Avaliação das propriedades cinéticas de um transplante autólogo de microbioma em pacientes adultos com dermatite atópica

Este estudo será conduzido como três experimentos de acordo com os três objetivos do estudo. Os participantes consentirão com todos os três experimentos do estudo separadamente, pois cada experimento terá um formulário de consentimento diferente. Embora indivíduos individuais possam participar de todos os três subestudos se forem elegíveis para todos os três, não há exigência de que os indivíduos participem de mais de um dos subestudos. Um total de 10 indivíduos serão incluídos nos Experimentos 1 e 2, e aproximadamente 14 indivíduos serão incluídos no Experimento 3. Dado que apenas aproximadamente 75-80% dos pacientes com DA são colonizados por S. aureus, esperamos rastrear mais perto de 18 -20 indivíduos para preencher os critérios de inclusão. Os indivíduos que se retirarem do estudo serão substituídos.

Experimento 1: Determinação da estabilidade de bactérias transplantadas na superfície da pele ao longo do tempo

Esta primeira parte do estudo (Experiência 1) consistirá em 7 visitas ao consultório (Triagem, Cultura, Tratamento e 3 visitas de Acompanhamento) e um telefonema para transmitir informações de elegibilidade. Todas as visitas ao consultório ocorrerão na Clínica de Dermatologia da UCSD. Os procedimentos exatos para cada visita são discutidos abaixo.

Visita de Triagem (Visita 1, Dia 0) Antes de iniciar qualquer procedimento do estudo, os participantes primeiro serão solicitados a revisar e assinar o formulário de consentimento informado. Após obter o consentimento informado, os critérios de inclusão/exclusão serão revistos. Um breve histórico médico e exame físico serão realizados para ajudar a avaliar se o sujeito atende aos critérios exigidos para o estudo. Indivíduos do sexo feminino com potencial para engravidar farão um teste de gravidez de urina em nosso consultório para garantir que não estejam grávidas. Os pacientes que atendem aos critérios de inclusão e exclusão terão um swab de pele realizado na pele da dermatite atópica lesional em uma de suas fossas antecubitais (Kong et al, 2012 mostraram que indivíduos com DA colonizados por S. aureus têm bactérias S. aureus residentes ao longo de sua superficial da pele, portanto esperamos que um swab seja suficiente), bem como um swab de cultura nasal para detectar a presença de S. aureus nas narinas. Isso concluirá a visita de triagem. O tempo total desta visita será de aproximadamente 30 minutos.

Serão considerados reprovados na triagem os sujeitos que não atenderem aos critérios de inclusão/exclusão devido à aplicação ou uso de medicamentos proibidos no prazo observado. Swabs de pele desses pacientes não serão realizados. Esses indivíduos podem retornar para outra visita de triagem após completar o período de wash-out necessário (7 dias para medicamentos tópicos, 28 dias para medicamentos orais) se estiverem interessados ​​em fazê-lo.

Telefone (Dia 3 +/- 1) Os indivíduos serão notificados por telefone dentro de 3 dias úteis se sua pele e zaragatoas nasais desenvolveram ou não S. aureus. Indivíduos com cultura de pele positiva para S. aureus sensível à meticilina (MSSA) serão incluídos no estudo. Será agendada uma visita cultural para estes participantes. Os indivíduos serão excluídos se tiverem qualquer um dos seguintes: uma cultura de pele negativa para S. aureus ou uma cultura de pele positiva para S. aureus resistente à meticilina (MRSA). A conversa telefônica total deve levar aproximadamente 5 minutos.

Visita de Cultura (Dia 7 +/- 4) Os indivíduos elegíveis retornarão para uma visita de cultura aproximadamente uma semana após a visita de triagem. Durante esta visita, coletaremos quatro (4) amostras de cultura da pele não lesiva (sem DA) do sujeito em seus braços. Esses cotonetes de cultura serão colocados em caldo tríptico de soja (TSB) até serem processados ​​no laboratório, onde serão usados ​​para cultivar as espécies Staph produtoras de peptídeos antimicrobianos do sujeito para usar no transplante autólogo de microbioma. Os indivíduos também receberão uma barra de sabonete hidratante Dove, que serão instruídos a usar sempre que tomarem banho até que a visita de acompanhamento seja concluída. Indivíduos com cultura nasal positiva para S. aureus na visita de triagem (Visita 1) também receberão um tubo de pomada de mupirocina. Eles serão instruídos sobre a aplicação de mupirocina nas narinas anteriores bilateralmente, duas vezes ao dia, começando 5 dias antes da consulta de tratamento. A visita total levará aproximadamente 10 minutos.

Visita de Tratamento (Dia 28 +/- 7) Indivíduos elegíveis com culturas de triagem + S. aureus serão incluídos no estudo e instruídos a retornar à clínica aproximadamente 28 dias após a visita de triagem. Este período de espera de 3 semanas permitirá que a equipe do laboratório cultive e prepare as bactérias endógenas produtoras de AMP do sujeito para serem misturadas com Cetaphil para aplicação na consulta de tratamento. Para simular cenários da vida real, tanto quanto possível, o sujeito poderá continuar suas atividades habituais durante este estudo, incluindo tomar banho, tomar banho e se exercitar. Esta visita começará revisando o histórico médico provisório do sujeito, incluindo o histórico de medicamentos para garantir que ele/ela não tenha usado nenhum tratamento tópico de AD em seus braços dentro de 7 dias ou tratamentos orais de AD dentro de 28 dias desta visita. Para indivíduos que tiveram uma cultura nasal de S. aureus (+) na visita de triagem, uma cultura nasal repetida será realizada. Para todos os indivíduos, um exame físico focado será realizado nos braços bilaterais do indivíduo para garantir que não haja evidência de rachaduras, rupturas ou infecções na pele dos braços. Em seguida, pré-trataremos ambos os braços com um regime de lavagem com sabonete antibacteriano líquido Dial, seguido de limpeza do braço com gaze estéril embebida em álcool 70% e depois 80%. Depois que o álcool secar, uma fina camada do creme AMT individualizado do sujeito será aplicada em cada braço pelas mãos enluvadas de um coordenador do estudo. Cinco minutos após a aplicação do creme, será realizada uma lavagem quantitativa na pele eczematosa de uma fossa antecubital, bem como em uma área de pele não lesada do mesmo braço. Para cada lavagem, um cilindro estéril de aço inoxidável com uma área aproximada de 3,5 cm2 será mantido firmemente na superfície da pele e 2,5 mL de fluido de remoção estéril (SSFN) serão cuidadosamente instilados no cilindro. A pele será então massageada por 60 segundos usando um policial de borracha estéril. O SSFN será aspirado com uma pipeta e transferido para um tubo de ensaio estéril. Todo esse processo será repetido uma segunda vez no mesmo local e o fluido será reunido. O fluido acumulado será analisado em laboratório por meio de métodos de contagem de colônias para determinar o número de colônias de bactérias viáveis ​​na superfície da pele. Um esfregaço de pele de pele lesional e não lesional será então coletado. Isso concluirá a visita de tratamento. Esperamos que esta visita leve aproximadamente 30 minutos.

Visitas de acompanhamento Durante as visitas de acompanhamento, cada indivíduo retornará à clínica para uma lavagem quantitativa de sua pele lesional e não lesional e uma zaragatoa de pele lesional e não lesional. Os 10 indivíduos inscritos serão divididos em dois grupos, e cada grupo retornará para acompanhamento em momentos diferentes. Os cinco primeiros pacientes inscritos serão alocados no primeiro grupo, que retornará para acompanhamento nos seguintes momentos: 1, 4, 8 e 24 horas após o transplante. Os próximos cinco pacientes inscritos serão designados para o segundo grupo e retornarão para acompanhamento nestes momentos: 1, 2, 4 e 7 dias após o transplante. A lavagem quantitativa no ponto de tempo final de acompanhamento concluirá o estudo para aquele participante. Cada visita de acompanhamento levará aproximadamente 20 minutos.

A sobrevivência média das espécies de Staph transplantadas na pele lesional e não lesional será plotada para cada ponto de tempo. A partir desses dados poderemos calcular a taxa de declínio da bactéria após o transplante, o que nos dará a meia-vida da bactéria.

Experimento 2: Para estabelecer a abundância em estado estacionário de aplicação de creme de transplante de microbioma autólogo necessária para atingir uma densidade de bactérias transplantadas semelhante à concentração média de micróbios na pele normal, aproximadamente 105/cm2

O Experimento 2 consistirá em 4 visitas ao consultório (Triagem, Cultura, Tratamento e Acompanhamento), bem como um telefonema para repassar as informações de elegibilidade. Todas as visitas ao consultório ocorrerão na Clínica de Dermatologia da UCSD. Os indivíduos que estão participando do Experimento 1 e 2 devem esperar pelo menos um período de tempo equivalente a 10 meias-vidas do creme AMT antes de iniciar os procedimentos do estudo do Experimento 2. A triagem, telefonema e visitas de cultura para o Experimento 3 são o mesmo que para o Experimento 1. A Visita de Tratamento e as Visitas de Acompanhamento diferem ligeiramente daquelas do Experimento 1 e serão descritas abaixo, com as alterações sublinhadas.

Visita de Tratamento (Dia 28 +/- 7) Indivíduos elegíveis com culturas de triagem + S. aureus serão incluídos no estudo e instruídos a retornar à clínica aproximadamente 28 dias após a visita de triagem para a visita de tratamento. Este período de espera de 3 semanas entre a cultura e as visitas de tratamento permitirá que a equipe do laboratório cultive e prepare as bactérias endógenas produtoras de AMP do sujeito para serem misturadas com Cetaphil para aplicação na visita de tratamento. Para simular cenários da vida real, tanto quanto possível, o sujeito poderá continuar suas atividades habituais durante este estudo, incluindo tomar banho, tomar banho e se exercitar. Esta visita começará revisando o histórico médico provisório do sujeito, incluindo o histórico de medicamentos para garantir que ele/ela não tenha usado nenhum tratamento tópico de AD em seus braços dentro de 7 dias ou tratamentos orais de AD dentro de 28 dias desta visita. Para indivíduos que tiveram uma cultura nasal de S. aureus (+) na visita de triagem, uma cultura nasal repetida será realizada. Para todos os indivíduos, um exame físico focado será realizado nos braços bilaterais do indivíduo para garantir que não haja evidência de rachaduras, rupturas ou infecções na pele dos braços. Em seguida, pré-trataremos um braço com um regime de lavagem com sabonete antibacteriano líquido Dial, seguido de limpeza do braço com álcool 70% seguido de 80% usando gaze estéril. Depois que o álcool secar, uma fina camada do creme AMT individualizado do sujeito será aplicada em um dos braços do sujeito pelas mãos enluvadas de um coordenador do estudo. Cinco minutos depois, será realizada uma lavagem quantitativa na pele eczematosa das fossas antecubitais do braço tratado com o creme AMT, bem como em uma área de pele não lesada desse mesmo braço. Para cada lavagem, um cilindro estéril de aço inoxidável com uma área aproximada de 3,5 cm2 será mantido firmemente na superfície da pele e 2,5 mL de fluido de remoção estéril (SSFN) serão cuidadosamente instilados no cilindro. A pele será então massageada por 60 segundos usando um policial de borracha estéril. O SSFN será aspirado com uma pipeta e transferido para um tubo de ensaio estéril. Todo esse processo será repetido uma segunda vez e o fluido será reunido. O fluido reunido será analisado no laboratório via PCR para determinar quantas e que tipo de bactérias estão presentes. Um swab de pele lesional e não lesional também será concluído. Os indivíduos receberão alíquotas de uso único de seu próprio creme AMT e luvas para levar para casa. Eles serão instruídos a aplicar uma das alíquotas no mesmo braço em que foi aplicado durante a visita de tratamento em um intervalo de dosagem determinado com base na meia-vida calculada a partir dos resultados do Experimento 1 para um total de 6 doses (o esquema de dosagem previsto para atingir o estado estacionário). Eles serão instruídos a lavar as mãos e calçar luvas antes de cada aplicação do creme. Isso concluirá a visita de tratamento. Esperamos que esta visita leve aproximadamente 30 minutos.

Visita de acompanhamento (a ocorrer no momento da 7ª aplicação do creme AMT) Durante a visita de acompanhamento, os indivíduos retornarão à clínica para uma lavagem quantitativa de sua pele lesional e não lesional para determinar a abundância de S .aureus nesta visita. Um swab de pele lesional e não lesional também será realizado. Esta visita concluirá o Experimento 2. Durará aproximadamente 15 minutos.

Considerações adicionais: Neste experimento, nosso objetivo é estabelecer a abundância em estado estacionário de AMT usando uma densidade bacteriana semelhante à concentração média de micróbios na pele normal, aproximadamente 105/cm2. Usando os resultados do Experimento 1, podemos estimar a meia-vida da bactéria na superfície da pele do paciente. É possível que a meia-vida do creme AMT, conforme determinado no Experimento 1, seja curta, possivelmente tão curta quanto algumas horas. Se o creme AMT mostrar uma perda rápida de bactérias transplantadas de forma que seja impraticável aumentar ainda mais a frequência de aplicação do AMT (assumida como maior que TID), e a dose do AMT não puder ser praticamente aumentada do padrão de 108 bactérias/ gm, aplicado a 10 gm/m2, o sujeito aplicará a dose prática máxima (109 bactérias/gm a 40gm/m2 ) na frequência prática máxima (TID), e faremos isso por uma semana para determinar quantas bactérias são presentes após esta abordagem de tratamento. Embora isso não seja provável a partir dos dados de Costello et al. em 2009, queremos ter esse plano de backup para permitir que o estudo avance. Embora esses resultados não representem um estado estacionário, os dados seriam suficientes para permitir o desenho de um ensaio clínico subsequente ou para concluir que uma abordagem de aplicação de longo prazo não vale a pena análises adicionais.

Experimento 3: Para medir a abundância em estado estacionário de S. aureus na pele do participante

O experimento 3 consistirá em 6 visitas ao consultório (triagem, cultura, tratamento e 3 visitas de acompanhamento), bem como um telefonema para transmitir informações de elegibilidade. Todas as visitas ao consultório ocorrerão na Clínica de Dermatologia da UCSD. Os indivíduos que participaram do Experimento 2 devem esperar pelo menos um período de tempo equivalente a 10 meias-vidas do creme AMT antes de iniciar os procedimentos de estudo do Experimento 3. A triagem, telefonema e visitas de cultura para o Experimento 3 são as mesmas para o Experimento 1. A Visita de Tratamento e as Visitas de Acompanhamento diferem ligeiramente daquelas do Experimento 1 e serão descritas abaixo, com as alterações sublinhadas.

Visita de Tratamento (Dia 28 +/- 7) Indivíduos elegíveis com culturas de triagem + S. aureus serão incluídos no estudo e instruídos a retornar à clínica aproximadamente 28 dias após a visita de triagem. Este período de espera de 3 semanas permitirá que a equipe do laboratório cultive e prepare as bactérias endógenas produtoras de AMP do sujeito para serem misturadas com Cetaphil para aplicação na consulta de tratamento. Bactérias produtoras de AMP também serão rastreadas para garantir que não sejam patogênicas. Para simular cenários da vida real, tanto quanto possível, o sujeito poderá continuar suas atividades habituais durante este estudo, incluindo tomar banho, tomar banho e se exercitar. Esta visita começará revisando o histórico médico provisório do sujeito, incluindo o histórico de medicamentos para garantir que ele/ela não tenha usado nenhum tratamento tópico de AD em seus braços dentro de 7 dias ou tratamentos orais de AD dentro de 28 dias desta visita. Para indivíduos que tiveram uma cultura nasal de S. aureus (+) na visita de triagem, uma cultura nasal repetida será realizada. Para todos os indivíduos, um exame físico focado será realizado nos braços bilaterais do indivíduo para garantir que não haja evidência de rachaduras, rupturas ou infecções na pele dos braços. O SCORAD localizado e a Escala de Gravidade do Eczema serão preenchidos em cada fossa antecubital. Um medidor TEWL será então usado para medir o TEWL de cada fossa antecubital. Em seguida, pré-trataremos ambos os braços com um regime de lavagem com sabonete antibacteriano líquido Dial, seguido de limpeza dos braços com álcool 70% e depois 80%. Depois que o álcool secar, uma camada fina do creme AMT individualizado do sujeito será aplicada em um braço pelas mãos enluvadas de um coordenador do estudo e a loção Cetaphil sozinha no outro braço. Os dois cremes serão rotulados como 'Direito' ou 'Esquerdo' para permitir que o estudo seja conduzido de maneira duplo-cega (tanto o sujeito quanto o investigador/coordenador clínico não saberão qual braço recebeu qual tratamento). Cinco minutos depois, será realizada uma lavagem quantitativa na pele eczematosa de ambas as fossas antecubitais, bem como em uma área de pele não lesada de ambos os braços. Para cada lavagem, um cilindro estéril de aço inoxidável com uma área aproximada de 3,5 cm2 será mantido firmemente na superfície da pele e 2,5 mL de fluido de remoção estéril (SSFN) serão cuidadosamente instilados no cilindro. A pele será então massageada por 60 segundos usando um policial de borracha estéril. O SSFN será aspirado com uma pipeta e transferido para um tubo de ensaio estéril. Todo esse processo será repetido uma segunda vez e o fluido será reunido. O fluido acumulado será analisado no laboratório por meio de métodos de contagem de colônias para determinar a quantidade de bactérias viáveis ​​na pele neste momento. Cotonetes de pele lesional e não lesional de ambos os braços também serão coletados para determinar o tipo e a abundância de cada bactéria presente na pele. O sujeito receberá alíquotas de uso único de seu creme AMT individualizado e loção Cetaphil sozinho, bem como luvas, e instruído a aplicar uma alíquota em seu braço designado no intervalo de dosagem determinado no Experimento 1 (mas não exceder TID). Todas as alíquotas serão rotuladas com 'Esquerda' ou 'Direita', dependendo de qual braço elas devem ser aplicadas com base em se a alíquota é da loção Cetaphil de controle ou do creme AMT. Uma vez que os dois produtos são idênticos em aparência e consistência, os sujeitos não devem ser capazes de distinguir entre os dois produtos. Todos os sujeitos serão instruídos a lavar as mãos e calçar luvas limpas antes de cada aplicação de alíquota. Isso concluirá a visita de tratamento. Esperamos que esta visita leve aproximadamente 60 minutos.

Visitas de acompanhamento 1, 2 e 3 (dias 33 +/- 2 dias, 38 +/- 2 dias e 43 +/- 2 dias, respectivamente) Os indivíduos retornarão à clínica aproximadamente a cada 5 dias após a visita de tratamento para um visita de acompanhamento. Durante esta visita, quaisquer reações adversas ao creme AMT serão registradas. Em seguida, o SCORAD localizado e a Escala de Gravidade do Eczema serão usados ​​para pontuar a gravidade do eczema do sujeito em cada uma de suas fossas antecubitais. O TEWL de cada fossa antecubital também será medido. Em seguida, será realizada uma lavagem quantitativa em cada braço na região da fossa antecubital, bem como em uma área de pele não lesada em cada braço. Um esfregaço de pele da pele lesional e não lesional de ambos os braços será então realizado. O indivíduo receberá alíquotas de uso único recém-preparadas do creme AMT e da loção Cetaphil marcadas com 'Esquerda' ou 'Direita', dependendo de qual braço a alíquota deve ser aplicada (somente para as visitas de acompanhamento 1 e 2). Essas atividades concluirão a visita de estudo e todos os procedimentos relacionados ao estudo. Cada visita de acompanhamento deve levar aproximadamente 45 minutos.