Evaluering av de kinetiske egenskapene til en autolog mikrobiomtransplantasjon hos voksne pasienter med atopisk dermatitt

Denne studien vil bli utført som tre eksperimenter i samsvar med de tre målene med studien. Deltakerne vil samtykke til alle tre studieeksperimentene separat, da hvert eksperiment vil ha et annet samtykkeskjema. Mens enkeltemner kan delta i alle tre delstudiene dersom de er kvalifisert for alle tre, er det ikke krav om at fagene skal delta i mer enn ett av delstudiene. Totalt 10 forsøkspersoner vil bli registrert i eksperiment 1 og 2, og ca. 14 forsøkspersoner vil bli registrert i eksperiment 3. Gitt at bare ca. 75-80 % av AD-pasienter er kolonisert av S. aureus, forventer vi å screene nærmere 18. -20 emner for å oppfylle inklusjonskriteriene. Emner som trekker seg fra studien vil bli erstattet.

Forsøk 1: Bestemmelse av stabiliteten til transplanterte bakterier på hudoverflaten over tid

Denne første delen av studien (eksperiment 1) vil bestå av 7 kontorbesøk (screening, kultur, behandling og 3 oppfølgingsbesøk) og en telefonsamtale for å videresende kvalifikasjonsinformasjon. Alle kontorbesøk vil finne sted ved UCSD Dermatology Clinic. De nøyaktige prosedyrene for hvert besøk diskuteres nedenfor.

Screeningbesøk (besøk 1, dag 0) Før du starter noen studieprosedyrer, vil forsøkspersonene først bli bedt om å gjennomgå og signere skjemaet for informert samtykke. Etter å ha innhentet informert samtykke, vil inkluderings-/ekskluderingskriteriene bli gjennomgått. En kort sykehistorie og fysisk undersøkelse vil bli utført for å hjelpe til med å vurdere om emnet oppfyller de nødvendige kriteriene for studien. Kvinnelige forsøkspersoner i fertil alder vil ta en uringraviditetstest på vårt kontor for å sikre at de ikke er gravide. Pasienter som oppfyller inklusjons- og eksklusjonskriteriene vil da få utført en hudpinne på den lesjonelle atopiske dermatitthuden i en av deres antecubitale fossae (Kong et al, 2012 viste at AD-individer kolonisert av S. aureus har fastboende S. aureus-bakterier gjennom hele deres hudoverflate, derfor forventer vi at én vattpinne er tilstrekkelig), samt en nesekulturpinne for å oppdage tilstedeværelsen av S. aureus i nesene. Dette vil avslutte screeningbesøket. Den totale tiden for dette besøket vil være omtrent 30 minutter.

Forsøkspersoner som ikke oppfyller inklusjons-/ekskluderingskriteriene på grunn av bruk eller bruk av forbudte medisiner innen den angitte tidsrammen, vil bli ansett som skjermfeil. Hudprøvetaking av disse pasientene vil ikke bli utført. Disse forsøkspersonene kan komme tilbake for et nytt screeningbesøk etter å ha fullført den nødvendige utvaskingsperioden (7 dager for aktuelle medisiner, 28 dager for orale medisiner) hvis de er interessert i å gjøre det.

Telefon (Dag 3 +/- 1) Forsøkspersonene vil bli varslet via telefon innen 3 virkedager om deres hud og neseprøver vokste S. aureus eller ikke. Personer med en hudkultur som er positiv for meticillinsensitiv S. aureus (MSSA) vil bli registrert i studien. Det vil bli satt opp et kulturbesøksavtale for disse deltakerne. Forsøkspersoner vil bli ekskludert hvis de har noen av følgende: en negativ S. aureus-hudkultur eller en hudkultur som er positiv for meticillin-resistent S. aureus (MRSA). Den totale telefonsamtalen bør ta ca. 5 minutter.

Kulturbesøk (dag 7 +/- 4) Kvalifiserte forsøkspersoner kommer tilbake for et kulturbesøk innen omtrent en uke etter screeningbesøket. Under dette besøket vil vi ta fire (4) dyrkingsprøver fra forsøkspersonens ikke-lesjonelle (ingen AD) hud på overarmene. Disse kulturpinnene vil bli plassert i tryptisk soyabuljong (TSB) inntil de behandles i laboratoriet, hvor de vil bli brukt til å dyrke forsøkspersonens antimikrobielle peptidproduserende Staph-arter til bruk for den autologe mikrobiomtransplantasjonen. Forsøkspersonene vil også motta et stykke Dove fuktighetsgivende såpe, som de vil bli bedt om å bruke når de dusjer før etter at oppfølgingsbesøket er fullført. Forsøkspersoner med positiv S. aureus nesekultur ved screeningbesøket (besøk 1) vil også få en tube med mupirocinsalve. De vil bli instruert om påføring av mupirocin på de fremre nesene bilateralt to ganger daglig fra og med 5 dager før behandlingsbesøket. Det totale besøket vil ta ca. 10 minutter.

Behandlingsbesøk (dag 28 +/- 7) Kvalifiserte forsøkspersoner med + S. aureus-screeningskulturer vil bli registrert i studien og instruert om å returnere til klinikken ca. 28 dager etter screeningbesøket. Denne 3-ukers venteperioden vil tillate laboratoriepersonell å vokse og forberede forsøkspersonens endogene AMP-produserende bakterier for å blandes med Cetaphil for påføring ved behandlingsbesøket. For å simulere virkelige scenarier så mye som mulig, vil forsøkspersonen få fortsette sine vanlige aktiviteter under denne studien, inkludert bading, dusjing og trening. Dette besøket vil begynne med å gjennomgå pasientens midlertidige sykehistorie, inkludert medisinhistorie for å sikre at han/hun ikke brukte noen aktuelle AD-behandlinger på armene innen 7 dager eller orale AD-behandlinger innen 28 dager etter dette besøket. For forsøkspersoner som hadde en S. aureus (+) nesekultur ved screeningbesøk, vil en gjentatt nesekultur bli utført. For alle emner vil det da bli utført en fokusert fysisk undersøkelse av forsøkspersonens bilaterale armer for å sikre at det ikke er tegn på sprekker, brudd eller infeksjoner i huden på armene. Deretter vil vi forhåndsbehandle begge armene med et regime med vask med Dial flytende antibakteriell såpe, etterfulgt av å tørke av armen med sterilt gasbind fuktet med 70 %, deretter 80 % alkohol. Når alkoholen har tørket, vil et tynt lag av forsøkspersonens individualiserte AMT-krem påføres på hver arm av en studiekoordinator med hansker. Fem minutter etter påføring av kremen vil en kvantitativ vask utføres på eksem hud på en antecubital fossae, samt på et ikke-lesjonsområde av huden på samme arm. For hver vask vil en steril sylinder av rustfritt stål med et omtrentlig areal på 3,5 cm2 holdes fast til hudoverflaten, og 2,5 ml av en steril strippevæske (SSFN) vil bli forsiktig dryppet inn i sylinderen. Huden vil deretter bli massert i 60 sekunder med en steril gummipolitimann. SSFN vil bli aspirert med en pipette og overført til et sterilt reagensrør. Hele denne prosessen vil bli gjentatt en gang til på samme sted og væsken slås sammen. Den samlede væsken vil bli analysert i laboratoriet via kolonitellingsmetoder for å bestemme antall levedyktige bakteriekolonier på hudoverflaten. En hudpinne av både lesjons- og ikke-lesjonshud vil da bli tatt. Dette vil avslutte behandlingsbesøket. Vi forventer at dette besøket vil ta ca. 30 minutter.

Oppfølgingsbesøk Under oppfølgingsbesøk vil hver forsøksperson returnere til klinikken for en kvantitativ vask av deres lesjonelle og ikke-lesjonelle hud og en hudpinne av deres lesjonelle og ikke-lesjonelle hud. De 10 påmeldte fagene vil bli delt inn i to grupper, og hver gruppe kommer tilbake for oppfølging på ulike tidspunkt. De fem første pasientene som registreres vil bli tildelt den første gruppen, som vil returnere for oppfølging på følgende tidspunkt: 1, 4, 8 og 24 timer etter transplantasjonen. De neste fem pasientene som skal registreres vil bli tildelt den andre gruppen, og vil komme tilbake for oppfølging på disse tidspunktene: 1, 2, 4 og 7 dager etter transplantasjonen. Den kvantitative vaskingen ved det endelige oppfølgingstidspunktet vil avslutte studien for den deltakeren. Hvert oppfølgingsbesøk vil ta ca. 20 minutter.

Gjennomsnittlig overlevelse for den transplanterte Staph-arten på både lesjons- og ikke-lesjonell hud vil bli plottet for hvert tidspunkt. Fra disse dataene vil vi kunne beregne nedgangshastigheten til bakteriene etter å ha blitt transplantert, noe som vil gi oss bakterienes halveringstid.

Eksperiment 2: For å etablere steady-state overflod av autolog mikrobiom transplantasjonskrem som er nødvendig for å oppnå en tetthet av transplanterte bakterier som ligner den gjennomsnittlige konsentrasjonen av mikrober på normal hud, omtrent 105/cm2

Eksperiment 2 vil bestå av 4 kontorbesøk (screening, kultur, behandling og oppfølging), samt en telefonsamtale for å videresende kvalifikasjonsinformasjon. Alle kontorbesøk vil finne sted ved UCSD Dermatology Clinic. Forsøkspersoner som deltar i både eksperiment 1 og 2 må vente minst en tidsperiode tilsvarende 10 halveringstider av AMT-kremen før de starter studieprosedyrene i eksperiment 2. Screening, telefonsamtale og kulturbesøk for eksperiment 3 er det samme som for eksperiment 1. Behandlingsbesøket og oppfølgingsbesøkene avviker litt fra de i eksperiment 1 og vil bli beskrevet nedenfor, med endringer understreket.

Behandlingsbesøk (dag 28 +/- 7) Kvalifiserte forsøkspersoner med + S. aureus-screeningskulturer vil bli registrert i studien og instruert om å returnere til klinikken ca. 28 dager etter screeningbesøket for behandlingsbesøket. Denne 3-ukers venteperioden mellom kultur- og behandlingsbesøkene vil tillate laboratoriepersonell å vokse og forberede forsøkspersonens endogene AMP-produserende bakterier for å blandes med Cetaphil for påføring ved behandlingsbesøket. For å simulere virkelige scenarier så mye som mulig, vil forsøkspersonen få fortsette sine vanlige aktiviteter under denne studien, inkludert bading, dusjing og trening. Dette besøket vil begynne med å gjennomgå pasientens midlertidige sykehistorie, inkludert medisinhistorie for å sikre at han/hun ikke brukte noen aktuelle AD-behandlinger på armene innen 7 dager eller orale AD-behandlinger innen 28 dager etter dette besøket. For forsøkspersoner som hadde en S. aureus (+) nesekultur ved screeningbesøk, vil en gjentatt nesekultur bli utført. For alle emner vil det da bli utført en fokusert fysisk undersøkelse av forsøkspersonens bilaterale armer for å sikre at det ikke er tegn på sprekker, brudd eller infeksjoner i huden på armene. Deretter vil vi forhåndsbehandle den ene armen med et regime med vask med Dial flytende antibakteriell såpe, etterfulgt av å tørke av armen med 70 % etterfulgt av 80 % alkohol med steril gasbind. Når alkoholen har tørket, vil et tynt lag av forsøkspersonens individualiserte AMT-krem deretter påføres en av forsøkspersonens armer av en studiekoordinator med hanske. Fem minutter senere vil en kvantitativ vask utføres på eksem av antecubital fossae på armen behandlet med AMT-kremen, samt på et område med ikke-lesjonell hud på samme arm. For hver vask vil en steril sylinder av rustfritt stål med et omtrentlig areal på 3,5 cm2 holdes fast til hudoverflaten, og 2,5 ml av en steril strippevæske (SSFN) vil bli forsiktig dryppet inn i sylinderen. Huden vil deretter bli massert i 60 sekunder med en steril gummipolitimann. SSFN vil bli aspirert med en pipette og overført til et sterilt reagensrør. Hele denne prosessen vil bli gjentatt en gang til og væsken slås sammen. Den samlede væsken vil bli analysert i laboratoriet via PCR for å finne ut hvor mange og hvilken type bakterier som er tilstede. En hudpinne av lesjon og ikke-lesjon hud vil også bli fullført. Forsøkspersonene vil deretter få engangsprøver av sin egen AMT-krem og hansker til å ta med seg hjem. De vil bli bedt om å påføre en av alikvotene på den samme armen den ble påført under behandlingsbesøket med et doseringsintervall bestemt basert på halveringstiden beregnet fra resultatene av eksperiment 1 for totalt 6 doser (doseskjemaet) spådd å oppnå steady state). De vil bli bedt om å vaske hendene og ta på seg hansker før hver påføring av kremen. Dette vil avslutte behandlingsbesøket. Vi forventer at dette besøket vil ta ca. 30 minutter.

Oppfølgingsbesøk (skal skje på tidspunktet for den 7. påføringen av AMT-kremen) Under oppfølgingsbesøket vil forsøkspersonene returnere til klinikken for en kvantitativ vask av deres lesjonelle og ikke-lesjonelle hud for å bestemme overfloden av S aureus ved dette besøket. En hudpinne av lesjon og ikke-lesjon hud vil også bli utført. Dette besøket avslutter eksperiment 2. Det vil vare i omtrent 15 minutter.

Ytterligere hensyn: I dette eksperimentet er målet vårt å etablere steady-state overflod av AMT ved å bruke en bakterietetthet som ligner den gjennomsnittlige konsentrasjonen av mikrober på normal hud, omtrent 105/cm2. Ved å bruke resultatene fra eksperiment 1 kan vi estimere halveringstiden til bakteriene på pasientens hudoverflate. Det er mulig at halveringstiden for AMT-krem som bestemt i eksperiment 1 vil være kort, muligens til og med så kort som noen få timer. Hvis AMT-kremen viser et raskt tap av transplanterte bakterier slik at det er upraktisk å ytterligere øke frekvensen av påføring av AMT (antatt å være større enn TID), og dosen av AMT praktisk talt ikke kan økes fra standard 108 bakterier/ gm, påført ved 10 gm/m2, vil forsøkspersonen påføre maksimal praktisk dose (109 bakterier/gm ved 40gm/m2) med maksimal praktisk frekvens (TID), og vi vil gjøre dette i en uke for å finne ut hvor mange bakterier som er tilstede etter denne behandlingstilnærmingen. Selv om dette ikke er sannsynlig fra dataene til Costello et al. i 2009 ønsker vi å ha denne reserveplanen på plass slik at studien kan gå videre. Selv om disse resultatene ikke vil representere en steady-state, vil dataene være tilstrekkelige til å muliggjøre utforming av en påfølgende klinisk studie eller for å konkludere med at en langsiktig brukstilnærming ikke er verdt ytterligere analyser.

Eksperiment 3: For å måle steady-state overflod av S. aureus på deltakerens hud

Eksperiment 3 vil bestå av 6 kontorbesøk (screening, kultur, behandling og 3 oppfølgingsbesøk), samt en telefonsamtale for å videresende kvalifikasjonsinformasjon. Alle kontorbesøk vil finne sted ved UCSD Dermatology Clinic. Forsøkspersoner som har deltatt i eksperiment 2 må vente minst en periode tilsvarende 10 halveringstider av AMT-kremen før de begynner studieprosedyrene i eksperiment 3. Screening, telefonsamtale og kulturbesøk for eksperiment 3 er de samme som for eksperiment 1. Behandlingsbesøket og oppfølgingsbesøkene avviker litt fra de i eksperiment 1 og vil bli beskrevet nedenfor, med endringer understreket.

Behandlingsbesøk (dag 28 +/- 7) Kvalifiserte forsøkspersoner med + S. aureus-screeningskulturer vil bli registrert i studien og instruert om å returnere til klinikken ca. 28 dager etter screeningbesøket. Denne 3-ukers venteperioden vil tillate laboratoriepersonell å vokse og forberede forsøkspersonens endogene AMP-produserende bakterier for å blandes med Cetaphil for påføring ved behandlingsbesøket. AMP-produserende bakterier vil også bli screenet for å sikre at de ikke er patogene. For å simulere virkelige scenarier så mye som mulig, vil forsøkspersonen få fortsette sine vanlige aktiviteter under denne studien, inkludert bading, dusjing og trening. Dette besøket vil begynne med å gjennomgå pasientens midlertidige sykehistorie, inkludert medisinhistorie for å sikre at han/hun ikke brukte noen aktuelle AD-behandlinger på armene innen 7 dager eller orale AD-behandlinger innen 28 dager etter dette besøket. For forsøkspersoner som hadde en S. aureus (+) nesekultur ved screeningbesøk, vil en gjentatt nesekultur bli utført. For alle emner vil det da bli utført en fokusert fysisk undersøkelse av forsøkspersonens bilaterale armer for å sikre at det ikke er tegn på sprekker, brudd eller infeksjoner i huden på armene. Den lokaliserte SCORAD- og eksemalvorlighetsskalaen vil bli fullført på hver antecubital fossa. En TEWL-måler vil deretter bli brukt til å måle TEWL for hver antecubital fossa. Deretter vil vi forhåndsbehandle begge armene med en kur med vask med Dial flytende antibakteriell såpe, etterfulgt av å tørke av armene med 70 %, deretter 80 % alkohol. Når alkoholen har tørket, påføres et tynt lag av forsøkspersonens individualiserte AMT-krem på den ene armen av en studiekoordinator med hansker, og Cetaphil-lotion alene på den andre armen. De to kremene vil bli merket som enten 'Høyre' eller 'Venstre' for å tillate at studien utføres på en dobbeltblind måte (både forsøkspersonen og den kliniske etterforskeren/koordinatoren vil bli blindet med hensyn til hvilken arm som mottok hvilken behandling). Fem minutter senere vil en kvantitativ vask utføres på eksem på begge antecubitale fossae samt på et område med ikke-lesjonell hud på begge armer. For hver vask vil en steril sylinder av rustfritt stål med et omtrentlig areal på 3,5 cm2 holdes fast til hudoverflaten, og 2,5 ml av en steril strippevæske (SSFN) vil bli forsiktig dryppet inn i sylinderen. Huden vil deretter bli massert i 60 sekunder med en steril gummipolitimann. SSFN vil bli aspirert med en pipette og overført til et sterilt reagensrør. Hele denne prosessen vil bli gjentatt en gang til og væsken slås sammen. Den samlede væsken vil bli analysert i laboratoriet via kolonitellingsmetoder for å bestemme mengden levedyktige bakterier på huden på dette tidspunktet. Hudprøver av lesjons- og ikke-lesjonshud på begge armer vil også bli tatt for å bestemme hvilken type og mengden av hver bakterie som finnes på huden. Pasienten vil deretter motta engangsprøver av sin individualiserte AMT-krem og Cetaphil-lotion alene, samt hansker, og instruert om å påføre en alikvot på den tildelte armen ved doseringsintervallet bestemt i eksperiment 1 (men ikke overskride TID). Alle alikvoter vil bli merket med enten 'Venstre' eller 'Høyre' avhengig av hvilken arm de skal påføres på basert på om alikvoten er av kontroll-Cetaphil-lotion eller AMT-kremen. Siden de to produktene er identiske i utseende og konsistens, bør ikke forsøkspersonene kunne skille mellom de to produktene. Alle forsøkspersoner vil bli bedt om å vaske hendene og ta på rene hansker før hver alikvot påføring. Dette vil avslutte behandlingsbesøket. Vi forventer at dette besøket vil ta ca. 60 minutter.

Oppfølgingsbesøk 1, 2 og 3 (henholdsvis dag 33 +/- 2 dager, 38 +/- 2 dager og 43 +/- 2 dager) Pasientene vil returnere til klinikken omtrent hver 5. dag etter behandlingsbesøket for en oppfølgingsbesøk. Under dette besøket vil eventuelle bivirkninger av AMT-kremen bli registrert. Deretter vil den lokaliserte SCORAD- og eksemalvorlighetsskalaen brukes til å måle alvorlighetsgraden av forsøkspersonens eksem på hver av hans antecubitale fossae. TEWL for hver antecubital fossa vil også bli målt. Deretter vil en kvantitativ vask utføres på hver arm i området av antecubital fossa samt på et område med ikke-lesjonell hud på hver arm. En hudpinne av den lesjonelle og ikke-lesjonelle huden fra begge armer vil deretter bli utført. Pasienten vil motta ferske engangsprøver av både AMT-kremen og Cetaphil-lotionen merket med enten 'Venstre' eller 'Høyre' avhengig av hvilken arm alikvoten skal påføres (kun for oppfølgingsbesøk 1 og 2). Disse aktivitetene vil avslutte studiebesøket og alle studierelaterte prosedyrer. Hvert oppfølgingsbesøk bør ta ca. 45 minutter.