Autologisen mikrobiomisiirron kineettisten ominaisuuksien arviointi aikuisilla atooppisen ihottuman potilailla

Tämä tutkimus suoritetaan kolmena kokeena tutkimuksen kolmen tavoitteen mukaisesti. Osallistujat suostuvat kaikkiin kolmeen tutkimuskokeeseen erikseen, koska jokaisella kokeella on erilainen suostumuslomake. Yksittäiset oppiaineet voivat osallistua kaikkiin kolmeen osatutkimukseen, jos he ovat oikeutettuja kaikkiin kolmeen, mutta tutkittavien ei edellytetä osallistuvan useampaan kuin yhteen osatutkimukseen. Yhteensä 10 koehenkilöä otetaan mukaan kokeisiin 1 ja 2, ja noin 14 koehenkilöä otetaan mukaan kokeeseen 3. Koska vain noin 75-80 % AD-potilaista on S. aureuksen kolonisoimia, odotamme seulovan lähempänä 18:aa. -20 koehenkilöä täyttää osallistumiskriteerit. Tutkimuksesta vetäytyneet koehenkilöt korvataan.

Koe 1: Siirrettyjen bakteerien stabiilisuuden määrittäminen ihon pinnalla ajan kuluessa

Tämä tutkimuksen ensimmäinen osa (koe 1) koostuu 7 toimistokäynnistä (seulonta, viljely, hoito ja 3 seurantakäyntiä) ja yhdestä puhelusta kelpoisuustietojen välittämiseksi. Kaikki toimistokäynnit tehdään UCSD:n ihotautiklinikalla. Jokaisen käynnin tarkat menettelyt käsitellään alla.

Seulontakäynti (käynti 1, päivä 0) Ennen tutkimustoimenpiteiden aloittamista koehenkilöitä pyydetään ensin tarkistamaan ja allekirjoittamaan tietoinen suostumuslomake. Tietoisen suostumuksen saamisen jälkeen sisällyttäminen/poissulkemiskriteerit tarkistetaan. Lyhyt sairaushistoria ja fyysinen koe suoritetaan, jotta voidaan arvioida, täyttääkö kohde tutkimuksen vaaditut kriteerit. Hedelmällisessä iässä olevat naiset tekevät virtsaraskaustestin toimistollamme varmistaakseen, etteivät he ole raskaana. Potilaille, jotka täyttävät sisällyttämis- ja poissulkemiskriteerit, otetaan sitten vanupuikko vaurioituneesta atooppisesta ihottumasta yhdessä heidän kyynärpääkuoppaansa (Kong et al, 2012 osoittivat, että S. aureus -bakteerin kolonisoimilla AD-potilailla on S. aureus -bakteereja koko ajan ihon pintaan, joten odotamme yhden vanupuikon olevan riittävä), sekä nenäviljelynäyte S. aureus -bakteerin havaitsemiseksi nenissä. Tämä päättää seulontakäynnin. Vierailun kokonaisaika on noin 30 minuuttia.

Koehenkilöt, jotka eivät täytä sisällyttämis-/poissulkemiskriteerejä kiellettyjen lääkkeiden käytön tai käytön vuoksi ilmoitetun ajan kuluessa, katsotaan epäonnistuneiksi seulonnassa. Näille potilaille ei oteta vanupuikkoja iholta. Nämä koehenkilöt voivat palata toiselle seulontakäynnille tarvittavan pesujakson jälkeen (7 päivää paikallisille lääkkeille, 28 päivää suun kautta otetuille lääkkeille), jos he ovat siitä kiinnostuneita.

Puhelin (Päivä 3 +/- 1) Koehenkilöille ilmoitetaan puhelimitse 3 arkipäivän kuluessa, kasvoiko heidän iho- ja nenäpuikoistaan ​​S. aureus. Koehenkilöt, joiden ihoviljelmä on positiivinen metisilliiniherkälle S. aureukselle (MSSA), otetaan mukaan tutkimukseen. Näille osallistujille järjestetään kulttuurivierailuaika. Koehenkilöt suljetaan pois, jos heillä on jokin seuraavista: negatiivinen S. aureus -ihoviljelmä tai ihoviljelmä, joka on positiivinen metisilliiniresistentille S. aureukselle (MRSA). Puhelinkeskustelun kokonaiskesto on noin 5 minuuttia.

Kulttuurivierailu (päivä 7 +/- 4) Tukikelpoiset koehenkilöt palaavat kulttuurivierailulle noin viikon sisällä seulontakäynnistään. Tämän käynnin aikana otamme neljä (4) viljelypyyhkäisyä potilaan olkavarren ei-leesionaalisesta (ei AD) ihosta. Nämä viljelypuikot sijoitetaan tryptisoijaliemeen (TSB), kunnes ne käsitellään laboratoriossa, jossa niitä käytetään potilaan antimikrobista peptidiä tuottavien Staph-lajien kasvattamiseen käytettäväksi autologiseen mikrobiomisiirtoon. Koehenkilöt saavat myös palan Dove kosteuttavaa saippuaa, jota heitä neuvotaan käyttämään aina suihkussa, kunnes seurantakäynti on suoritettu. Koehenkilöt, joilla on positiivinen S. aureus -nenäviljelmä seulontakäynnillä (käynti 1), saavat myös putken mupirosiinivoidetta. Heille opastetaan mupirosiinin levittämistä anteriorisiin naruihin kahdenvälisesti kahdesti päivässä alkaen 5 päivää ennen heidän hoitokäyntiään. Vierailu kestää yhteensä noin 10 minuuttia.

Hoitokäynti (päivä 28 +/- 7) Sopivat koehenkilöt, joilla on + S. aureus -seulontaviljelmät, otetaan mukaan tutkimukseen ja heitä neuvotaan palaamaan klinikalle noin 28 päivää seulontakäynnin jälkeen. Tämä 3 viikon odotusaika antaa laboratorion henkilökunnalle mahdollisuuden kasvattaa ja valmistaa potilaan endogeenisiä AMP:ta tuottavia bakteereja, jotka sekoitetaan Cetaphilin kanssa käytettäväksi hoitokäynnillä. Jotta voidaan simuloida mahdollisimman paljon tosielämän skenaarioita, koehenkilön annetaan jatkaa tavanomaista toimintaansa tämän tutkimuksen aikana, mukaan lukien kylpeminen, suihku ja kuntoilu. Tämä käynti alkaa tarkastelemalla potilaan väliaikainen sairaushistoria, mukaan lukien lääkityshistoria sen varmistamiseksi, että hän ei käyttänyt mitään paikallisia AD-hoitoja käsivarsilleen 7 päivän kuluessa tai suun kautta annettavia AD-hoitoja 28 päivän kuluessa tästä käynnistä. Koehenkilöille, joilla oli S. aureus (+) -nenäviljelmä seulontakäynnillä, suoritetaan uusi nenäviljely. Kaikille koehenkilöille suoritetaan sitten kohdennettu fyysinen koe kohteen molemminpuolisille käsivarsille sen varmistamiseksi, ettei käsivarsien ihossa ole merkkejä halkeamista, murtumista tai infektioista. Seuraavaksi esikäsitellään molemmat käsivarret pesemällä ne Dial-nestemäisellä antibakteerisella saippualla, jonka jälkeen käsivarsi pyyhitään steriilillä sideharsolla, joka on kostutettu 70 %, sitten 80 % alkoholilla. Kun alkoholi on kuivunut, tutkimuskoordinaattorin hansikkaat kädet levittävät jokaiseen käsivarteen ohutta kerrosta koehenkilön yksilöllistä AMT-voidetta. Viiden minuutin kuluttua voiteen levittämisestä suoritetaan kvantitatiivinen pesu yhden kyynärpäänkuohon eksematoottiselle iholle sekä saman käsivarren ei-leesionaaliselle ihoalueelle. Jokaista pesua varten steriili ruostumattomasta teräksestä valmistettu sylinteri, jonka pinta-ala on noin 3,5 cm2, pidetään tukevasti ihon pinnassa, ja 2,5 ml steriiliä irrotusnestettä (SSFN) tiputetaan varovasti sylinteriin. Ihoa hierotaan sitten 60 sekunnin ajan steriilillä kumipoliisilla. SSFN imetään pipetillä ja siirretään steriiliin koeputkeen. Tämä koko prosessi toistetaan toisen kerran samassa paikassa ja neste yhdistetään. Yhdistetty neste analysoidaan laboratoriossa pesäkkeiden laskentamenetelmillä elinkelpoisten bakteeripesäkkeiden lukumäärän määrittämiseksi ihon pinnalla. Sen jälkeen otetaan vanupuikko sekä vaurioituneesta että ei-leesionaalisesta ihosta. Hoitokäynti päättyy tähän. Odotamme tämän vierailun kestävän noin 30 minuuttia.

Seurantakäynnit Seurantakäyntien aikana jokainen koehenkilö palaa klinikalle leesionaalisen ja ei-leesionaalisen ihonsa kvantitatiiviseen pesuun sekä vaurioituneen ja ei-leesionaalisen ihonsa pyyhkäisyä varten. 10 ilmoittautunutta jaetaan kahteen ryhmään, ja jokainen ryhmä palaa seurantaan eri ajankohtina. Viisi ensimmäistä ilmoittautunutta potilasta jaetaan ensimmäiseen ryhmään, joka palaa seurantaan seuraavina aikoina: 1, 4, 8 ja 24 tuntia elinsiirron jälkeen. Seuraavat viisi potilasta otetaan mukaan toiseen ryhmään, ja he palaavat seurantaan seuraavina aikoina: 1, 2, 4 ja 7 päivää elinsiirron jälkeen. Kvantitatiivinen pesu viimeisen seurantaajankohdan aikana päättää tutkimuksen kyseisen osallistujan osalta. Jokainen seurantakäynti kestää noin 20 minuuttia.

Siirrettyjen Staph-lajien keskimääräinen eloonjääminen sekä vaurioituneella että ei-leesionaalisella iholla piirretään kullekin ajankohdalle. Näistä tiedoista voimme laskea bakteerien vähenemisnopeuden siirron jälkeen, mikä antaa meille bakteerin puoliintumisajan.

Koe 2: Selvitetään autologisen mikrobiomin siirrännäisen levityksen vakaan tilan runsaus, joka tarvitaan siirrettyjen bakteerien tiheyden saavuttamiseksi, joka on samanlainen kuin mikrobien keskimääräinen pitoisuus normaalilla iholla, noin 105/cm2

Koe 2 koostuu neljästä toimistokäynnistä (seulonta, viljely, hoito ja seuranta) sekä yhdestä puhelusta kelpoisuustietojen välittämiseksi. Kaikki toimistokäynnit tehdään UCSD:n ihotautiklinikalla. Koehenkilöiden, jotka osallistuvat sekä kokeeseen 1 että 2, on odotettava vähintään 10 AMT-voiteen puoliintumisaikaa vastaava aika ennen kokeen 2 tutkimustoimenpiteiden aloittamista. Kokeen 3 seulonta-, puhelinsoitto- ja kulttuurivierailut ovat sama kuin kokeessa 1. Hoitokäynti ja seurantakäynnit poikkeavat hieman kokeen 1 käynneistä, ja ne kuvataan alla ja muutokset on alleviivattu.

Hoitokäynti (päivä 28 +/- 7) Sopivat koehenkilöt, joilla on + S. aureus -seulontaviljelmiä, otetaan mukaan tutkimukseen, ja heitä neuvotaan palaamaan klinikalle noin 28 päivää seulontakäynnin jälkeen hoitokäyntiä varten. Tämä 3 viikon odotusaika viljely- ja hoitokäyntien välillä antaa laboratorion henkilökunnalle mahdollisuuden kasvattaa ja valmistaa potilaan endogeenisiä AMP:ta tuottavia bakteereja, jotka sekoitetaan Cetaphilin kanssa käytettäväksi hoitokäynnillä. Jotta voidaan simuloida mahdollisimman paljon tosielämän skenaarioita, koehenkilön annetaan jatkaa tavanomaista toimintaansa tämän tutkimuksen aikana, mukaan lukien kylpeminen, suihku ja kuntoilu. Tämä käynti alkaa tarkastelemalla potilaan väliaikainen sairaushistoria, mukaan lukien lääkityshistoria sen varmistamiseksi, että hän ei käyttänyt mitään paikallisia AD-hoitoja käsivarsilleen 7 päivän kuluessa tai suun kautta annettavia AD-hoitoja 28 päivän kuluessa tästä käynnistä. Koehenkilöille, joilla oli S. aureus (+) -nenäviljelmä seulontakäynnillä, suoritetaan uusi nenäviljely. Kaikille koehenkilöille suoritetaan sitten kohdennettu fyysinen koe kohteen molemminpuolisille käsivarsille sen varmistamiseksi, ettei käsivarsien ihossa ole merkkejä halkeamista, murtumista tai infektioista. Seuraavaksi esikäsittelemme toista käsivartta pesemällä Dial nestemäisellä antibakteerisella saippualla, jonka jälkeen pyyhimme käsivarren 70-prosenttisella ja 80-prosenttisella alkoholilla steriilillä sideharsolla. Kun alkoholi on kuivunut, tutkimuskoordinaattorin hansikkaat kädet levittävät ohut kerros koehenkilön yksilöllistä AMT-voidetta yhdelle tutkittavan käsivarresta. Viisi minuuttia myöhemmin suoritetaan kvantitatiivinen pesu AMT-emulsiovoideella käsitellyn käsivarren kyynärpääkuopan eksematoottiselle iholle sekä tämän saman käsivarren ei-leesioiselle ihoalueelle. Jokaista pesua varten steriili ruostumattomasta teräksestä valmistettu sylinteri, jonka pinta-ala on noin 3,5 cm2, pidetään tukevasti ihon pinnassa, ja 2,5 ml steriiliä irrotusnestettä (SSFN) tiputetaan varovasti sylinteriin. Ihoa hierotaan sitten 60 sekunnin ajan steriilillä kumipoliisilla. SSFN imetään pipetillä ja siirretään steriiliin koeputkeen. Tämä koko prosessi toistetaan toisen kerran ja neste yhdistetään. Yhdistetty neste analysoidaan laboratoriossa PCR:llä sen määrittämiseksi, kuinka monta ja minkä tyyppistä bakteereja on. Myös vaurioituneesta ja ei-leesionaalisesta ihosta tehdään vanupuikko. Koehenkilöille annetaan sitten kertakäyttöisiä alikvootteja omaa AMT-voidetta ja käsineitä kotiin vietäväksi. Heitä neuvotaan levittämään yksi alikvooteista samaan käsivarteen, johon sitä levitettiin hoitokäynnin aikana annosvälillä, joka määritetään kokeen 1 tuloksista lasketun puoliintumisajan perusteella yhteensä 6 annokselle (annosohjelma ennustetaan saavuttavan vakaan tilan). Heitä neuvotaan pesemään kätensä ja pukemaan käsineet ennen jokaista voiteen levitystä. Hoitokäynti päättyy tähän. Odotamme tämän vierailun kestävän noin 30 minuuttia.

Seurantakäynti (tapahtuu 7. AMT-voiteen levityshetkellä) Seurantakäynnin aikana koehenkilöt palaavat klinikalle leesionaalisen ja ei-leesionaalisen ihonsa kvantitatiiviseen pesuun S:n runsauden määrittämiseksi. aureus tällä vierailulla. Myös vaurioituneesta ja ei-leesionaalisesta ihosta tehdään vanupuikko. Tämä vierailu päättää kokeen 2. Se kestää noin 15 minuuttia.

Muita huomioita: Tässä kokeessa tavoitteemme on määrittää AMT:n vakaan tilan runsaus käyttämällä bakteeritiheyttä, joka on samanlainen kuin mikrobien keskimääräinen pitoisuus normaalilla iholla, noin 105/cm2. Käyttämällä kokeen 1 tuloksia voimme arvioida bakteerien puoliintumisajan kohteen ihon pinnalla. On mahdollista, että kokeessa 1 määritetty AMT-emulsiovoiteen puoliintumisaika on lyhyt, mahdollisesti jopa niin lyhyt kuin muutama tunti. Jos AMT-emulsiovoide osoittaa siirrettyjen bakteerien nopean häviämisen siten, että on epäkäytännöllistä lisätä AMT:n levitystiheyttä (oletetaan olevan suurempi kuin TID), eikä AMT-annosta voida käytännössä nostaa tavallisesta 108 bakteerista/ gm, levitettynä 10 gm/m2, koehenkilö käyttää suurimman käytännön annoksen (109 bakteeria/g 40 g/m2) suurimmalla käytännön taajuudella (TID), ja teemme tätä viikon ajan määrittääksemme kuinka monta bakteeria tämän hoitomenetelmän jälkeen. Vaikka tämä ei ole todennäköistä Costello et al. Vuonna 2009 haluamme saada tämän varasuunnitelman käyttöön, jotta tutkimus etenee. Vaikka nämä tulokset eivät edusta vakaata tilaa, tiedot riittäisivät mahdollistamaan myöhemmän kliinisen tutkimuksen suunnittelun tai päättämään, että pitkän aikavälin soveltamistapa ei ole lisäanalyysien arvoinen.

Koe 3: S. aureuksen vakaan tilan runsauden mittaaminen osallistujan iholla

Koe 3 koostuu kuudesta toimistokäynnistä (seulonta, viljely, hoito ja 3 seurantakäyntiä) sekä yksi puhelu kelpoisuustietojen välittämiseksi. Kaikki toimistokäynnit tehdään UCSD:n ihotautiklinikalla. Koehenkilöiden, jotka ovat osallistuneet kokeeseen 2, on odotettava vähintään 10 AMT-voiteen puoliintumisaikaa vastaava aika ennen kokeen 3 tutkimustoimenpiteiden aloittamista. Kokeen 3 seulonta-, puhelu- ja kulttuurivierailut ovat samat kuin kokeeseen 1. Hoitokäynti ja seurantakäynnit poikkeavat hieman kokeen 1 käynneistä, ja ne kuvataan alla ja muutokset on alleviivattu.

Hoitokäynti (päivä 28 +/- 7) Sopivat koehenkilöt, joilla on + S. aureus -seulontaviljelmät, otetaan mukaan tutkimukseen ja heitä neuvotaan palaamaan klinikalle noin 28 päivää seulontakäynnin jälkeen. Tämä 3 viikon odotusaika antaa laboratorion henkilökunnalle mahdollisuuden kasvattaa ja valmistaa potilaan endogeenisiä AMP:ta tuottavia bakteereja, jotka sekoitetaan Cetaphilin kanssa käytettäväksi hoitokäynnillä. AMP:tä tuottavat bakteerit seulotaan myös sen varmistamiseksi, että ne eivät ole patogeenisiä. Jotta voidaan simuloida mahdollisimman paljon tosielämän skenaarioita, koehenkilön annetaan jatkaa tavanomaista toimintaansa tämän tutkimuksen aikana, mukaan lukien kylpeminen, suihku ja kuntoilu. Tämä käynti alkaa tarkastelemalla potilaan väliaikainen sairaushistoria, mukaan lukien lääkityshistoria sen varmistamiseksi, että hän ei käyttänyt mitään paikallisia AD-hoitoja käsivarsilleen 7 päivän kuluessa tai suun kautta annettavia AD-hoitoja 28 päivän kuluessa tästä käynnistä. Koehenkilöille, joilla oli S. aureus (+) -nenäviljelmä seulontakäynnillä, suoritetaan uusi nenäviljely. Kaikille koehenkilöille suoritetaan sitten kohdennettu fyysinen koe kohteen molemminpuolisille käsivarsille sen varmistamiseksi, ettei käsivarsien ihossa ole merkkejä halkeamista, murtumista tai infektioista. Paikallinen SCORAD- ja ekseeman vakavuusasteikko täydennetään jokaiseen kyynärpään kuoppaan. Tämän jälkeen TEWL-mittaria käytetään kunkin kyynärpääkuopan TEWL:n mittaamiseen. Seuraavaksi esikäsitellään molemmat käsivarret Dial-nestemäisellä antibakteerisella saippualla, jonka jälkeen käsivarret pyyhitään 70 %:lla ja sitten 80 % alkoholilla. Kun alkoholi on kuivunut, tutkimuskoordinaattorin hansikkaat kädet levittävät toiseen käsivarteen ohut kerros yksilöllistä AMT-voidetta ja toiseen käsivarteen Cetaphil-emulsiota. Nämä kaksi voidetta merkitään joko "oikealla" tai "vasemmalla", jotta tutkimus voidaan suorittaa kaksoissokkoutettuna (sekä tutkittava että kliininen tutkija/koordinaattori sokeutuvat sen suhteen, kumpi käsi sai minkä hoidon). Viiden minuutin kuluttua suoritetaan kvantitatiivinen pesu molempien kyynärpään kuoppien eksematoottiselle iholle sekä molempien käsivarsien ei-leesioiselle ihoalueelle. Jokaista pesua varten steriili ruostumattomasta teräksestä valmistettu sylinteri, jonka pinta-ala on noin 3,5 cm2, pidetään tukevasti ihon pinnassa, ja 2,5 ml steriiliä irrotusnestettä (SSFN) tiputetaan varovasti sylinteriin. Ihoa hierotaan sitten 60 sekunnin ajan steriilillä kumipoliisilla. SSFN imetään pipetillä ja siirretään steriiliin koeputkeen. Tämä koko prosessi toistetaan toisen kerran ja neste yhdistetään. Yhdistetty neste analysoidaan laboratoriossa pesäkkeiden laskentamenetelmillä, jotta voidaan määrittää elävien bakteerien määrä iholla tällä hetkellä. Molempien käsivarsien leesionaalisesta ja ei-leesionaalisesta ihosta otetaan myös vanupuikkoja kunkin iholla olevien bakteerien tyypin ja määrän määrittämiseksi. Kohde saa sitten kertakäyttöiset määrät yksilöllistä AMT-voidetta ja Cetaphil lotionia sekä käsineet, ja häntä kehotetaan levittämään yksi määrä sille määrätylle käsivarrelle kokeessa 1 määritetyllä annosvälillä (mutta ei ylittää TID). Kaikki alikvootit merkitään joko "vasemmalla" tai "oikealla" sen mukaan, mihin käsivarteen ne tulisi levittää sen mukaan, onko osa Cetaphil-kontrollivoidetta vai AMT-voidetta. Koska nämä kaksi tuotetta ovat ulkonäöltään ja koostumukseltaan identtisiä, tutkittavien ei pitäisi pystyä erottamaan näitä kahta tuotetta. Kaikkia koehenkilöitä neuvotaan pesemään kätensä ja pukemaan puhtaat hanskat ennen jokaista alikvootin levitystä. Hoitokäynti päättyy tähän. Odotamme tämän vierailun kestävän noin 60 minuuttia.

Seurantakäynnit 1, 2 ja 3 (päivät 33 +/- 2 päivää, 38 +/- 2 päivää ja 43 +/- 2 päivää) Tutkittavat palaavat klinikalle noin 5 päivän välein hoitokäynnin jälkeen. seurantakäynti. Tämän käynnin aikana kaikki AMT-voiteen aiheuttamat haittavaikutukset kirjataan. Seuraavaksi lokalisoitua SCORAD- ja ekseeman vakavuusasteikkoa käytetään arvioimaan potilaan ihottuman vakavuus hänen jokaisessa kyynärpääkuoppassaan. Jokaisen kyynärpäänkuopan TEWL-arvo mitataan myös. Seuraavaksi suoritetaan kvantitatiivinen pesu kummallekin käsivarrelle kyynärpääkuopan alueella sekä ei-leesionaaliselle ihoalueelle kummassakin käsivarressa. Sen jälkeen molemmista käsivarresta otetaan vanupuikko vaurioituneesta ja ei-leesionaalisesta ihosta. Potilas saa juuri valmistetut kertakäyttöiset erät sekä AMT-voiteesta että Cetaphil lotionista, joissa on joko "vasen" tai "oikea" sen mukaan, mihin käsivarteen alikvootti tulee levittää (vain seurantakäynneille 1 ja 2). Näillä toimilla päätetään opintomatka ja kaikki opintoihin liittyvät toimenpiteet. Jokaisen seurantakäynnin tulisi kestää noin 45 minuuttia.