Evaluering af de kinetiske egenskaber af en autolog mikrobiomtransplantation hos voksne patienter med atopisk dermatitis

Denne undersøgelse vil blive udført som tre eksperimenter i overensstemmelse med de tre formål med undersøgelsen. Deltagerne vil give samtykke til alle tre undersøgelseseksperimenter separat, da hvert forsøg vil have en anden samtykkeformular. Mens enkelte forsøgspersoner kan deltage i alle tre delstudier, hvis de er berettigede til alle tre, er der ikke krav om, at forsøgspersoner skal deltage i mere end et af delstudierne. I alt 10 forsøgspersoner vil blive tilmeldt forsøg 1 og 2, og ca. 14 forsøgspersoner vil blive tilmeldt forsøg 3. I betragtning af, at kun ca. 75-80 % af AD-patienter er koloniseret af S. aureus, forventer vi at screene tættere på 18 -20 emner for at opfylde inklusionskriterierne. Forsøgspersoner, der trækker sig fra undersøgelsen, vil blive erstattet.

Forsøg 1: Bestemmelse af stabiliteten af ​​transplanterede bakterier på hudoverfladen over tid

Denne første del af undersøgelsen (eksperiment 1) vil bestå af 7 kontorbesøg (screening, kultur, behandling og 3 opfølgningsbesøg) og et telefonopkald for at videregive berettigelsesoplysninger. Alle kontorbesøg vil finde sted på UCSD Dermatologiske Klinik. De nøjagtige procedurer for hvert besøg diskuteres nedenfor.

Screeningsbesøg (besøg 1, dag 0) Inden undersøgelsesprocedurer påbegyndes, vil forsøgspersonerne først blive bedt om at gennemgå og underskrive den informerede samtykkeformular. Efter at have indhentet informeret samtykke, vil inklusions-/udelukkelseskriterierne blive gennemgået. En kort sygehistorie og fysisk undersøgelse vil blive udført for at hjælpe med at vurdere, om emnet opfylder de krævede kriterier for undersøgelsen. Kvindelige forsøgspersoner i den fødedygtige alder vil tage en uringraviditetstest på vores kontor for at sikre, at de ikke er gravide. Patienter, der opfylder inklusions- og eksklusionskriterierne, vil derefter få foretaget en hudpodning på den læsionale atopiske dermatitis-hud i en af ​​deres antecubitale fossae (Kong et al., 2012 viste, at AD-individer koloniseret af S. aureus har residente S. aureus-bakterier i hele deres hudoverflade, derfor forventer vi, at én podning er tilstrækkelig), samt en nasal kulturpodning til at påvise tilstedeværelsen af ​​S. aureus i næsen. Dette afslutter screeningsbesøget. Den samlede tid for dette besøg vil være cirka 30 minutter.

Forsøgspersoner, der ikke opfylder inklusions-/udelukkelseskriterierne på grund af anvendelsen eller brugen af ​​forbudte medicin inden for den angivne tidsramme, vil blive betragtet som screen-fejl. Hudpodninger af disse patienter vil ikke blive udført. Disse forsøgspersoner kan vende tilbage til endnu et screeningsbesøg efter at have gennemført den nødvendige udvaskningsperiode (7 dage for topisk medicin, 28 dage for oral medicin), hvis de er interesserede i at gøre det.

Telefon (Dag 3 +/- 1) Forsøgspersoner vil få besked via telefon inden for 3 hverdage, om deres hud og næsepodninger voksede S. aureus eller ej. Forsøgspersoner med en hudkultur, der er positiv for methicillin-sensitive S. aureus (MSSA), vil blive optaget i undersøgelsen. Der vil være tidsplan for et kulturbesøg for disse deltagere. Forsøgspersoner vil blive udelukket, hvis de har nogen af ​​følgende: en negativ S. aureus hudkultur eller en hudkultur positiv for methicillin-resistent S. aureus (MRSA). Den samlede telefonsamtale bør tage cirka 5 minutter.

Kulturbesøg (dag 7 +/- 4) Berettigede forsøgspersoner vender tilbage til et kulturbesøg inden for cirka en uge efter deres screeningsbesøg. Under dette besøg vil vi tage fire (4) dyrkningsprøver fra forsøgspersonens ikke-læsionelle (ingen AD) hud på deres overarme. Disse kulturprøver vil blive placeret i tryptisk sojabouillon (TSB), indtil de behandles i laboratoriet, hvor de vil blive brugt til at dyrke forsøgspersonens antimikrobielle peptid-producerende Staph-arter til brug for den autologe mikrobiom-transplantation. Forsøgspersonerne vil også modtage et stykke Dove fugtgivende sæbe, som de vil blive instrueret i at bruge, når de tager brusebad, indtil efter opfølgningsbesøget er afsluttet. Forsøgspersoner med en positiv S. aureus nasal kultur ved screeningsbesøget (besøg 1) vil også modtage en tube med mupirocinsalve. De vil blive instrueret om påføring af mupirocin på de forreste næser bilateralt to gange dagligt, startende 5 dage før deres behandlingsbesøg. Det samlede besøg vil tage cirka 10 minutter.

Behandlingsbesøg (dag 28 +/- 7) Kvalificerede forsøgspersoner med + S. aureus-screeningskulturer vil blive tilmeldt undersøgelsen og instrueret i at vende tilbage til klinikken ca. 28 dage efter deres screeningsbesøg. Denne 3-ugers venteperiode vil give laboratoriepersonale mulighed for at dyrke og forberede forsøgspersonens endogene AMP-producerende bakterier til at blive blandet med Cetaphil til påføring ved behandlingsbesøget. For at simulere virkelige scenarier så meget som muligt, vil forsøgspersonen få lov til at fortsætte deres sædvanlige aktiviteter under denne undersøgelse, herunder badning, brusebad og motion. Dette besøg vil begynde med at gennemgå forsøgspersonens midlertidige sygehistorie, herunder medicinhistorie for at sikre, at han/hun ikke brugte nogen topiske AD-behandlinger på deres arme inden for 7 dage eller orale AD-behandlinger inden for 28 dage efter dette besøg. For forsøgspersoner, der havde en S. aureus (+) nasal kultur ved screeningsbesøg, vil der blive udført en gentagen nasal kultur. For alle forsøgspersoner vil der derefter blive udført en fokuseret fysisk undersøgelse af forsøgspersonens bilaterale arme for at sikre, at der ikke er tegn på revner, brud eller infektioner i huden på armene. Dernæst vil vi forbehandle begge arme med en kur med vask med Dial flydende antibakteriel sæbe, efterfulgt af at tørre armen af ​​med steril gaze gennemvædet med 70 %, derefter 80 % alkohol. Når alkoholen er tørret, påføres et tyndt lag af forsøgspersonens individualiserede AMT-creme på hver arm af en studiekoordinators behandskede hænder. Fem minutter efter påføring af cremen udføres en kvantitativ vask på eksemøs hud på en antecubital fossae samt på et ikke-læsionelt hudområde på samme arm. For hver vask vil en steril cylinder af rustfrit stål med et omtrentligt areal på 3,5 cm2 blive holdt fast på hudoverfladen, og 2,5 ml af en steril stripningsvæske (SSFN) vil blive forsigtigt dryppet ind i cylinderen. Huden vil derefter blive masseret i 60 sekunder ved hjælp af en steril gummipolitimand. SSFN vil blive aspireret med en pipette og overført til et sterilt reagensglas. Hele denne proces vil blive gentaget en anden gang på samme sted, og væsken samles sammen. Den samlede væske vil blive analyseret i laboratoriet via kolonitællingsmetoder for at bestemme antallet af levedygtige bakteriekolonier på hudoverfladen. Der vil derefter blive taget en hudpodning af både læsionel og ikke-læsionel hud. Dette afslutter behandlingsbesøget. Vi forventer, at dette besøg tager cirka 30 minutter.

Opfølgningsbesøg Under opfølgningsbesøg vil hver forsøgsperson vende tilbage til klinikken for en kvantitativ vask af deres læsionale og ikke-læsionale hud og en hudpodning af deres læsionale og ikke-læsionale hud. De 10 tilmeldte forsøgspersoner vil blive opdelt i to grupper, og hver gruppe vender tilbage til opfølgning på forskellige tidspunkter. De første fem patienter, der tilmeldes, vil blive tildelt den første gruppe, som vil vende tilbage til opfølgning på følgende tidspunkter: 1, 4, 8 og 24 timer efter transplantationen. De næste fem patienter, der skal tilmeldes, vil blive tildelt den anden gruppe og vil vende tilbage til opfølgning på disse tidspunkter: 1, 2, 4 og 7 dage efter transplantationen. Den kvantitative vask på det sidste opfølgningstidspunkt afslutter undersøgelsen for den pågældende deltager. Hvert opfølgningsbesøg vil tage cirka 20 minutter.

Den gennemsnitlige overlevelse af den transplanterede Staph-art på både læsional og ikke-læsionel hud vil blive plottet for hvert tidspunkt. Ud fra disse data vil vi være i stand til at beregne hastigheden af ​​tilbagegang af bakterierne efter at være blevet transplanteret, hvilket vil give os bakteriernes halveringstid.

Forsøg 2: For at fastslå den steady-state overflod af autolog mikrobiom transplantationscreme, der er nødvendig for at opnå en tæthed af transplanterede bakterier svarende til den gennemsnitlige koncentration af mikrober på normal hud, ca. 105/cm2

Eksperiment 2 vil bestå af 4 kontorbesøg (screening, kultur, behandling og opfølgning) samt et telefonopkald for at videregive berettigelsesoplysninger. Alle kontorbesøg vil finde sted på UCSD Dermatologiske Klinik. Forsøgspersoner, der deltager i både eksperiment 1 og 2, skal vente mindst et tidsrum svarende til 10 halveringstider af AMT-cremen, før de påbegynder undersøgelsesprocedurerne i eksperiment 2. Screening, telefonopkald og kulturbesøg for eksperiment 3 er det samme som for eksperiment 1. Behandlingsbesøg og opfølgningsbesøg afviger lidt fra dem i eksperiment 1 og vil blive beskrevet nedenfor med ændringer understreget.

Behandlingsbesøg (dag 28 +/- 7) Kvalificerede forsøgspersoner med + S. aureus-screeningskulturer vil blive tilmeldt undersøgelsen og instrueret i at vende tilbage til klinikken ca. 28 dage efter deres screeningsbesøg til behandlingsbesøget. Denne 3-ugers venteperiode mellem dyrkningen og behandlingsbesøgene vil give laboratoriepersonale mulighed for at dyrke og forberede forsøgspersonens endogene AMP-producerende bakterier til at blive blandet med Cetaphil til påføring ved behandlingsbesøget. For at simulere virkelige scenarier så meget som muligt, vil forsøgspersonen få lov til at fortsætte deres sædvanlige aktiviteter under denne undersøgelse, herunder badning, brusebad og motion. Dette besøg vil begynde med at gennemgå forsøgspersonens midlertidige sygehistorie, herunder medicinhistorie for at sikre, at han/hun ikke brugte nogen topiske AD-behandlinger på deres arme inden for 7 dage eller orale AD-behandlinger inden for 28 dage efter dette besøg. For forsøgspersoner, der havde en S. aureus (+) nasal kultur ved screeningsbesøg, vil der blive udført en gentagen nasal kultur. For alle forsøgspersoner vil der derefter blive udført en fokuseret fysisk undersøgelse af forsøgspersonens bilaterale arme for at sikre, at der ikke er tegn på revner, brud eller infektioner i huden på armene. Dernæst vil vi forbehandle den ene arm med en vaskekur med Dial flydende antibakteriel sæbe, efterfulgt af at tørre armen af ​​med 70% efterfulgt af 80% alkohol ved hjælp af steril gaze. Når alkoholen er tørret, vil et tyndt lag af forsøgspersonens individualiserede AMT-creme derefter blive påført på en af ​​forsøgspersonens arme af en studiekoordinators behandskede hænder. Fem minutter senere vil der blive udført en kvantitativ vask på eksemøs hud på armens antecubitale fossae behandlet med AMT-cremen, samt på et område med ikke-læsionel hud på samme arm. For hver vask vil en steril cylinder af rustfrit stål med et omtrentligt areal på 3,5 cm2 blive holdt fast på hudoverfladen, og 2,5 ml af en steril stripningsvæske (SSFN) vil blive forsigtigt dryppet ind i cylinderen. Huden vil derefter blive masseret i 60 sekunder ved hjælp af en steril gummipolitimand. SSFN vil blive aspireret med en pipette og overført til et sterilt reagensglas. Hele denne proces vil blive gentaget en anden gang, og væsken samles. Den samlede væske vil blive analyseret i laboratoriet via PCR for at bestemme, hvor mange og hvilken type bakterier der er til stede. En hudpodning af læsionel og ikke-læsionel hud vil også blive afsluttet. Forsøgspersonerne vil derefter få engangsprøver af deres egen AMT-creme og handsker med hjem. De vil blive instrueret i at påføre en af ​​alikvoterne på den samme arm, som den blev påført under behandlingsbesøget med et doseringsinterval, der bestemmes baseret på halveringstiden beregnet ud fra resultaterne af eksperiment 1 for i alt 6 doser (dosisskemaet) forudsagt at opnå steady state). De vil blive instrueret i at vaske deres hænder og tage handsker på før hver påføring af cremen. Dette afslutter behandlingsbesøget. Vi forventer, at dette besøg tager cirka 30 minutter.

Opfølgningsbesøg (forekommer på tidspunktet for den 7. påføring af AMT-cremen) Under opfølgningsbesøget vil forsøgspersonerne vende tilbage til klinikken for en kvantitativ vask af deres læsionale og ikke-læsionelle hud for at bestemme mængden af ​​S aureus ved dette besøg. En hudpodning af læsional og ikke-læsionel hud vil også blive udført. Dette besøg afslutter eksperiment 2. Det varer cirka 15 minutter.

Yderligere overvejelser: I dette eksperiment er vores mål at etablere steady-state overflod af AMT ved hjælp af en bakterietæthed svarende til den gennemsnitlige koncentration af mikrober på normal hud, ca. 105/cm2. Ved hjælp af resultaterne af eksperiment 1 kan vi estimere halveringstiden for bakterierne på emnets hudoverflade. Det er muligt, at halveringstiden for AMT-creme som bestemt i forsøg 1 vil være kort, muligvis endda så kort som nogle få timer. Hvis AMT-cremen viser et hurtigt tab af transplanterede bakterier, således at det er upraktisk yderligere at øge frekvensen af ​​påføring af AMT (antaget som større end TID), og dosis af AMT praktisk talt ikke kan øges fra standard 108 bakterier/ gm, påført ved 10 gm/m2, vil forsøgspersonen anvende den maksimale praktiske dosis (109 bakterier/gm ved 40gm/m2) ved den maksimale praktiske frekvens (TID), og vi vil gøre dette i en uge for at bestemme, hvor mange bakterier der er tilstede efter denne behandlingstilgang. Selvom dette ikke er sandsynligt ud fra data fra Costello et al. i 2009 ønsker vi at have denne back-up plan på plads, så undersøgelsen kan komme videre. Selvom disse resultater ikke repræsenterer en steady-state, ville dataene være tilstrækkelige til at muliggøre design af et efterfølgende klinisk forsøg eller til at konkludere, at en langsigtet anvendelsestilgang ikke er værd at foretage yderligere analyser.

Eksperiment 3: At måle steady-state forekomsten af ​​S. aureus på deltagerens hud

Eksperiment 3 vil bestå af 6 kontorbesøg (screening, kultur, behandling og 3 opfølgningsbesøg) samt et telefonopkald for at videregive berettigelsesoplysninger. Alle kontorbesøg vil finde sted på UCSD Dermatologiske Klinik. Forsøgspersoner, der har deltaget i forsøg 2, skal vente mindst et tidsrum svarende til 10 halveringstider af AMT-cremen, før de påbegynder undersøgelsesprocedurerne i forsøg 3. Screening, telefonopkald og kulturbesøg for forsøg 3 er de samme som til forsøg 1. Behandlingsbesøg og opfølgningsbesøg afviger lidt fra dem i eksperiment 1 og vil blive beskrevet nedenfor med ændringer understreget.

Behandlingsbesøg (dag 28 +/- 7) Kvalificerede forsøgspersoner med + S. aureus-screeningskulturer vil blive tilmeldt undersøgelsen og instrueret i at vende tilbage til klinikken ca. 28 dage efter deres screeningsbesøg. Denne 3-ugers venteperiode vil give laboratoriepersonale mulighed for at dyrke og forberede forsøgspersonens endogene AMP-producerende bakterier til at blive blandet med Cetaphil til påføring ved behandlingsbesøget. AMP-producerende bakterier vil også blive screenet for at sikre, at de ikke er sygdomsfremkaldende. For at simulere virkelige scenarier så meget som muligt, vil forsøgspersonen få lov til at fortsætte deres sædvanlige aktiviteter under denne undersøgelse, herunder badning, brusebad og motion. Dette besøg vil begynde med at gennemgå forsøgspersonens midlertidige sygehistorie, herunder medicinhistorie for at sikre, at han/hun ikke brugte nogen topiske AD-behandlinger på deres arme inden for 7 dage eller orale AD-behandlinger inden for 28 dage efter dette besøg. For forsøgspersoner, der havde en S. aureus (+) nasal kultur ved screeningsbesøg, vil der blive udført en gentagen nasal kultur. For alle forsøgspersoner vil der derefter blive udført en fokuseret fysisk undersøgelse af forsøgspersonens bilaterale arme for at sikre, at der ikke er tegn på revner, brud eller infektioner i huden på armene. Den lokaliserede SCORAD- og eksemsværhedsskala vil blive afsluttet på hver antecubital fossa. En TEWL-måler vil derefter blive brugt til at måle TEWL for hver antecubital fossa. Dernæst vil vi forbehandle begge arme med en kur med vask med Dial flydende antibakteriel sæbe, efterfulgt af at tørre armene af med 70 %, derefter 80 % alkohol. Når alkoholen er tørret, vil et tyndt lag af forsøgspersonens individualiserede AMT-creme derefter blive påført på den ene arm af en studiekoordinators behandskede hænder og Cetaphil-lotion alene på den anden arm. De to cremer vil blive mærket som enten 'Højre' eller 'Venstre' for at tillade undersøgelsen at blive udført på en dobbeltblind måde (både forsøgspersonen og den kliniske investigator/koordinator vil blive blindet med hensyn til, hvilken arm der modtog hvilken behandling). Fem minutter senere vil der blive udført en kvantitativ vask på eksemøs hud på begge antecubitale fossae samt på et område med ikke-læsionel hud på begge arme. For hver vask vil en steril cylinder af rustfrit stål med et omtrentligt areal på 3,5 cm2 blive holdt fast på hudoverfladen, og 2,5 ml af en steril stripningsvæske (SSFN) vil blive forsigtigt dryppet ind i cylinderen. Huden vil derefter blive masseret i 60 sekunder ved hjælp af en steril gummipolitimand. SSFN vil blive aspireret med en pipette og overført til et sterilt reagensglas. Hele denne proces vil blive gentaget en anden gang, og væsken samles. Den samlede væske vil blive analyseret i laboratoriet via kolonioptællingsmetoder for at bestemme mængden af ​​levedygtige bakterier på huden på dette tidspunkt. Hudpodninger af læsional og ikke-læsionel hud på begge arme vil også blive taget for at bestemme, hvilken type og mængden af ​​hver bakterie, der er til stede på huden. Forsøgspersonen vil derefter modtage engangsalikvoter af sin individualiserede AMT-creme og Cetaphil-lotion alene samt handsker og instrueret i at påføre en alikvot på dens tildelte arm med det doseringsinterval, der er bestemt i eksperiment 1 (men ikke at overskride TID). Alle aliquoter vil blive mærket med enten 'Venstre' eller 'Højre' afhængigt af hvilken arm de skal påføres på baseret på, om aliquoten er af kontrol Cetaphil-lotion eller AMT-cremen. Da de to produkter er identiske i udseende og konsistens, bør forsøgspersoner ikke være i stand til at skelne mellem de to produkter. Alle forsøgspersoner vil blive instrueret i at vaske deres hænder og tage rene handsker på før hver alikvot påføring. Dette afslutter behandlingsbesøget. Vi forventer, at dette besøg tager cirka 60 minutter.

Opfølgningsbesøg 1, 2 og 3 (henholdsvis dag 33 +/- 2 dage, 38 +/- 2 dage og 43 +/- 2 dage) Forsøgspersonerne vender tilbage til klinikken ca. hver 5. dag efter behandlingsbesøget for en opfølgende besøg. Under dette besøg vil eventuelle bivirkninger af AMT-cremen blive registreret. Dernæst vil den lokaliserede SCORAD og Eczema Severity Scale blive brugt til at vurdere sværhedsgraden af ​​forsøgspersonens eksem på hver af hans antecubitale fossae. TEWL for hver antecubital fossa vil også blive målt. Dernæst vil der blive udført en kvantitativ vask på hver arm i området af den antecubitale fossa samt på et område med ikke-læsionel hud på hver arm. En hudpodning af den læsionale og ikke-læsionale hud fra begge arme vil derefter blive udført. Forsøgspersonen vil modtage frisklavede engangsprøver af både AMT-cremen og Cetaphil-lotionen mærket med enten 'Venstre' eller 'Højre' afhængigt af hvilken arm alikvoten skal påføres (kun til opfølgningsbesøg 1 og 2). Disse aktiviteter afslutter studiebesøget og alle undersøgelsesrelaterede procedurer. Hvert opfølgningsbesøg bør tage cirka 45 minutter.