成人特应性皮炎患者自体微生物移植的动力学特性评估

本研究将按照研究的三个目的分为三个实验进行。 参与者将分别同意所有三个研究实验，因为每个实验都有不同的同意书。 如果个别受试者符合所有三个子研究的条件，则他们可以参加所有三个子研究，但不要求受试者参加一个以上的子研究。 总共有 10 名受试者将被纳入实验 1 和 2，大约 14 名受试者将被纳入实验 3。鉴于只有大约 75-80% 的 AD 患者被金黄色葡萄球菌定植，我们预计筛选接近 18 -20 个受试者满足纳入标准。 退出研究的受试者将被替换。

实验 1：确定移植细菌在皮肤表面随时间的稳定性

研究的第一部分（实验 1）将包括 7 次办公室访问（筛查、培养、治疗和 3 次后续访问）和一次传递资格信息的电话。 所有办公室访问都将在 UCSD 皮肤科诊所进行。 每次访问的具体程序将在下文讨论。

筛选访视（第 1 次访视，第 0 天） 在开始任何研究程序之前，将首先要求受试者查看并签署知情同意书。 在获得知情同意后，将审查纳入/排除标准。 将进行简短的病史和体格检查，以帮助评估受试者是否符合研究所需的标准。 具有生育潜力的女性受试者将在我们的办公室进行尿液妊娠试验，以确保她们没有怀孕。 符合纳入和排除标准的患者随后将在其肘前窝之一的病变特应性皮炎皮肤上进行皮肤拭子检查（Kong 等人，2012 年表明，被金黄色葡萄球菌定植的 AD 受试者在其整个皮肤中都有常驻的金黄色葡萄球菌皮肤表面，因此我们预计一根拭子就足够了），以及一根鼻腔培养拭子来检测鼻孔中是否存在金黄色葡萄球菌。 这将结束筛选访问。 这次访问的总时间约为 30 分钟。

由于在注明的时间范围内应用或使用违禁药物而不符合纳入/排除标准的受试者将被视为筛选失败。 这些患者的皮肤拭子将不会被执行。 如果他们有兴趣这样做，这些受试者可以在完成必要的清洗期（局部用药 7 天，口服药物 28 天）后返回进行另一次筛查访问。

电话（第 3 天 +/- 1） 将在 3 个工作日内通过电话通知受试者他们的皮肤和鼻拭子是否长出金黄色葡萄球菌。 皮肤培养对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌 (MSSA) 呈阳性的受试者将被纳入研究。 将为这些参与者安排一次文化访问预约。 如果受试者有以下任何一项，则他们将被排除在外：金黄色葡萄球菌皮肤培养阴性或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA) 皮肤培养阳性。 整个电话交谈大约需要 5 分钟。

文化访问（第 7 天 +/- 4） 符合条件的受试者将在筛选访问后大约一周内返回进行文化访问。 在这次访问期间，我们将从受试者上臂的非损伤（无 AD）皮肤上采集四 (4) 个培养拭子。 这些培养拭子将被放置在胰蛋白酶大豆肉汤 (TSB) 中，直到在实验室进行处理，在那里它们将被用来培养受试者的产生抗菌肽的葡萄球菌物种，以用于自体微生物组移植。 受试者还将收到一块 Dove 保湿肥皂，他们将被指示在每次淋浴时使用它，直到完成后续访问。 在筛选访视（访视 1）时金黄色葡萄球菌鼻培养呈阳性的受试者也将接受一管莫匹罗星软膏。 从他们就诊前 5 天开始，他们将被指导每天两次将莫匹罗星应用于双侧前鼻孔。 整个访问大约需要 10 分钟。

治疗访视（第 28 天 +/- 7） 具有 + 金黄色葡萄球菌筛选培养物的合格受试者将被纳入研究，并被指示在筛选访视后约 28 天返回诊所。 这 3 周的等待期将允许实验室工作人员培养和准备受试者的内源性 AMP 产生细菌，以便与 Cetaphil 混合，以便在治疗访问时应用。 为了尽可能模拟现实生活场景，受试者将被允许在本研究期间继续他们的日常活动，包括洗澡、淋浴和锻炼。 这次访问将首先审查受试者的临时病史，包括用药史，以确保他/她在这次访问后的 7 天内没有在他们的手臂上使用任何局部 AD 治疗或在这次访问后的 28 天内没有使用任何口服 AD 治疗。 对于在筛选访问时进行了金黄色葡萄球菌 (+) 鼻腔培养的受试者，将进行重复的鼻腔培养。 对于所有受试者，随后将对受试者的双侧手臂进行重点体检，以确保手臂皮肤没有裂缝、破损或感染的迹象。 接下来我们将用 Dial 液体抗菌肥皂清洗双臂，然后用浸有 70% 酒精的无菌纱布擦拭手臂，然后用 80% 酒精擦拭手臂。 一旦酒精变干，研究协调员就会用戴手套的双手将一层薄薄的受试者个性化 AMT 霜涂抹在每只手臂上。 涂抹乳膏后五分钟，将对一侧肘窝湿疹皮肤和同一手臂的非病变皮肤区域进行定量清洗。 每次清洗时，将面积约为 3.5 cm2 的无菌不锈钢圆筒牢牢固定在皮肤表面，并将 2.5 mL 无菌剥离液 (SSFN) 小心滴入圆筒中。 然后使用经过消毒的橡胶警察对皮肤进行 60 秒的按摩。 SSFN 将用移液器吸出并转移到无菌试管中。 整个过程将在同一地点重复第二次，并将液体汇集在一起​​。 汇集的液体将在实验室中通过菌落计数方法进行分析，以确定皮肤表面的活细菌菌落数量。 然后采集损伤和非损伤皮肤的皮肤拭子。 这将结束治疗访问。 我们预计这次访问大约需要 30 分钟。

后续访问 在后续访问期间，每个受试者将返回诊所以对其损伤和非损伤皮肤进行定量清洗并对其损伤和非损伤皮肤进行皮肤拭子。 将入组的10名受试者分为两组，每组将在不同时间点返回进行随访。 前五名入组的患者将被分配到第一组，他们将在以下时间点返回进行随访：移植后 1、4、8 和 24 小时。 接下来要登记的五名患者将被分配到第二组，并将在以下时间点返回进行随访：移植后 1、2、4 和 7 天。 在最后的后续时间点进行的定量清洗将结束该参与者的研究。 每次后续访问大约需要 20 分钟。

将针对每个时间点绘制移植葡萄球菌在损伤和非损伤皮肤上的平均存活率。 根据这些数据，我们将能够计算出细菌在移植后的衰退速度，这将为我们提供细菌的半衰期。

实验 2：建立自体微生物组移植霜应用的稳态丰度，以实现与正常皮肤上微生物平均浓度相似的移植细菌密度，大约 105/cm2

实验 2 将包括 4 次办公室访问（筛查、培养、治疗和跟进），以及一次传递资格信息的电话。 所有办公室访问都将在 UCSD 皮肤科诊所进行。 同时参加实验 1 和 2 的受试者必须等待至少相当于 AMT 乳膏 10 个半衰期的时间，然后才能开始实验 2 的研究程序。实验 3 的筛选、电话和培养访视是与实验 1 相同。 治疗访问和后续访问与实验 1 中的那些略有不同，将在下面进行描述，并在下划线处进行更改。

治疗访视（第 28 天 +/- 7） 具有 + 金黄色葡萄球菌筛查培养物的合格受试者将被纳入研究，并被指示在他们的治疗访视筛查访视后约 28 天返回诊所。 培养和治疗就诊之间的这 3 周等待期将使实验室工作人员能够培养和准备受试者的内源性 AMP 产生细菌，以便与 Cetaphil 混合，以便在治疗就诊时应用。 为了尽可能模拟现实生活场景，受试者将被允许在本研究期间继续他们的日常活动，包括洗澡、淋浴和锻炼。 这次访问将首先审查受试者的临时病史，包括用药史，以确保他/她在这次访问后的 7 天内没有在他们的手臂上使用任何局部 AD 治疗或在这次访问后的 28 天内没有使用任何口服 AD 治疗。 对于在筛选访问时进行了金黄色葡萄球菌 (+) 鼻腔培养的受试者，将进行重复的鼻腔培养。 对于所有受试者，随后将对受试者的双侧手臂进行重点体检，以确保手臂皮肤没有裂缝、破损或感染的迹象。 接下来，我们将用 Dial 液体抗菌皂清洗手臂，然后用无菌纱布用 70% 酒精和 80% 酒精擦拭手臂。 一旦酒精变干，研究协调员将用戴手套的手将一层薄薄的受试者个性化 AMT 霜涂在受试者的一只手臂上。 五分钟后，将对用 AMT 霜治疗的手臂的肘窝湿疹皮肤以及同一手臂上的非病变皮肤区域进行定量清洗。 每次清洗时，将面积约为 3.5 cm2 的无菌不锈钢圆筒牢牢固定在皮肤表面，并将 2.5 mL 无菌剥离液 (SSFN) 小心滴入圆筒中。 然后使用经过消毒的橡胶警察对皮肤进行 60 秒的按摩。 SSFN 将用移液器吸出并转移到无菌试管中。 整个过程将重复第二次并将液体汇集在一起​​。 汇集的液体将在实验室通过 PCR 进行分析，以确定存在的细菌数量和类型。 还将完成损伤和非损伤皮肤的皮肤拭子。 然后，受试者将获得一次性等份的 AMT 霜和手套，以便带回家。 他们将被指示将其中一份等分试样应用于治疗访视期间曾应用于其的同一只手臂，给药间隔根据根据实验 1 结果计算的半衰期确定，总共 6 剂（给药方案预计达到稳定状态）。 他们将被指示在每次使用面霜之前洗手并戴上手套。 这将结束治疗访问。 我们预计这次访问大约需要 30 分钟。

随访访问（在第 7 次应用 AMT 霜时发生）在随访访问期间，受试者将返回诊所对其损伤和非损伤皮肤进行定量清洗以确定 S 的丰度. aureus 在这次访问中。 还将对病变和非病变皮肤进行皮肤拭子检查。 这次访问将结束实验 2。它将持续大约 15 分钟。

其他注意事项：在本实验中，我们的目标是使用类似于正常皮肤上微生物平均浓度（大约 105/cm2）的细菌密度来确定 AMT 的稳态丰度。 使用实验 1 的结果，我们可以估计受试者皮肤表面细菌的半衰期。 实验 1 中确定的 AMT 乳膏半衰期可能很短，甚至可能短至几个小时。 如果 AMT 霜确实显示移植细菌的快速损失，以至于进一步增加 AMT 的应用频率（假设大于 TID）是不切实际的，并且 AMT 的剂量实际上不能从标准 108 细菌/ gm，以 10 gm/m2 施用，受试者将以最大实际频率 (TID) 施用最大实际剂量（40gm/m2 时 109 个细菌/gm），我们将这样做一周以确定有多少细菌出现这种治疗方法后。 虽然这不太可能来自 Costello 等人的数据。 2009 年，我们希望制定此后备计划，以便继续推进研究。 尽管这些结果不代表稳态，但数据足以支持后续临床试验的设计或得出长期应用方法不值得进一步分析的结论。

实验 3：测量参与者皮肤上金黄色葡萄球菌的稳态丰度

实验 3 将包括 6 次办公室访问（筛查、培养、治疗和 3 次后续访问），以及一次传递资格信息的电话。 所有办公室访问都将在 UCSD 皮肤科诊所进行。 参加过实验二的受试者必须至少等待相当于AMT霜10个半衰期的时间，才能开始实验三的研究程序。实验三的筛选、电话、培养访视与实验三相同。对于实验 1。 治疗访问和后续访问与实验 1 中的那些略有不同，将在下面进行描述，并在下划线处进行更改。

治疗访视（第 28 天 +/- 7） 具有 + 金黄色葡萄球菌筛选培养物的合格受试者将被纳入研究，并被指示在筛选访视后约 28 天返回诊所。 这 3 周的等待期将允许实验室工作人员培养和准备受试者的内源性 AMP 产生细菌，以便与 Cetaphil 混合，以便在治疗访问时应用。 还将筛选产生 AMP 的细菌以确保它不致病。 为了尽可能模拟现实生活场景，受试者将被允许在本研究期间继续他们的日常活动，包括洗澡、淋浴和锻炼。 这次访问将首先审查受试者的临时病史，包括用药史，以确保他/她在这次访问后的 7 天内没有在他们的手臂上使用任何局部 AD 治疗或在这次访问后的 28 天内没有使用任何口服 AD 治疗。 对于在筛选访问时进行了金黄色葡萄球菌 (+) 鼻腔培养的受试者，将进行重复的鼻腔培养。 对于所有受试者，随后将对受试者的双侧手臂进行重点体检，以确保手臂皮肤没有裂缝、破损或感染的迹象。 将在每个肘前窝完成局部化的 SCORAD 和湿疹严重程度量表。 然后将使用 TEWL 计测量每个肘前窝的 TEWL。 接下来，我们将用 Dial 液体抗菌肥皂清洗双臂，然后用 70% 的酒精擦拭手臂，然后用 80% 的酒精擦拭手臂。 一旦酒精变干，研究协调员会用戴手套的手在受试者的一只手臂上涂抹一层薄薄的个体化 AMT 霜，​​另一只手臂则单独涂上 Cetaphil 乳液。 这两种面霜将被标记为“右”或“左”，以允许以双盲方式进行研究（受试者和临床研究者/协调员都不知道哪只手臂接受了哪种治疗）。 五分钟后，对双侧肘窝湿疹皮肤和双臂非病变皮肤区域进行定量清洗。 每次清洗时，将面积约为 3.5 cm2 的无菌不锈钢圆筒牢牢固定在皮肤表面，并将 2.5 mL 无菌剥离液 (SSFN) 小心滴入圆筒中。 然后使用经过消毒的橡胶警察对皮肤进行 60 秒的按摩。 SSFN 将用移液器吸出并转移到无菌试管中。 整个过程将重复第二次并将液体汇集在一起​​。 汇集的液体将在实验室中通过菌落计数方法进行分析，以确定此时皮肤上的活细菌数量。 双臂的病变和非病变皮肤的皮肤拭子也将被用来确定皮肤上存在的每种细菌的类型和丰度。 然后，受试者将单独接受他的个性化 AMT 霜和 Cetaphil 乳液的一次性等分试样，以及手套，并指示在实验 1 中确定的给药间隔（但不超过 TID）将一个等分试样应用于其指定的手臂。 所有等分试样都将标记为“左”或“右”，具体取决于它们应该应用于哪只手臂，具体取决于等分试样是对照 Cetaphil 乳液还是 AMT 霜。 由于这两种产品在外观和一致性上完全相同，因此受试者应该无法区分这两种产品。 在每次等分应用之前，将指示所有受试者洗手并戴上干净的手套。 这将结束治疗访问。 我们预计这次访问大约需要 60 分钟。

第 1、2 和 3 次随访（分别为第 33 +/- 2 天、38 +/- 2 天和 43 +/- 2 天）随访。 在这次访问期间，将记录对 AMT 霜的任何不良反应。 接下来，将使用局部 SCORAD 和湿疹严重程度量表对受试者每个肘前窝湿疹的严重程度进行评分。 还将测量每个肘前窝的 TEWL。 接下来，将对每只手臂的肘窝区域以及每只手臂上的非损伤皮肤区域进行定量清洗。 然后将对双臂的病变和非病变皮肤进行皮肤拭子检查。 受试者将收到标有“左”或“右”的新鲜制备的一次性 AMT 霜和 Cetaphil 乳液等分试样，具体取决于等分试样应应用于哪只手臂（仅用于后续访问 1 和 2）。 这些活动将结束研究访问和所有与研究相关的程序。 每次随访大约需要 45 分钟。