Оценка кинетических свойств трансплантата аутологичного микробиома у взрослых пациентов с атопическим дерматитом

Это исследование будет проводиться в виде трех экспериментов в соответствии с тремя целями исследования. Участники будут давать согласие на все три изучаемых эксперимента по отдельности, поскольку для каждого эксперимента будет своя форма согласия. Хотя отдельные субъекты могут участвовать во всех трех подисследованиях, если они имеют право на участие во всех трех, от субъектов не требуется участвовать более чем в одном из подисследований. Всего в экспериментах 1 и 2 будет задействовано 10 субъектов, а в эксперименте 3 будет задействовано примерно 14 субъектов. -20 предметов для выполнения критериев включения. Субъекты, вышедшие из исследования, будут заменены.

Эксперимент 1: Определение стабильности трансплантированных бактерий на поверхности кожи во времени

Эта первая часть исследования (Эксперимент 1) будет состоять из 7 посещений офиса (скрининг, посев, лечение и 3 последующих визита) и одного телефонного звонка для передачи информации о соответствии требованиям. Все визиты в офис будут происходить в дерматологической клинике UCSD. Точные процедуры для каждого визита обсуждаются ниже.

Скрининговый визит (посещение 1, день 0) Перед началом любых процедур исследования субъектов сначала попросят просмотреть и подписать форму информированного согласия. После получения информированного согласия будут рассмотрены критерии включения/исключения. Краткий анамнез и медицинский осмотр будут выполнены, чтобы помочь оценить, соответствует ли субъект необходимым критериям для исследования. Субъекты женского пола, способные к деторождению, пройдут анализ мочи на беременность в нашем офисе, чтобы убедиться, что они не беременны. У пациентов, отвечающих критериям включения и исключения, затем берут кожный мазок с очага атопического дерматита в одной из их локтевых ямок (Kong et al, 2012 показали, что у пациентов с БА, колонизированных S. aureus, бактерии S. aureus присутствуют на всем протяжении их тела). поверхности кожи, поэтому мы ожидаем, что одного мазка будет достаточно), а также мазок из носа для выявления присутствия S. aureus в носовых ходах. На этом ознакомительный визит завершится. Общее время посещения составит около 30 минут.

Субъекты, которые не соответствуют критериям включения/исключения из-за применения или использования запрещенных препаратов в течение указанного периода времени, будут считаться не прошедшими скрининг. Кожные мазки у этих пациентов не берутся. Эти субъекты могут вернуться для еще одного визита для скрининга после завершения необходимого периода вымывания (7 дней для местных лекарств, 28 дней для пероральных лекарств), если они заинтересованы в этом.

Телефон (День 3 +/- 1) Субъекты будут уведомлены по телефону в течение 3 рабочих дней о том, был ли на их коже и носовых мазках обнаружен S. aureus. В исследование будут включены субъекты с положительной культурой кожи на метициллин-чувствительный S. aureus (MSSA). Для этих участников будет запланирован визит в культуру. Субъекты будут исключены, если у них есть любое из следующего: отрицательный результат посева кожи на S. aureus или положительный результат посева кожи на метициллин-резистентный S. aureus (MRSA). Общая продолжительность телефонного разговора должна составлять примерно 5 минут.

Посещение культуры (День 7 +/- 4) Подходящие субъекты вернутся для посещения культуры в течение примерно недели после посещения скрининга. Во время этого визита мы возьмем четыре (4) культуральных мазка с неповрежденной (без AD) кожи субъекта на его плечах. Эти культуральные мазки будут помещены в триптический соевый бульон (TSB) до обработки в лаборатории, где они будут использованы для выращивания видов Staph, продуцирующих противомикробные пептиды, для использования в трансплантации аутологичного микробиома. Субъекты также получат брусок увлажняющего мыла Dove, которым им будет предписано пользоваться всякий раз, когда они принимают душ, до тех пор, пока не завершится последующий визит. Субъекты с положительной культурой носа S. aureus во время скринингового посещения (посещение 1) также получат тюбик с мазью мупироцин. Они будут проинструктированы о нанесении мупироцина на передние отделы носа двусторонне два раза в день, начиная с 5 дней до визита для лечения. В целом посещение займет около 10 минут.

Визит для лечения (день 28 +/- 7) Подходящие субъекты со скрининговыми культурами + S. aureus будут включены в исследование, и им будет предложено вернуться в клинику примерно через 28 дней после их скринингового визита. Этот 3-недельный период ожидания позволит персоналу лаборатории вырастить и подготовить эндогенные бактерии, продуцирующие AMP, для смешивания с Cetaphil для применения во время лечебного визита. Чтобы максимально имитировать сценарии реальной жизни, субъекту будет разрешено продолжать свою обычную деятельность во время этого исследования, включая купание, душ и упражнения. Этот визит начнется с изучения промежуточной истории болезни субъекта, включая историю приема лекарств, чтобы убедиться, что он / она не использовал какие-либо местные средства для лечения АД на руках в течение 7 дней или пероральные средства для лечения АД в течение 28 дней после этого визита. Для субъектов, у которых назальный посев S. aureus (+) во время скринингового визита, будет проведен повторный назальный посев. Затем для всех субъектов будет проведен целенаправленный физический осмотр двусторонних рук субъекта, чтобы убедиться в отсутствии признаков трещин, разрывов или инфекций кожи на руках. Далее мы предварительно обработаем обе руки режимом мытья жидким антибактериальным мылом Dial с последующим протиранием руки стерильной марлей, смоченной 70%, затем 80% спиртом. После того, как спирт высохнет, координатор исследования нанесет тонкий слой индивидуального крема AMT на каждую руку субъекта руками в перчатках. Через пять минут после нанесения крема проводят количественное промывание экзематозной кожи одной локтевой ямки, а также непораженного участка кожи на той же руке. Для каждой промывки стерильный цилиндр из нержавеющей стали площадью приблизительно 3,5 см2 будет плотно прижат к поверхности кожи, и в цилиндр осторожно закапывают 2,5 мл стерильной жидкости для смыва (SSFN). Затем кожу массируют в течение 60 секунд стерильной резиновой насадкой. SSFN аспирируют пипеткой и переносят в стерильную пробирку. Весь этот процесс повторяется второй раз на том же месте, и жидкость объединяется. Собранная жидкость будет проанализирована в лаборатории с помощью методов подсчета колоний, чтобы определить количество жизнеспособных колоний бактерий на поверхности кожи. Затем будет взят мазок кожи как с пораженной, так и с неповрежденной кожей. На этом лечебный визит завершится. Мы ожидаем, что этот визит займет около 30 минут.

Последующие посещения Во время последующих посещений каждый субъект вернется в клинику для количественного промывания пораженной и здоровой кожи и взятия мазка с поврежденной и здоровой кожи. 10 зарегистрированных субъектов будут разделены на две группы, и каждая группа вернется для последующего наблюдения в разные моменты времени. Первые пять пациентов, которые будут зарегистрированы, будут отнесены к первой группе, которая вернется для последующего наблюдения в следующие моменты времени: 1, 4, 8 и 24 часа после трансплантации. Следующие пять пациентов, которые будут зарегистрированы, будут отнесены ко второй группе и вернутся для последующего наблюдения в следующие моменты времени: 1, 2, 4 и 7 дней после трансплантации. Количественная промывка в последний момент времени завершает исследование для этого участника. Каждое последующее посещение занимает около 20 минут.

Средняя выживаемость трансплантированных видов стафилококка как на пораженной, так и на здоровой коже будет нанесена на график для каждой временной точки. Из этих данных мы сможем рассчитать скорость угасания бактерий после пересадки, что даст нам период полураспада бактерий.

Эксперимент 2: Чтобы установить устойчивую численность аутологичного крема для трансплантации микробиома, необходимого для достижения плотности трансплантированных бактерий, аналогичной средней концентрации микробов на нормальной коже, примерно 10 5 / см2.

Эксперимент 2 будет состоять из 4 посещений офиса (скрининг, посев, лечение и последующее наблюдение), а также одного телефонного звонка для передачи информации о соответствии требованиям. Все визиты в офис будут происходить в дерматологической клинике UCSD. Субъекты, участвующие как в Эксперименте 1, так и в Эксперименте 2, должны выждать не менее периода времени, эквивалентного 10 периодам полураспада крема АМТ, прежде чем приступить к исследовательским процедурам Эксперимента 2. Скрининг, телефонный звонок и посещение культур для Эксперимента 3 то же, что и для эксперимента 1. Визит для лечения и последующие визиты немного отличаются от визитов в эксперименте 1 и будут описаны ниже с подчеркнутыми изменениями.

Визит для лечения (день 28 +/- 7) Подходящие субъекты со скрининговыми культурами + S. aureus будут включены в исследование, и им будет предложено вернуться в клинику примерно через 28 дней после их скринингового визита для лечебного визита. Этот 3-недельный период ожидания между визитами для посева и лечения позволит персоналу лаборатории вырастить и подготовить эндогенные бактерии, продуцирующие AMP, для смешивания с Cetaphil для применения во время визита для лечения. Чтобы максимально имитировать сценарии реальной жизни, субъекту будет разрешено продолжать свою обычную деятельность во время этого исследования, включая купание, душ и упражнения. Этот визит начнется с изучения промежуточной истории болезни субъекта, включая историю приема лекарств, чтобы убедиться, что он / она не использовал какие-либо местные средства для лечения АД на руках в течение 7 дней или пероральные средства для лечения АД в течение 28 дней после этого визита. Для субъектов, у которых назальный посев S. aureus (+) во время скринингового визита, будет проведен повторный назальный посев. Затем для всех субъектов будет проведен целенаправленный физический осмотр двусторонних рук субъекта, чтобы убедиться в отсутствии признаков трещин, разрывов или инфекций кожи на руках. Затем мы предварительно обработаем одну руку режимом мытья жидким антибактериальным мылом Dial с последующим протиранием руки 70%, а затем 80% спиртом с использованием стерильной марли. После того, как спирт высохнет, координатор исследования нанесет тонкий слой индивидуального крема АМТ на одну из рук субъекта руками в перчатках. Через пять минут будет проведено количественное промывание экзематозной кожи локтевых ямок руки, обработанной кремом АМТ, а также участка кожи без повреждений на этой же руке. Для каждой промывки стерильный цилиндр из нержавеющей стали площадью приблизительно 3,5 см2 будет плотно прижат к поверхности кожи, и в цилиндр осторожно закапывают 2,5 мл стерильной жидкости для смыва (SSFN). Затем кожу массируют в течение 60 секунд стерильной резиновой насадкой. SSFN аспирируют пипеткой и переносят в стерильную пробирку. Весь этот процесс повторяется во второй раз, и жидкость объединяется. Собранная жидкость будет проанализирована в лаборатории с помощью ПЦР, чтобы определить, сколько и какой тип бактерий присутствует. Также будет выполнен мазок кожи с пораженной и здоровой кожей. Затем субъектам будут выданы одноразовые аликвоты их собственного крема AMT и перчатки, чтобы взять их с собой домой. Им будет дано указание нанести одну из аликвот на ту же руку, на которую она наносилась во время лечебного визита, с интервалом дозирования, определяемым на основе периода полувыведения, рассчитанного по результатам Эксперимента 1, всего для 6 доз (схема дозирования прогнозируется достижение устойчивого состояния). Они будут проинструктированы мыть руки и надевать перчатки перед каждым нанесением крема. На этом лечебный визит завершится. Мы ожидаем, что этот визит займет около 30 минут.

Последующий визит (происходит во время 7-го применения крема АМТ) Во время последующего визита субъекты вернутся в клинику для количественного мытья пораженной и неповрежденной кожи, чтобы определить содержание S y aureus во время этого визита. Также будет выполнен мазок кожи с пораженной и здоровой кожей. Этот визит завершит Эксперимент 2. Он продлится примерно 15 минут.

Дополнительные соображения: в этом эксперименте наша цель — установить стационарную численность АМТ, используя бактериальную плотность, аналогичную средней концентрации микробов на нормальной коже, примерно 105/см2. Используя результаты эксперимента 1, мы можем оценить период полураспада бактерий на поверхности кожи субъекта. Возможно, что период полураспада крема АМТ, определенный в эксперименте 1, будет коротким, возможно, даже всего несколько часов. Если крем АМТ показывает быструю потерю трансплантированных бактерий, что нецелесообразно дальнейшее увеличение частоты применения АМТ (предполагается, что она больше, чем TID), и доза АМТ практически не может быть увеличена со стандартных 108 бактерий/ г, применяемых в дозе 10 г/м2, субъект будет применять максимальную практическую дозу (109 бактерий/г при 40 г/м2) с максимальной практической частотой (TID), и мы будем делать это в течение одной недели, чтобы определить, сколько бактерий присутствует после этого подхода к лечению. Хотя это маловероятно по данным Costello et al. в 2009 г. мы хотим иметь этот резервный план, чтобы позволить исследованию двигаться вперед. Хотя эти результаты не будут представлять устойчивое состояние, этих данных будет достаточно для планирования последующего клинического испытания или для вывода о том, что долгосрочный подход к применению не стоит дальнейшего анализа.

Эксперимент 3: Измерение устойчивой численности S. aureus на коже участника.

Эксперимент 3 будет состоять из 6 визитов в офис (скрининг, посев, лечение и 3 визита для последующего наблюдения), а также одного телефонного звонка для передачи информации о соответствии требованиям. Все визиты в офис будут происходить в дерматологической клинике UCSD. Субъекты, участвовавшие в эксперименте 2, должны выждать не менее периода времени, эквивалентного 10 периодам полураспада крема АМТ, прежде чем приступить к процедурам исследования в эксперименте 3. Скрининг, телефонный звонок и посещение культур для эксперимента 3 такие же, как и в эксперименте 3. для эксперимента 1. Визит для лечения и последующие визиты немного отличаются от визитов в эксперименте 1 и будут описаны ниже с подчеркнутыми изменениями.

Визит для лечения (день 28 +/- 7) Подходящие субъекты со скрининговыми культурами + S. aureus будут включены в исследование, и им будет предложено вернуться в клинику примерно через 28 дней после их скринингового визита. Этот 3-недельный период ожидания позволит персоналу лаборатории вырастить и подготовить эндогенные бактерии, продуцирующие AMP, для смешивания с Cetaphil для применения во время лечебного визита. Бактерии, продуцирующие АМФ, также будут подвергаться скринингу, чтобы убедиться, что они не являются патогенными. Чтобы максимально имитировать сценарии реальной жизни, субъекту будет разрешено продолжать свою обычную деятельность во время этого исследования, включая купание, душ и упражнения. Этот визит начнется с изучения промежуточной истории болезни субъекта, включая историю приема лекарств, чтобы убедиться, что он / она не использовал какие-либо местные средства для лечения АД на руках в течение 7 дней или пероральные средства для лечения АД в течение 28 дней после этого визита. Для субъектов, у которых назальный посев S. aureus (+) во время скринингового визита, будет проведен повторный назальный посев. Затем для всех субъектов будет проведен целенаправленный физический осмотр двусторонних рук субъекта, чтобы убедиться в отсутствии признаков трещин, разрывов или инфекций кожи на руках. Локализованная шкала SCORAD и шкала тяжести экземы будет заполнена для каждой локтевой ямки. Затем будет использоваться измеритель TEWL для измерения TEWL каждой локтевой ямки. Далее мы предварительно обработаем обе руки режимом мытья жидким антибактериальным мылом Dial с последующим протиранием рук 70%, затем 80% спиртом. После того, как спирт высохнет, координатор исследования нанесет тонкий слой индивидуального крема AMT субъекта на одну руку руками в перчатках, а на другую руку - только лосьон Cetaphil. Два крема будут помечены как «Правильный» или «Левый», чтобы исследование можно было проводить двойным слепым методом (как субъект, так и клинический исследователь/координатор не будут знать, какая рука получала какое лечение). Через пять минут будет проведено количественное промывание экзематозной кожи обеих локтевых ямок, а также участка непораженной кожи обеих рук. Для каждой промывки стерильный цилиндр из нержавеющей стали площадью приблизительно 3,5 см2 будет плотно прижат к поверхности кожи, и в цилиндр осторожно закапывают 2,5 мл стерильной жидкости для смыва (SSFN). Затем кожу массируют в течение 60 секунд стерильной резиновой насадкой. SSFN аспирируют пипеткой и переносят в стерильную пробирку. Весь этот процесс повторяется во второй раз, и жидкость объединяется. Собранная жидкость будет проанализирована в лаборатории с помощью методов подсчета колоний, чтобы определить количество жизнеспособных бактерий на коже в этот момент времени. Также будут взяты мазки кожи с пораженной и неповрежденной кожи обеих рук, чтобы определить, какой тип и обилие каждой бактерии присутствует на коже. Затем субъект получит одноразовые аликвоты своего индивидуального крема AMT и лосьона Cetaphil, а также перчатки и будет проинструктирован нанести одну аликвоту на назначенную ему руку с интервалом дозирования, определенным в Эксперименте 1 (но не превышать TID). Все аликвоты будут помечены как «Левая» или «Правая» в зависимости от того, на какую руку их следует наносить, в зависимости от того, является ли аликвота контрольным лосьоном Cetaphil или кремом AMT. Поскольку два продукта идентичны по внешнему виду и консистенции, испытуемые не должны различать два продукта. Все субъекты будут проинструктированы мыть руки и надевать чистые перчатки перед каждым применением аликвоты. На этом лечебный визит завершится. Мы ожидаем, что этот визит займет около 60 минут.

Последующие посещения 1, 2 и 3 (дни 33 +/- 2 дня, 38 +/- 2 дня и 43 +/- 2 дня соответственно) Субъекты будут возвращаться в клинику примерно каждые 5 дней после визита для лечения для повторный визит. Во время этого визита будут зарегистрированы любые побочные реакции на крем АМТ. Затем будет использоваться локализованная шкала SCORAD и шкала тяжести экземы для оценки тяжести экземы субъекта в каждой из его локтевых ямок. Также будет измеряться TEWL каждой локтевой ямки. Затем будет проведена количественная промывка на каждой руке в области локтевой ямки, а также на участке кожи без повреждений на каждой руке. Затем будет выполнен мазок пораженной и здоровой кожи с обеих рук. Субъект получит свежеприготовленные одноразовые аликвоты крема AMT и лосьона Cetaphil, помеченные как «Левая» или «Правая», в зависимости от того, на какую руку следует наносить аликвоту (только для последующих посещений 1 и 2). Эти мероприятия завершат учебную поездку и все процедуры, связанные с исследованием. Каждое последующее посещение должно длиться примерно 45 минут.