Ocena właściwości kinetycznych autologicznego przeszczepu mikrobiomu u dorosłych pacjentów z atopowym zapaleniem skóry

Niniejsze badanie zostanie przeprowadzone jako trzy eksperymenty zgodnie z trzema celami badania. Uczestnicy wyrażą zgodę na wszystkie trzy eksperymenty badawcze oddzielnie, ponieważ każdy eksperyment będzie miał inny formularz zgody. Podczas gdy poszczególni uczestnicy mogą uczestniczyć we wszystkich trzech badaniach podrzędnych, jeśli kwalifikują się do wszystkich trzech, nie ma wymogu, aby badani uczestniczyli w więcej niż jednym z badań podrzędnych. Łącznie 10 osób zostanie włączonych do Eksperymentów 1 i 2, a około 14 osób zostanie włączonych do Eksperymentu 3. Biorąc pod uwagę, że tylko około 75-80% pacjentów z AD jest skolonizowanych przez S. aureus, spodziewamy się, że badanie przesiewowe obejmie około 18 -20 przedmiotów spełniających kryteria włączenia. Osoby, które wycofają się z badania zostaną zastąpione.

Eksperyment 1: Określenie stabilności przeszczepionych bakterii na powierzchni skóry w czasie

Ta pierwsza część badania (Eksperyment 1) będzie się składać z 7 wizyt w gabinecie lekarskim (badanie przesiewowe, kultura, leczenie i 3 wizyty kontrolne) oraz jednej rozmowy telefonicznej w celu przekazania informacji o kwalifikowalności. Wszystkie wizyty w gabinecie będą odbywać się w Klinice Dermatologicznej UCSD. Dokładne procedury każdej wizyty omówiono poniżej.

Wizyta przesiewowa (wizyta 1, dzień 0) Przed rozpoczęciem jakichkolwiek procedur badawczych uczestnicy zostaną najpierw poproszeni o przejrzenie i podpisanie formularza świadomej zgody. Po uzyskaniu świadomej zgody kryteria włączenia/wyłączenia zostaną zweryfikowane. Zostanie przeprowadzona krótka historia medyczna i badanie fizykalne, które pomogą ocenić, czy pacjent spełnia wymagane kryteria badania. Kobiety w wieku rozrodczym wykonają w naszym gabinecie test ciążowy z moczu, aby upewnić się, że nie są w ciąży. Pacjenci, którzy spełniają kryteria włączenia i wyłączenia, zostaną następnie poddani wymazowi ze skóry zmienionej chorobowo w przebiegu atopowego zapalenia skóry w jednym z dołów łokciowych (Kong i in., 2012 wykazali, że osoby z AD skolonizowane przez S. aureus mają rezydentne bakterie S. aureus przez całe życie). powierzchni skóry, dlatego spodziewamy się, że jeden wymaz wystarczy), a także wymaz z nosa w celu wykrycia obecności S. aureus w nozdrzach. To zakończy wizytę przesiewową. Całkowity czas tej wizyty wyniesie około 30 minut.

Osoby, które nie spełniają kryteriów włączenia/wyłączenia ze względu na zastosowanie lub stosowanie zabronionych leków w podanym przedziale czasowym, zostaną uznane za osoby, które nie przeszły testu. Wymazy ze skóry tych pacjentów nie będą wykonywane. Pacjenci ci mogą wrócić na kolejną wizytę przesiewową po zakończeniu niezbędnego okresu wypłukiwania (7 dni w przypadku leków miejscowych, 28 dni w przypadku leków doustnych), jeśli są tym zainteresowani.

Telefon (Dzień 3 +/- 1) Pacjenci zostaną powiadomieni telefonicznie w ciągu 3 dni roboczych, czy ich skóra i wymazy z nosa wyrosły na S. aureus. Do badania zostaną włączeni pacjenci z pozytywnym wynikiem posiewu skóry w kierunku S. aureus wrażliwego na metycylinę (MSSA). Dla tych uczestników zostanie zaplanowane spotkanie kulturalne. Pacjenci zostaną wykluczeni, jeśli uzyskają którykolwiek z poniższych wyników: ujemny wynik posiewu skóry S. aureus lub dodatni wynik posiewu skóry na obecność S. aureus opornego na metycylinę (MRSA). Całkowita rozmowa telefoniczna powinna zająć około 5 minut.

Wizyta kulturalna (dzień 7 +/- 4) Kwalifikujący się uczestnicy powrócą na wizytę kulturalną w ciągu około tygodnia od wizyty przesiewowej. Podczas tej wizyty pobierzemy cztery (4) wymazy z nieuszkodzonej (bez AZS) skóry na ramionach pacjenta. Te wymazy z hodowli zostaną umieszczone w bulionie tryptonowo-sojowym (TSB) do czasu przetworzenia w laboratorium, gdzie zostaną użyte do wyhodowania gatunków Staph wytwarzających peptydy przeciwdrobnoustrojowe, które zostaną użyte do autologicznego przeszczepu mikrobiomu. Pacjenci otrzymają również kostkę nawilżającego mydła Dove, którego będą używać za każdym razem, gdy będą brać prysznic, aż do zakończenia wizyty kontrolnej. Osoby z dodatnim posiewem S. aureus z nosa podczas wizyty przesiewowej (Wizyta 1) otrzymają również tubkę maści z mupirocyną. Zostaną poinstruowani, jak stosować mupirocynę do nozdrzy przednich obustronnie dwa razy dziennie, począwszy od 5 dni przed wizytą leczniczą. Cała wizyta zajmie około 10 minut.

Wizyta lecznicza (dzień 28 +/- 7) Kwalifikujący się pacjenci z kulturami przesiewowymi + S. aureus zostaną włączeni do badania i poinstruowani, aby powrócili do kliniki około 28 dni po wizycie przesiewowej. Ten 3-tygodniowy okres oczekiwania pozwoli personelowi laboratorium wyhodować i przygotować endogenne bakterie wytwarzające AMP pacjenta do zmieszania z Cetaphilem do zastosowania podczas wizyty leczniczej. Aby w jak największym stopniu symulować scenariusze z życia wzięte, badany będzie mógł kontynuować swoje zwykłe czynności podczas tego badania, w tym kąpiel, prysznic i ćwiczenia. Ta wizyta rozpocznie się od przeglądu tymczasowej historii medycznej pacjenta, w tym historii leków, aby upewnić się, że nie stosował on/ona żadnych miejscowych terapii AD na ramionach w ciągu 7 dni lub doustnych terapii AD w ciągu 28 dni od tej wizyty. W przypadku pacjentów, u których podczas wizyty przesiewowej wykonano posiew z nosa S. aureus (+), zostanie przeprowadzony powtórny posiew z nosa. W przypadku wszystkich pacjentów zostanie następnie przeprowadzone ukierunkowane badanie fizyczne obustronnych ramion pacjenta, aby upewnić się, że nie ma śladów pęknięć, złamań lub infekcji skóry na ramionach. Następnie obydwa ramiona przemyjemy mydłem antybakteryjnym w płynie Dial, a następnie przemyjemy ramię sterylną gazą nasączoną 70%, a następnie 80% alkoholem. Gdy alkohol wyschnie, cienka warstwa zindywidualizowanego kremu AMT osoby badanej zostanie następnie nałożona na każde ramię przez ręce w rękawiczkach koordynatora badania. Pięć minut po nałożeniu kremu zostanie przemyta ilościowo skóra wypryskowa jednego dołu łokciowego oraz nieuszkodzony obszar skóry tego samego ramienia. Podczas każdego mycia sterylny cylinder ze stali nierdzewnej o powierzchni około 3,5 cm2 będzie mocno przytrzymywany do powierzchni skóry, a następnie ostrożnie wkrapla się do cylindra 2,5 ml sterylnego płynu do usuwania (SSFN). Następnie skóra będzie masowana przez 60 sekund sterylnym gumowym policjantem. SSFN zostanie zassany pipetą i przeniesiony do sterylnej probówki. Cały proces zostanie powtórzony po raz drugi w tym samym miejscu, a płyn zostanie zebrany razem. Zebrany płyn zostanie przeanalizowany w laboratorium za pomocą metod liczenia kolonii w celu określenia liczby żywych kolonii bakterii na powierzchni skóry. Następnie zostanie pobrany wymaz ze skóry ze zmianami chorobowymi i bez zmian. To zakończy wizytę leczniczą. Oczekujemy, że ta wizyta zajmie około 30 minut.

Wizyty kontrolne Podczas wizyt kontrolnych każdy pacjent powróci do kliniki w celu ilościowego przemycia skóry ze zmianami chorobowymi i bez zmian oraz pobrania wymazu ze skóry ze zmianami i bez zmian. 10 zapisanych osób zostanie podzielonych na dwie grupy, a każda grupa powróci na obserwację w różnych punktach czasowych. Pierwszych pięciu zapisanych pacjentów zostanie przydzielonych do pierwszej grupy, która powróci na obserwację w następujących punktach czasowych: 1, 4, 8 i 24 godziny po przeszczepie. Kolejnych pięciu pacjentów, którzy zostaną zapisani, zostanie przydzielonych do drugiej grupy i powróci na obserwację w następujących punktach czasowych: 1, 2, 4 i 7 dni po przeszczepie. Płukanie ilościowe w ostatnim punkcie kontrolnym zakończy badanie dla tego uczestnika. Każda wizyta kontrolna trwa około 20 minut.

Średnia przeżywalność przeszczepionych gatunków gronkowca zarówno na skórze ze zmianami chorobowymi, jak i bez zmian zostanie wykreślona dla każdego punktu czasowego. Na podstawie tych danych będziemy mogli obliczyć tempo zanikania bakterii po przeszczepie, co da nam okres półtrwania bakterii.

Eksperyment 2: Ustalenie stałej obfitości aplikacji kremu do przeszczepu autologicznego mikrobiomu niezbędnego do uzyskania gęstości przeszczepionych bakterii zbliżonej do średniego stężenia drobnoustrojów na normalnej skórze, około 105/cm2

Eksperyment 2 będzie obejmował 4 wizyty w gabinecie (badanie przesiewowe, kultura, leczenie i obserwacja), a także jedną rozmowę telefoniczną w celu przekazania informacji o kwalifikowalności. Wszystkie wizyty w gabinecie będą odbywać się w Klinice Dermatologicznej UCSD. Osoby biorące udział zarówno w Eksperymencie 1, jak iw Eksperymencie 2 muszą odczekać co najmniej okres czasu równy 10 okresom półtrwania kremu AMT przed rozpoczęciem procedur badawczych Eksperymentu 2. Badanie przesiewowe, rozmowa telefoniczna i wizyty hodowlane w ramach Eksperymentu 3 są tak samo jak w eksperymencie 1. Wizyta lecznicza i wizyty kontrolne różnią się nieco od tych w eksperymencie 1 i zostaną opisane poniżej, z podkreśleniem zmian.

Wizyta terapeutyczna (dzień 28 +/- 7) Kwalifikujący się pacjenci z kulturami przesiewowymi + S. aureus zostaną włączeni do badania i poinstruowani, aby wrócili do kliniki około 28 dni po wizycie przesiewowej w celu wizyty terapeutycznej. Ten 3-tygodniowy okres oczekiwania pomiędzy posiewem a wizytami terapeutycznymi pozwoli personelowi laboratorium wyhodować i przygotować endogenne bakterie wytwarzające AMP pacjenta do zmieszania z Cetaphilem do zastosowania podczas wizyty leczniczej. Aby w jak największym stopniu symulować scenariusze z życia wzięte, badany będzie mógł kontynuować swoje zwykłe czynności podczas tego badania, w tym kąpiel, prysznic i ćwiczenia. Ta wizyta rozpocznie się od przeglądu tymczasowej historii medycznej pacjenta, w tym historii leków, aby upewnić się, że nie stosował on/ona żadnych miejscowych terapii AD na ramionach w ciągu 7 dni lub doustnych terapii AD w ciągu 28 dni od tej wizyty. W przypadku pacjentów, u których podczas wizyty przesiewowej wykonano posiew z nosa S. aureus (+), zostanie przeprowadzony powtórny posiew z nosa. W przypadku wszystkich pacjentów zostanie następnie przeprowadzone ukierunkowane badanie fizyczne obustronnych ramion pacjenta, aby upewnić się, że nie ma śladów pęknięć, złamań lub infekcji skóry na ramionach. Następnie przemyjemy jedno ramię płynnym mydłem antybakteryjnym Dial, a następnie przemyjemy ramię 70%, a następnie 80% alkoholem za pomocą sterylnej gazy. Gdy alkohol wyschnie, cienka warstwa zindywidualizowanego kremu AMT osoby badanej zostanie następnie nałożona na jedno z ramion osoby badanej przez ręce w rękawiczkach koordynatora badania. Pięć minut później zostanie przemyta ilościowo skóra wypryskowa w dole łokciowym ramienia leczonego kremem AMT oraz obszar skóry nieuszkodzonej na tym samym ramieniu. Podczas każdego mycia sterylny cylinder ze stali nierdzewnej o powierzchni około 3,5 cm2 będzie mocno przytrzymywany do powierzchni skóry, a następnie ostrożnie wkrapla się do cylindra 2,5 ml sterylnego płynu do usuwania (SSFN). Następnie skóra będzie masowana przez 60 sekund sterylnym gumowym policjantem. SSFN zostanie zassany pipetą i przeniesiony do sterylnej probówki. Cały proces zostanie powtórzony po raz drugi, a płyn zostanie zebrany razem. Zebrany płyn zostanie przeanalizowany w laboratorium za pomocą PCR, aby określić, ile i jaki rodzaj bakterii jest obecnych. Zostanie również pobrany wymaz ze skóry uszkodzonej i nieuszkodzonej. Następnie badani otrzymają jednorazowe porcje własnego kremu AMT i rękawiczek, które zabiorą ze sobą do domu. Zostaną oni poinstruowani, aby aplikować jedną porcję na to samo ramię, na które została ona zastosowana podczas wizyty leczniczej, w odstępach między kolejnymi dawkami określonymi na podstawie okresu półtrwania obliczonego na podstawie wyników Eksperymentu 1 dla łącznie 6 dawek (schemat dawkowania przewiduje się osiągnięcie stanu ustalonego). Zostaną poinstruowani, aby myli ręce i zakładali rękawiczki przed każdym nałożeniem kremu. To zakończy wizytę leczniczą. Oczekujemy, że ta wizyta zajmie około 30 minut.

Wizyta kontrolna (przeprowadzana podczas 7. aplikacji kremu AMT) Podczas wizyty kontrolnej pacjenci powrócą do kliniki w celu ilościowego przemycia skóry ze zmianami chorobowymi i bez zmian w celu określenia obfitości S. , aureus podczas tej wizyty. Zostanie również pobrany wymaz ze skóry zmienionej i nieuszkodzonej. Ta wizyta zakończy Eksperyment 2. Będzie trwała około 15 minut.

Dodatkowe uwagi: W tym eksperymencie naszym celem jest ustalenie obfitości AMT w stanie ustalonym przy użyciu gęstości bakterii podobnej do średniego stężenia drobnoustrojów na normalnej skórze, około 105/cm2. Wykorzystując wyniki Eksperymentu 1, możemy oszacować okres półtrwania bakterii na badanej powierzchni skóry. Możliwe, że okres półtrwania kremu AMT określony w eksperymencie 1 będzie krótki, być może nawet tak krótki, jak kilka godzin. Jeśli krem ​​AMT wykazuje szybką utratę przeszczepionych bakterii, tak że niepraktyczne jest dalsze zwiększanie częstości stosowania AMT (zakładanej jako większa niż TID), a dawki AMT nie można praktycznie zwiększyć w stosunku do standardowej dawki 108 bakterii/ gm, zastosowanej w dawce 10 g/m2, pacjent zastosuje maksymalną praktyczną dawkę (109 bakterii/gm przy 40 gm/m2) przy maksymalnej praktycznej częstotliwości (TID) i będziemy to robić przez tydzień, aby określić, ile bakterii obecne po tym podejściu do leczenia. Chociaż nie jest to prawdopodobne na podstawie danych Costello i in. w 2009 r. chcemy mieć ten plan awaryjny, aby umożliwić postęp badań. Chociaż wyniki te nie reprezentowałyby stanu stacjonarnego, dane byłyby wystarczające, aby umożliwić zaprojektowanie kolejnego badania klinicznego lub stwierdzić, że długoterminowe podejście do stosowania nie jest warte dalszych analiz.

Eksperyment 3: Aby zmierzyć liczebność S. aureus w stanie ustalonym na skórze uczestnika

Eksperyment 3 będzie obejmował 6 wizyt w gabinecie (badanie przesiewowe, kultura, leczenie i 3 wizyty kontrolne), a także jedną rozmowę telefoniczną w celu przekazania informacji o kwalifikowalności. Wszystkie wizyty w gabinecie będą odbywać się w Klinice Dermatologicznej UCSD. Osoby, które brały udział w Eksperymencie 2, muszą odczekać co najmniej okres odpowiadający 10 okresom półtrwania kremu AMT przed rozpoczęciem procedur badawczych Eksperymentu 3. Badanie przesiewowe, rozmowa telefoniczna i wizyty hodowlane w ramach Eksperymentu 3 są takie same jak dla Eksperymentu 1. Wizyta lecznicza i wizyty kontrolne różnią się nieco od tych w eksperymencie 1 i zostaną opisane poniżej, z podkreśleniem zmian.

Wizyta lecznicza (dzień 28 +/- 7) Kwalifikujący się pacjenci z kulturami przesiewowymi + S. aureus zostaną włączeni do badania i poinstruowani, aby powrócili do kliniki około 28 dni po wizycie przesiewowej. Ten 3-tygodniowy okres oczekiwania pozwoli personelowi laboratorium wyhodować i przygotować endogenne bakterie wytwarzające AMP pacjenta do zmieszania z Cetaphilem do zastosowania podczas wizyty leczniczej. Bakterie wytwarzające AMP będą również badane, aby upewnić się, że nie są chorobotwórcze. Aby w jak największym stopniu symulować scenariusze z życia wzięte, badany będzie mógł kontynuować swoje zwykłe czynności podczas tego badania, w tym kąpiel, prysznic i ćwiczenia. Ta wizyta rozpocznie się od przeglądu tymczasowej historii medycznej pacjenta, w tym historii leków, aby upewnić się, że nie stosował on/ona żadnych miejscowych terapii AD na ramionach w ciągu 7 dni lub doustnych terapii AD w ciągu 28 dni od tej wizyty. W przypadku pacjentów, u których podczas wizyty przesiewowej wykonano posiew z nosa S. aureus (+), zostanie przeprowadzony powtórny posiew z nosa. W przypadku wszystkich pacjentów zostanie następnie przeprowadzone ukierunkowane badanie fizyczne obustronnych ramion pacjenta, aby upewnić się, że nie ma śladów pęknięć, złamań lub infekcji skóry na ramionach. Zlokalizowana skala SCORAD i nasilenia egzemy zostanie wypełniona na każdym dole łokciowym. Miernik TEWL zostanie następnie użyty do pomiaru TEWL każdego dołu łokciowego. Następnie obydwa ramiona przemyjemy mydłem antybakteryjnym w płynie Dial, a następnie przemyjemy ramiona 70%, a następnie 80% alkoholem. Po wyschnięciu alkoholu na jedno ramię osoby w rękawiczkach nakłada się cienką warstwę zindywidualizowanego kremu AMT osoby badanej, a na drugie ramię nakłada się sam balsam Cetaphil. Oba kremy zostaną oznaczone jako „Prawe” lub „Lewe”, aby umożliwić przeprowadzenie badania metodą podwójnie ślepej próby (zarówno pacjent, jak i badacz kliniczny/koordynator nie będą wiedzieli, które ramię otrzymało które leczenie). Pięć minut później zostanie przemyta ilościowo skóra wypryskowa obu dołów łokciowych oraz obszar nieuszkodzonej skóry obu ramion. Podczas każdego mycia sterylny cylinder ze stali nierdzewnej o powierzchni około 3,5 cm2 będzie mocno przytrzymywany do powierzchni skóry, a następnie ostrożnie wkrapla się do cylindra 2,5 ml sterylnego płynu do usuwania (SSFN). Następnie skóra będzie masowana przez 60 sekund sterylnym gumowym policjantem. SSFN zostanie zassany pipetą i przeniesiony do sterylnej probówki. Cały proces zostanie powtórzony po raz drugi, a płyn zostanie zebrany razem. Zebrany płyn zostanie przeanalizowany w laboratorium za pomocą metod liczenia kolonii w celu określenia ilości żywych bakterii na skórze w tym momencie. Pobrane zostaną również wymazy ze zmienionej i nieuszkodzonej skóry obu ramion w celu określenia rodzaju i liczebności każdej bakterii obecnej na skórze. Następnie pacjent otrzyma jednorazowe porcje swojego zindywidualizowanego kremu AMT i samego balsamu Cetaphil, jak również rękawiczki, i zostanie poinstruowany, aby nakładać jedną porcję na przydzielone mu ramię w odstępach dawkowania określonych w Eksperymencie 1 (ale nie przekraczać TID). Wszystkie porcje zostaną oznaczone etykietą „Lewa” lub „Prawa”, w zależności od tego, na które ramię należy je nałożyć, w zależności od tego, czy porcja dotyczy kontrolnego balsamu Cetaphil, czy kremu AMT. Ponieważ oba produkty mają identyczny wygląd i konsystencję, badani nie powinni być w stanie odróżnić tych dwóch produktów. Wszyscy badani zostaną poinstruowani, aby umyli ręce i założyli czyste rękawiczki przed każdą aplikacją podwielokrotności. To zakończy wizytę leczniczą. Przewidujemy, że ta wizyta zajmie około 60 minut.

Wizyty kontrolne 1, 2 i 3 (odpowiednio dni 33 +/- 2 dni, 38 +/- 2 dni i 43 +/- 2 dni) Pacjenci będą wracać do kliniki mniej więcej co 5 dni po wizycie leczniczej na powtórna wizyta. Podczas tej wizyty zostaną odnotowane wszelkie niepożądane reakcje na krem ​​AMT. Następnie, do oceny nasilenia egzemy pacjenta w każdym z jego dołu łokciowego, zostanie wykorzystana zlokalizowana skala SCORAD i nasilenia egzemy. Zostanie również zmierzony TEWL każdego dołu łokciowego. Następnie zostanie przeprowadzone płukanie ilościowe na każdym ramieniu w okolicy dołu łokciowego oraz na obszarze skóry nieuszkodzonej na każdym ramieniu. Następnie zostanie pobrany wymaz ze zmienionej i nieuszkodzonej skóry z obu ramion. Pacjent otrzyma świeżo przygotowane jednorazowe porcje zarówno kremu AMT, jak i balsamu Cetaphil, oznaczone jako „Lewe” lub „Prawe”, w zależności od tego, na które ramię należy nałożyć porcję (tylko w przypadku wizyt kontrolnych 1 i 2). Działania te zakończą wizytę studyjną i wszystkie procedury związane z badaniem. Każda wizyta kontrolna powinna trwać około 45 minut.