tanulmány előrehaladását. Bár ezek az eredmények nem jelentenének egyensúlyi állapotot, az adatok elegendőek lennének egy későbbi klinikai vizsgálat megtervezéséhez, vagy arra a következtetésre, hogy a hosszú távú alkalmazási megközelítés nem éri meg a további elemzéseket.

3. kísérlet: A S. aureus állandósult állapotú előfordulásának mérése a résztvevő bőrén

A 3. kísérlet 6 irodai látogatásból (szűrés, tenyésztés, kezelés és 3 nyomon követési látogatás), valamint egy telefonhívásból áll majd a jogosultsági információk továbbítására. Minden irodai látogatás az UCSD Bőrgyógyászati ​​Klinikán történik. Azoknak az alanyoknak, akik részt vettek a 2. kísérletben, várniuk kell legalább az AMT krém 10 felezési idejével egyenértékű időt, mielőtt megkezdenék a 3. kísérlet vizsgálati eljárásait. A 3. kísérlet szűrése, telefonhívása és kultúrlátogatása megegyezik a az 1. kísérlethez. A kezelési látogatás és az utóellenőrzés kismértékben eltér az 1. kísérletben szereplőktől, és az alábbiakban ismertetjük, aláhúzott változtatásokkal.

Kezelési látogatás (28. +/- 7. nap) A + S. aureus szűrési tenyészetekkel rendelkező, jogosult alanyokat bevonják a vizsgálatba, és utasítják őket, hogy a szűrési látogatásuk után körülbelül 28 nappal térjenek vissza a klinikára. Ez a 3 hetes várakozási idő lehetővé teszi a laboratóriumi személyzet számára, hogy szaporítsa és előkészítse az alany endogén AMP-termelő baktériumait a Cetaphil-lel való összekeverésre a kezelési látogatás alkalmával. Az AMP-termelő baktériumokat is átvizsgálják, hogy megbizonyosodjanak arról, hogy nem patogén. A valós forgatókönyvek lehető legnagyobb mértékű szimulálása érdekében az alany folytathatja szokásos tevékenységeit a vizsgálat során, beleértve a fürdést, zuhanyozást és a testmozgást. Ez a látogatás az alany időközi kórtörténetének áttekintésével kezdődik, beleértve a gyógyszeres kezelési előzményeket is, hogy megbizonyosodjon arról, hogy a látogatást követő 7 napon belül nem alkalmazott semmilyen lokális AD-kezelést a karján, illetve orális AD-kezelést 28 napon belül. Azoknál az alanyoknál, akiknél S. aureus (+) orrtenyészetet végeztek a szűrővizsgálaton, ismételt orrtenyésztést végeznek. Ezután minden alany esetében fókuszált fizikális vizsgálatot végeznek az alany kétoldali karjain, hogy megbizonyosodjanak arról, hogy a karokon nincs repedés, törés vagy bőrfertőzés. A lokalizált SCORAD és az ekcéma súlyossági skáláját minden antecubitalis üregben kitöltik. Ezután egy TEWL-mérőt használnak az egyes antecubitalis üregek TEWL-értékének mérésére. Ezután mindkét kart előkezeljük Dial folyékony antibakteriális szappannal, majd letöröljük a karokat 70%-os, majd 80%-os alkohollal. Miután az alkohol megszáradt, a vizsgálati koordinátor kesztyűs kezei vékony rétegben az alany személyre szabott AMT-krémét kenik fel az alany egyik karjára, a másik karra pedig a Cetaphil lotiont. A két krémet „Jobb” vagy „Bal” címkével látják el, hogy a vizsgálatot kettős vak módszerrel lehessen lefolytatni (mind az alany, mind a klinikai vizsgáló/koordinátor vak lesz, hogy melyik kar milyen kezelésben részesült). Öt perccel később kvantitatív lemosást végeznek mindkét antecubitalis fossae ekcémás bőrén, valamint mindkét kar nem léziós bőrén. Minden mosásnál egy körülbelül 3,5 cm2 területű, steril rozsdamentes acél hengert kell szilárdan a bőrfelülethez tartani, és 2,5 ml steril sztrippelő folyadékot (SSFN) óvatosan csepegtetünk a hengerbe. Ezután a bőrt 60 másodpercig masszírozzák egy steril gumi rendőr segítségével. Az SSFN-t pipettával leszívják, és steril kémcsőbe helyezik át. Ezt az egész folyamatot másodszor is megismételjük, és a folyadékot egyesítjük. Az összegyűjtött folyadékot a laboratóriumban telepszámláló módszerekkel elemzik, hogy meghatározzák az életképes baktériumok mennyiségét a bőrön ebben az időpontban. Mindkét kar léziós és nem-sérüléses bőréről is mintát vesznek, hogy megállapítsák, milyen típusú és milyen mennyiségű baktérium található a bőrön. Az alany ezután egyszer használatos aliquot részeket kap egyéni AMT-kréméből és Cetaphil lotionjából önmagában, valamint kesztyűt, és azt az utasítást kapja, hogy az 1. kísérletben meghatározott adagolási időközönként (de ne haladja meg a TID-t) vigyen fel egy alikvotot a kijelölt karjára. Minden alikvot rész „Bal” vagy „Jobb” felirattal lesz megjelölve attól függően, hogy melyik karra kell alkalmazni, attól függően, hogy az alikvot Cetaphil kontrollápolóból vagy AMT krémből áll-e. Mivel a két termék megjelenésében és állagában azonos, az alanyok nem tudnak különbséget tenni a két termék között. Minden alanynak utasítani kell, hogy minden aliquot alkalmazás előtt mosson kezet és vegyen fel tiszta kesztyűt. Ezzel a kezelési látogatás lezárul. Ez a látogatás várhatóan körülbelül 60 percet vesz igénybe.

1., 2. és 3. utóellenőrzés (33 +/- 2 nap, 38 +/- 2 nap és 43 +/- 2 nap) Az alanyok a kezelési vizit után körülbelül 5 naponta visszatérnek a klinikára egy nyomon követési látogatás. A látogatás során az AMT krémmel kapcsolatos esetleges mellékhatásokat rögzítik. Ezután a lokalizált SCORAD és az ekcéma súlyossági skála segítségével értékeljük az alany ekcémájának súlyosságát az egyes antecubitalis fossae-kon. Minden antecubitalis fossa TEWL-értékét szintén megmérjük. Ezután kvantitatív lemosást végeznek mindkét karon az antecubitalis fossa régiójában, valamint a nem léziós bőrterületen mindegyik karon. Ezután mindkét karról pálcikát kell venni a léziós és a nem léziós bőrről. Az alany az AMT krémből és a Cetaphil lotionból frissen elkészített, egyszer használatos aliquot részeket kap, amelyek „Bal” vagy „Jobb” felirattal vannak ellátva, attól függően, hogy melyik karra kell felvinni az aliquot részt (csak az 1. és 2. utóellenőrzési viziten). Ezek a tevékenységek zárják le a tanulmányi látogatást és a tanulmányokkal kapcsolatos összes eljárást. Minden nyomon követési látogatás körülbelül 45 percet vesz igénybe.