Evaluatie van de kinetische eigenschappen van een autologe microbioomtransplantatie bij volwassen patiënten met atopische dermatitis

Dit onderzoek zal worden uitgevoerd als drie experimenten in overeenstemming met de drie doelstellingen van het onderzoek. Deelnemers zullen afzonderlijk toestemming geven voor alle drie de onderzoeksexperimenten, aangezien elk experiment een ander toestemmingsformulier zal hebben. Hoewel individuele proefpersonen aan alle drie de deelonderzoeken kunnen deelnemen als ze voor alle drie in aanmerking komen, hoeven proefpersonen niet aan meer dan één van de deelonderzoeken deel te nemen. Er zullen in totaal 10 proefpersonen worden ingeschreven in Experiment 1 en 2, en ongeveer 14 proefpersonen zullen worden ingeschreven in Experiment 3. Gezien het feit dat slechts ongeveer 75-80% van de AD-patiënten wordt gekoloniseerd door S. aureus, verwachten we dichter bij 18 te screenen. -20 onderwerpen om aan de inclusiecriteria te voldoen. Proefpersonen die zich terugtrekken uit het onderzoek worden vervangen.

Experiment 1: Bepaling van de stabiliteit van getransplanteerde bacteriën op het huidoppervlak in de tijd

Dit eerste deel van het onderzoek (experiment 1) zal bestaan ​​uit 7 kantoorbezoeken (screening, cultuur, behandeling en 3 vervolgbezoeken) en één telefoontje om informatie over geschiktheid door te geven. Alle kantoorbezoeken vinden plaats in de UCSD Dermatology Clinic. De exacte procedures voor elk bezoek worden hieronder besproken.

Screeningsbezoek (Bezoek 1, Dag 0) Voordat met enige studieprocedure wordt begonnen, wordt proefpersonen eerst gevraagd het formulier voor geïnformeerde toestemming te bekijken en te ondertekenen. Na het verkrijgen van geïnformeerde toestemming zullen de opname-/uitsluitingscriteria worden herzien. Een korte medische geschiedenis en lichamelijk onderzoek zullen worden uitgevoerd om te helpen beoordelen of het onderwerp voldoet aan de vereiste criteria voor het onderzoek. Vrouwelijke proefpersonen die zwanger kunnen worden, zullen in ons kantoor een urine-zwangerschapstest doen om er zeker van te zijn dat ze niet zwanger zijn. Bij patiënten die voldoen aan de inclusie- en exclusiecriteria wordt vervolgens een huiduitstrijkje gemaakt op de laesie van atopische dermatitis in een van hun antecubitale fossae (Kong et al, 2012 toonden aan dat AD-patiënten gekoloniseerd door S. aureus gedurende hun hele leven S. aureus-bacteriën hebben). huidoppervlak, daarom verwachten we dat één uitstrijkje voldoende is), evenals een neuscultuuruitstrijkje om de aanwezigheid van S. aureus in de neusgaten te detecteren. Hiermee wordt het screeningsbezoek afgesloten. De totale tijd voor dit bezoek is ongeveer 30 minuten.

Proefpersonen die niet voldoen aan de opname-/uitsluitingscriteria als gevolg van de toepassing of het gebruik van verboden medicijnen binnen het aangegeven tijdsbestek, worden beschouwd als screen-failures. Huiduitstrijkjes van deze patiënten worden niet uitgevoerd. Deze proefpersonen kunnen terugkomen voor een ander screeningsbezoek na het voltooien van de noodzakelijke wash-out-periode (7 dagen voor lokale medicatie, 28 dagen voor orale medicatie) als ze hierin geïnteresseerd zijn.

Telefoon (Dag 3 +/- 1) Proefpersonen krijgen binnen 3 werkdagen telefonisch bericht of hun huid en neusuitstrijkjes S. aureus hebben aangegroeid. Proefpersonen met een huidcultuur die positief is voor methicillinegevoelige S. aureus (MSSA) zullen in het onderzoek worden opgenomen. Voor deze deelnemers wordt een cultuurbezoekafspraak ingepland. Onderwerpen worden uitgesloten als ze een van de volgende kenmerken hebben: een negatieve S. aureus-huidcultuur of een huidcultuur die positief is voor methicilline-resistente S. aureus (MRSA). Het totale telefoongesprek duurt ongeveer 5 minuten.

Cultuurbezoek (dag 7 +/- 4) In aanmerking komende proefpersonen komen binnen ongeveer een week na hun screeningbezoek terug voor een cultuurbezoek. Tijdens dit bezoek nemen we vier (4) kweekuitstrijkjes van de niet-laesie (geen AD) huid van de proefpersoon op hun bovenarmen. Deze kweekuitstrijkjes worden in tryptische sojabouillon (TSB) geplaatst totdat ze in het laboratorium worden verwerkt, waar ze zullen worden gebruikt om de antimicrobiële peptide-producerende stafylokoksoort van de proefpersoon te laten groeien voor gebruik voor de autologe microbioomtransplantatie. De proefpersonen krijgen ook een stuk Dove-vochtinbrengende zeep, die ze moeten gebruiken wanneer ze douchen tot na het vervolgbezoek. Proefpersonen met een positieve S. aureus-neuskweek bij het screeningsbezoek (Bezoek 1) krijgen ook een tube mupirocinezalf. Ze zullen worden geïnstrueerd over de toepassing van mupirocine op de voorste neusgaten, twee keer per dag bilateraal vanaf 5 dagen voorafgaand aan hun behandelingsbezoek. Het totale bezoek duurt ongeveer 10 minuten.

Behandelbezoek (dag 28 +/- 7) In aanmerking komende proefpersonen met + S. aureus-screeningsculturen zullen worden opgenomen in het onderzoek en geïnstrueerd om ongeveer 28 dagen na hun screeningbezoek terug te keren naar de kliniek. Deze wachttijd van 3 weken stelt het laboratoriumpersoneel in staat om de endogene AMP-producerende bacteriën van de proefpersoon te kweken en voor te bereiden om te worden gemengd met Cetaphil voor toepassing tijdens het behandelingsbezoek. Om scenario's uit het echte leven zoveel mogelijk te simuleren, mag de proefpersoon tijdens dit onderzoek zijn gebruikelijke activiteiten voortzetten, waaronder baden, douchen en sporten. Dit bezoek begint met het beoordelen van de tussentijdse medische geschiedenis van de proefpersoon, inclusief de medicatiegeschiedenis, om er zeker van te zijn dat hij/zij binnen 7 dagen na dit bezoek geen lokale AD-behandelingen op de armen heeft gebruikt, of orale AD-behandelingen binnen 28 dagen. Voor proefpersonen die een S. aureus (+) neuskweek hadden tijdens het screeningsbezoek, zal een herhaalde neuskweek worden uitgevoerd. Voor alle proefpersonen wordt vervolgens een gericht lichamelijk onderzoek uitgevoerd van de bilaterale armen van de proefpersoon om er zeker van te zijn dat er geen tekenen zijn van scheuren, breuken of infecties van de huid op de armen. Vervolgens zullen we beide armen voorbehandelen met een regime van wassen met Dial vloeibare antibacteriële zeep, gevolgd door het afvegen van de arm met steriel gaas gedrenkt in 70%, daarna 80% alcohol. Zodra de alcohol is opgedroogd, wordt een dunne laag van de geïndividualiseerde AMT-crème van de proefpersoon op elke arm aangebracht door de gehandschoende handen van een studiecoördinator. Vijf minuten na het aanbrengen van de crème wordt een kwantitatieve wassing uitgevoerd op de eczemateuze huid van een antecubitale fossae, evenals op een niet-laesie huidgebied op dezelfde arm. Voor elke wasbeurt wordt een steriele roestvrijstalen cilinder met een oppervlakte van ongeveer 3,5 cm2 stevig tegen het huidoppervlak gehouden en wordt 2,5 ml van een steriele stripvloeistof (SSFN) voorzichtig in de cilinder gedruppeld. Vervolgens wordt de huid gedurende 60 seconden gemasseerd met behulp van een steriele rubberen politieagent. De SSFN wordt opgezogen met een pipet en overgebracht naar een steriele reageerbuis. Dit hele proces wordt een tweede keer op dezelfde plaats herhaald en de vloeistof wordt samengevoegd. De gepoolde vloeistof zal in het laboratorium worden geanalyseerd via methodes voor het tellen van kolonies om het aantal levensvatbare bacteriekolonies op het huidoppervlak te bepalen. Vervolgens wordt een huiduitstrijkje van zowel de beschadigde als de niet-beschadigde huid genomen. Hiermee wordt het behandelbezoek afgesloten. We verwachten dat dit bezoek ongeveer 30 minuten duurt.

Vervolgbezoeken Tijdens vervolgbezoeken keert elke proefpersoon terug naar de kliniek voor een kwantitatieve wasbeurt van hun laesie- en niet-laesiehuid en een huiduitstrijkje van hun laesie- en niet-laesiehuid. De 10 ingeschreven proefpersonen worden in twee groepen verdeeld en elke groep komt op verschillende tijdstippen terug voor follow-up. De eerste vijf patiënten die zich inschrijven, worden toegewezen aan de eerste groep, die op de volgende tijdstippen zal terugkeren voor follow-up: 1, 4, 8 en 24 uur na de transplantatie. De volgende vijf patiënten die worden ingeschreven, worden toegewezen aan de tweede groep en komen terug voor follow-up op de volgende tijdstippen: 1, 2, 4 en 7 dagen na de transplantatie. De kwantitatieve wasbeurt op het laatste follow-up-tijdstip zal het onderzoek voor die deelnemer afronden. Elk vervolgbezoek duurt ongeveer 20 minuten.

De gemiddelde overleving van de getransplanteerde stafylokoksoort op zowel laesie- als niet-laesiehuid zal voor elk tijdstip worden uitgezet. Op basis van deze gegevens kunnen we de snelheid van achteruitgang van de bacterie na transplantatie berekenen, wat ons de halfwaardetijd van de bacterie zal geven.

Experiment 2: Om de steady-state overvloed aan autologe microbioom transplantatiecrème vast te stellen die nodig is om een ​​dichtheid van getransplanteerde bacteriën te bereiken die vergelijkbaar is met de gemiddelde concentratie van microben op een normale huid, ongeveer 105/cm2

Experiment 2 bestaat uit 4 kantoorbezoeken (screening, cultuur, behandeling en follow-up), evenals één telefoontje om informatie over geschiktheid door te geven. Alle kantoorbezoeken vinden plaats in de UCSD Dermatology Clinic. Proefpersonen die zowel aan experiment 1 als aan experiment 2 deelnemen, moeten ten minste een tijdsperiode wachten die gelijk is aan 10 halfwaardetijden van de AMT-crème voordat ze met de onderzoeksprocedures van experiment 2 beginnen. De screenings-, telefoongesprekken en cultuurbezoeken voor experiment 3 zijn hetzelfde als voor experiment 1. Het behandelingsbezoek en de follow-upbezoeken verschillen enigszins van die in experiment 1 en zullen hieronder worden beschreven, waarbij de wijzigingen zijn onderstreept.

Behandelingsbezoek (dag 28 +/- 7) In aanmerking komende proefpersonen met + S. aureus-screeningsculturen zullen worden opgenomen in het onderzoek en geïnstrueerd om ongeveer 28 dagen na hun screeningbezoek terug te keren naar de kliniek voor het behandelingsbezoek. Door deze wachttijd van 3 weken tussen de kweek- en behandelingsbezoeken kan het laboratoriumpersoneel de endogene AMP-producerende bacteriën van de proefpersoon kweken en voorbereiden om te worden gemengd met Cetaphil voor toepassing tijdens het behandelingsbezoek. Om scenario's uit het echte leven zoveel mogelijk te simuleren, mag de proefpersoon tijdens dit onderzoek zijn gebruikelijke activiteiten voortzetten, waaronder baden, douchen en sporten. Dit bezoek begint met het beoordelen van de tussentijdse medische geschiedenis van de proefpersoon, inclusief de medicatiegeschiedenis, om er zeker van te zijn dat hij/zij binnen 7 dagen na dit bezoek geen lokale AD-behandelingen op de armen heeft gebruikt, of orale AD-behandelingen binnen 28 dagen. Voor proefpersonen die een S. aureus (+) neuskweek hadden tijdens het screeningsbezoek, zal een herhaalde neuskweek worden uitgevoerd. Voor alle proefpersonen wordt vervolgens een gericht lichamelijk onderzoek uitgevoerd van de bilaterale armen van de proefpersoon om er zeker van te zijn dat er geen tekenen zijn van scheuren, breuken of infecties van de huid op de armen. Vervolgens zullen we één arm voorbehandelen met een regime van wassen met Dial vloeibare antibacteriële zeep, gevolgd door het afvegen van de arm met 70% gevolgd door 80% alcohol met steriel gaas. Zodra de alcohol is opgedroogd, wordt een dunne laag van de geïndividualiseerde AMT-crème van de proefpersoon op een van de armen van de proefpersoon aangebracht door de gehandschoende handen van een studiecoördinator. Vijf minuten later wordt een kwantitatieve wassing uitgevoerd op de eczemateuze huid van de antecubitale fossae van de met de AMT-crème behandelde arm, evenals op een gebied met niet-laesie op diezelfde arm. Voor elke wasbeurt wordt een steriele roestvrijstalen cilinder met een oppervlakte van ongeveer 3,5 cm2 stevig tegen het huidoppervlak gehouden en wordt 2,5 ml van een steriele stripvloeistof (SSFN) voorzichtig in de cilinder gedruppeld. Vervolgens wordt de huid gedurende 60 seconden gemasseerd met behulp van een steriele rubberen politieagent. De SSFN wordt opgezogen met een pipet en overgebracht naar een steriele reageerbuis. Dit hele proces wordt een tweede keer herhaald en de vloeistof wordt samengevoegd. De gepoolde vloeistof wordt in het laboratorium via PCR geanalyseerd om te bepalen hoeveel en welk type bacteriën aanwezig zijn. Er zal ook een huiduitstrijkje van de laesie en de niet-laesie worden gemaakt. De proefpersonen krijgen dan aliquots voor eenmalig gebruik van hun eigen AMT-crème en handschoenen om mee naar huis te nemen. Ze zullen worden geïnstrueerd om een ​​van de aliquots aan te brengen op dezelfde arm waarop het was aangebracht tijdens het behandelingsbezoek met een doseringsinterval bepaald op basis van de halfwaardetijd berekend op basis van de resultaten van Experiment 1 voor een totaal van 6 doses (het doseringsschema voorspeld om een ​​steady state te bereiken). Ze zullen worden geïnstrueerd om hun handen te wassen en handschoenen aan te trekken voordat ze de crème aanbrengen. Hiermee wordt het behandelbezoek afgesloten. We verwachten dat dit bezoek ongeveer 30 minuten duurt.

Vervolgbezoek (vindt plaats op het moment van de 7e toepassing van de AMT-crème) Tijdens het vervolgbezoek zullen proefpersonen terugkeren naar de kliniek voor een kwantitatieve wasbeurt van hun laesie en niet-laesie huid om de overvloed aan S te bepalen aureus bij dit bezoek. Er zal ook een huiduitstrijkje van de laesie en de niet-laesie worden gemaakt. Met dit bezoek wordt experiment 2 afgesloten. Het duurt ongeveer 15 minuten.

Aanvullende overwegingen: In dit experiment is het ons doel om de steady-state overvloed aan AMT vast te stellen met behulp van een bacteriedichtheid die vergelijkbaar is met de gemiddelde concentratie van microben op een normale huid, ongeveer 105/cm2. Met behulp van de resultaten van experiment 1 kunnen we de halfwaardetijd van de bacteriën op het huidoppervlak van het onderwerp schatten. Het is mogelijk dat de halfwaardetijd van de AMT-crème, zoals bepaald in Experiment 1, kort is, mogelijk zelfs enkele uren. Als de AMT-crème een snel verlies van getransplanteerde bacteriën vertoont, zodat het onpraktisch is om de toedieningsfrequentie van de AMT verder te verhogen (aangenomen als groter dan TID), en de dosis van de AMT praktisch niet kan worden verhoogd van standaard 108 bacteriën/ gm, toegepast bij 10 gm/m2, zal de proefpersoon de maximale praktische dosis (109 bacteriën/g bij 40 gm/m2) toepassen bij de maximaal praktische frequentie (TID), en we zullen dit gedurende een week doen om te bepalen hoeveel bacteriën er zijn aanwezig na deze behandelmethode. Hoewel dit niet waarschijnlijk is op basis van de gegevens van Costello et al. in 2009 willen we dit back-upplan klaar hebben om de studie vooruit te laten gaan. Hoewel deze resultaten geen stabiele toestand zouden vertegenwoordigen, zouden de gegevens voldoende zijn om het ontwerp van een volgende klinische proef mogelijk te maken of om te concluderen dat een toepassingsbenadering op lange termijn geen verdere analyses waard is.

Experiment 3: Om de steady-state overvloed van S. aureus op de huid van de deelnemer te meten

Experiment 3 bestaat uit 6 kantoorbezoeken (screening, cultuur, behandeling en 3 vervolgbezoeken), evenals één telefoontje om informatie over geschiktheid door te geven. Alle kantoorbezoeken vinden plaats in de UCSD Dermatology Clinic. Proefpersonen die hebben deelgenomen aan Experiment 2 moeten ten minste een tijdsperiode wachten die gelijk is aan 10 halfwaardetijden van de AMT-crème voordat ze beginnen met de onderzoeksprocedures van Experiment 3. De screening-, telefoongesprekken en cultuurbezoeken voor Experiment 3 zijn hetzelfde als voor Proef 1. Het behandelingsbezoek en de follow-upbezoeken verschillen enigszins van die in experiment 1 en zullen hieronder worden beschreven, waarbij de wijzigingen zijn onderstreept.

Behandelbezoek (dag 28 +/- 7) In aanmerking komende proefpersonen met + S. aureus-screeningsculturen zullen worden opgenomen in het onderzoek en geïnstrueerd om ongeveer 28 dagen na hun screeningbezoek terug te keren naar de kliniek. Deze wachttijd van 3 weken stelt het laboratoriumpersoneel in staat om de endogene AMP-producerende bacteriën van de proefpersoon te kweken en voor te bereiden om te worden gemengd met Cetaphil voor toepassing tijdens het behandelingsbezoek. AMP-producerende bacteriën zullen ook worden gescreend om er zeker van te zijn dat ze niet pathogeen zijn. Om scenario's uit het echte leven zoveel mogelijk te simuleren, mag de proefpersoon tijdens dit onderzoek zijn gebruikelijke activiteiten voortzetten, waaronder baden, douchen en sporten. Dit bezoek begint met het beoordelen van de tussentijdse medische geschiedenis van de proefpersoon, inclusief de medicatiegeschiedenis, om er zeker van te zijn dat hij/zij binnen 7 dagen na dit bezoek geen lokale AD-behandelingen op de armen heeft gebruikt, of orale AD-behandelingen binnen 28 dagen. Voor proefpersonen die een S. aureus (+) neuskweek hadden tijdens het screeningsbezoek, zal een herhaalde neuskweek worden uitgevoerd. Voor alle proefpersonen wordt vervolgens een gericht lichamelijk onderzoek uitgevoerd van de bilaterale armen van de proefpersoon om er zeker van te zijn dat er geen tekenen zijn van scheuren, breuken of infecties van de huid op de armen. De gelokaliseerde SCORAD en Eczeem Severity Scale zullen worden ingevuld op elke antecubitale fossa. Vervolgens wordt een TEWL-meter gebruikt om de TEWL van elke antecubitale fossa te meten. Vervolgens zullen we beide armen voorbehandelen met een regime van wassen met Dial vloeibare antibacteriële zeep, gevolgd door het afvegen van de armen met 70%, daarna 80% alcohol. Zodra de alcohol is opgedroogd, wordt een dunne laag van de geïndividualiseerde AMT-crème van de proefpersoon op één arm aangebracht door de gehandschoende handen van een studiecoördinator en alleen Cetaphil-lotion op de andere arm. De twee crèmes krijgen het label 'Rechts' of 'Links', zodat het onderzoek dubbelblind kan worden uitgevoerd (zowel de proefpersoon als de klinische onderzoeker/coördinator zullen blind zijn voor welke arm welke behandeling heeft gekregen). Vijf minuten later wordt een kwantitatieve wassing uitgevoerd op de eczemateuze huid van beide antecubitale fossae en op een gebied met niet-laesie van beide armen. Voor elke wasbeurt wordt een steriele roestvrijstalen cilinder met een oppervlakte van ongeveer 3,5 cm2 stevig tegen het huidoppervlak gehouden en wordt 2,5 ml van een steriele stripvloeistof (SSFN) voorzichtig in de cilinder gedruppeld. Vervolgens wordt de huid gedurende 60 seconden gemasseerd met behulp van een steriele rubberen politieagent. De SSFN wordt opgezogen met een pipet en overgebracht naar een steriele reageerbuis. Dit hele proces wordt een tweede keer herhaald en de vloeistof wordt samengevoegd. De gepoolde vloeistof zal in het laboratorium worden geanalyseerd via methoden voor het tellen van kolonies om de hoeveelheid levensvatbare bacteriën op de huid op dit tijdstip te bepalen. Huiduitstrijkjes van laesie en niet-laesie huid van beide armen zullen ook worden genomen om te bepalen welk type en de hoeveelheid van elke bacterie op de huid aanwezig is. De proefpersoon krijgt dan aliquots voor eenmalig gebruik van zijn geïndividualiseerde AMT-crème en Cetaphil-lotion alleen, evenals handschoenen, en geïnstrueerd om één aliquot op zijn toegewezen arm aan te brengen met het doseringsinterval bepaald in Experiment 1 (maar niet TID overschrijden). Alle aliquots worden gelabeld met 'Links' of 'Rechts', afhankelijk van op welke arm ze moeten worden aangebracht op basis van het feit of het aliquot controle Cetaphil-lotion of de AMT-crème is. Aangezien de twee producten qua uiterlijk en consistentie identiek zijn, mogen proefpersonen geen onderscheid kunnen maken tussen de twee producten. Alle proefpersonen zullen worden geïnstrueerd om hun handen te wassen en schone handschoenen aan te trekken voor elke toepassing van een aliquot. Hiermee wordt het behandelbezoek afgesloten. We verwachten dat dit bezoek ongeveer 60 minuten duurt.

Vervolgbezoeken 1, 2 en 3 (respectievelijk dag 33 +/- 2 dagen, 38 +/- 2 dagen en 43 +/- 2 dagen) Proefpersonen zullen ongeveer elke 5 dagen na het behandelingsbezoek terugkeren naar de kliniek voor een Volgende ontmoeting. Tijdens dit bezoek worden eventuele bijwerkingen van de AMT-crème geregistreerd. Vervolgens zal de gelokaliseerde SCORAD en Eczema Severity Scale worden gebruikt om de ernst van het eczeem van de proefpersoon op elk van zijn antecubitale fossae te scoren. De TEWL van elke antecubitale fossa zal ook worden gemeten. Vervolgens wordt een kwantitatieve wasbeurt uitgevoerd op elke arm in het gebied van de antecubitale fossa en op een gebied met niet-laesie op elke arm. Daarna wordt een huiduitstrijkje gemaakt van de laesie en de niet-laesie van beide armen. De proefpersoon krijgt vers bereide aliquots voor eenmalig gebruik van zowel de AMT-crème als de Cetaphil-lotion met het label 'Links' of 'Rechts', afhankelijk van op welke arm de aliquot moet worden aangebracht (alleen voor vervolgbezoeken 1 en 2). Deze activiteiten sluiten het studiebezoek en alle studiegerelateerde procedures af. Elk vervolgbezoek duurt ongeveer 45 minuten.