Évaluation des propriétés cinétiques d'une greffe de microbiome autologue chez des patients adultes atteints de dermatite atopique

Cette étude sera menée en trois expériences conformément aux trois objectifs de l'étude. Les participants consentiront aux trois expériences de l'étude séparément, car chaque expérience aura un formulaire de consentement différent. Bien que les sujets individuels puissent participer aux trois sous-études s'ils sont éligibles pour les trois, il n'y a aucune obligation pour les sujets de participer à plus d'une des sous-études. Un total de 10 sujets seront inscrits dans les expériences 1 et 2, et environ 14 sujets seront inscrits dans l'expérience 3. Étant donné que seulement environ 75 à 80 % des patients atteints de la maladie d'Alzheimer sont colonisés par S. aureus, nous nous attendons à un dépistage plus proche de 18 -20 sujets pour remplir les critères d'inclusion. Les sujets qui se retirent de l'étude seront remplacés.

Expérience 1 : Détermination de la stabilité des bactéries transplantées à la surface de la peau dans le temps

Cette première partie de l'étude (Expérience 1) consistera en 7 visites de bureau (dépistage, culture, traitement et 3 visites de suivi) et un appel téléphonique pour transmettre les informations d'éligibilité. Toutes les visites au bureau auront lieu à la clinique de dermatologie de l'UCSD. Les procédures exactes pour chaque visite sont décrites ci-dessous.

Visite de dépistage (visite 1, jour 0) Avant de commencer toute procédure d'étude, les sujets seront d'abord invités à examiner et à signer le formulaire de consentement éclairé. Après obtention du consentement éclairé, les critères d'inclusion/exclusion seront revus. Un bref historique médical et un examen physique seront effectués pour aider à évaluer si le sujet répond aux critères requis pour l'étude. Les femmes en âge de procréer passeront un test de grossesse urinaire dans notre cabinet pour s'assurer qu'elles ne sont pas enceintes. Les patients qui répondent aux critères d'inclusion et d'exclusion auront ensuite un prélèvement cutané effectué sur la peau de la dermatite atopique lésionnelle dans l'une de leurs fosses antécubitales (Kong et al, 2012 ont montré que les sujets AD colonisés par S. aureus ont des bactéries résidentes S. aureus tout au long de leur vie). surface de la peau, nous nous attendons donc à ce qu'un écouvillon soit suffisant), ainsi qu'un écouvillon de culture nasale pour détecter la présence de S. aureus dans les narines. Ceci conclura la visite de dépistage. La durée totale de cette visite sera d'environ 30 minutes.

Les sujets qui ne répondent pas aux critères d'inclusion/exclusion en raison de l'application ou de l'utilisation de médicaments interdits dans les délais indiqués seront considérés comme des échecs de dépistage. Les prélèvements cutanés de ces patients ne seront pas effectués. Ces sujets peuvent revenir pour une autre visite de dépistage après avoir terminé la période de sevrage nécessaire (7 jours pour les médicaments topiques, 28 jours pour les médicaments oraux) s'ils le souhaitent.

Téléphone (Jour 3 +/- 1) Les sujets seront informés par téléphone dans les 3 jours ouvrables si leurs écouvillons cutanés et nasaux ont développé ou non S. aureus. Les sujets avec une culture cutanée positive pour S. aureus sensible à la méthicilline (MSSA) seront inscrits à l'étude. Un rendez-vous de visite culture sera prévu pour ces participants. Les sujets seront exclus s'ils présentent l'un des éléments suivants : une culture cutanée négative pour S. aureus ou une culture cutanée positive pour S. aureus résistant à la méthicilline (SARM). La conversation téléphonique totale devrait prendre environ 5 minutes.

Visite de culture (jour 7 +/- 4) Les sujets éligibles reviendront pour une visite de culture environ une semaine après leur visite de sélection. Au cours de cette visite, nous prélèverons quatre (4) écouvillons de culture de la peau non lésionnelle (sans AD) du sujet sur le haut de ses bras. Ces écouvillons de culture seront placés dans un bouillon de soja trypsique (TSB) jusqu'à ce qu'ils soient traités en laboratoire, où ils seront utilisés pour cultiver les espèces de staphylocoques productrices de peptides antimicrobiens du sujet à utiliser pour la greffe de microbiome autologue. Les sujets recevront également une barre de savon hydratant Dove, qu'ils seront invités à utiliser chaque fois qu'ils se doucheront jusqu'à la fin de la visite de suivi. Les sujets avec une culture nasale positive pour S. aureus lors de la visite de dépistage (visite 1) recevront également un tube de pommade à la mupirocine. Ils recevront des instructions sur l'application de mupirocine sur les narines antérieures bilatéralement deux fois par jour à partir de 5 jours avant leur visite de traitement. La visite totale prendra environ 10 minutes.

Visite de traitement (Jour 28 +/- 7) Les sujets éligibles avec des cultures de dépistage + S. aureus seront inscrits à l'étude et invités à retourner à la clinique environ 28 jours après leur visite de dépistage. Cette période d'attente de 3 semaines permettra au personnel du laboratoire de cultiver et de préparer les bactéries productrices d'AMP endogènes du sujet à mélanger avec Cetaphil pour application lors de la visite de traitement. Pour simuler autant que possible des scénarios réels, le sujet sera autorisé à poursuivre ses activités habituelles pendant cette étude, y compris le bain, la douche et l'exercice. Cette visite commencera par l'examen des antécédents médicaux provisoires du sujet, y compris l'historique des médicaments pour s'assurer qu'il n'a pas utilisé de traitements AD topiques sur ses bras dans les 7 jours ou de traitements AD oraux dans les 28 jours suivant cette visite. Pour les sujets qui ont eu une culture nasale de S. aureus (+) lors de la visite de dépistage, une culture nasale répétée sera effectuée. Pour tous les sujets, un examen physique ciblé sera ensuite effectué sur les bras bilatéraux du sujet pour s'assurer qu'il n'y a aucune preuve de fissures, de ruptures ou d'infections de la peau sur les bras. Ensuite, nous prétraiterons les deux bras avec un régime de lavage avec du savon antibactérien liquide Dial, suivi d'un essuyage du bras avec de la gaze stérile imbibée d'alcool à 70%, puis à 80%. Une fois l'alcool séché, une fine couche de crème AMT individualisée du sujet sera ensuite appliquée sur chaque bras par les mains gantées d'un coordinateur de l'étude. Cinq minutes après l'application de la crème, un lavage quantitatif sera effectué sur la peau eczémateuse d'une fosse antécubitale, ainsi que sur une zone cutanée non lésionnelle du même bras. Pour chaque lavage, un cylindre stérile en acier inoxydable d'une superficie approximative de 3,5 cm2 sera maintenu fermement à la surface de la peau, et 2,5 ml d'un liquide de décapage stérile (SSFN) seront soigneusement instillés dans le cylindre. La peau sera ensuite massée pendant 60 secondes à l'aide d'un policier en caoutchouc stérile. Le SSFN sera aspiré avec une pipette et transféré dans un tube à essai stérile. L'ensemble de ce processus sera répété une seconde fois au même site et le liquide sera mis en commun. Le liquide mis en commun sera analysé en laboratoire via des méthodes de comptage de colonies pour déterminer le nombre de colonies de bactéries viables à la surface de la peau. Un écouvillon cutané de la peau lésionnelle et non lésionnelle sera ensuite prélevé. Ceci conclura la visite de traitement. Nous nous attendons à ce que cette visite dure environ 30 minutes.

Visites de suivi Lors des visites de suivi, chaque sujet reviendra à la clinique pour un lavage quantitatif de sa peau lésionnelle et non lésionnelle et un prélèvement cutané de sa peau lésionnelle et non lésionnelle. Les 10 sujets inscrits seront divisés en deux groupes, et chaque groupe reviendra pour un suivi à différents moments. Les cinq premiers patients à s'inscrire seront affectés au premier groupe, qui reviendra pour un suivi aux moments suivants : 1, 4, 8 et 24 heures après la greffe. Les cinq prochains patients à inscrire seront affectés au deuxième groupe et reviendront pour un suivi à ces moments : 1, 2, 4 et 7 jours après la greffe. Le lavage quantitatif au dernier point de temps de suivi conclura l'étude pour ce participant. Chaque visite de suivi prendra environ 20 minutes.

La survie moyenne des espèces de Staph transplantées sur la peau lésionnelle et non lésionnelle sera tracée pour chaque point de temps. À partir de ces données, nous pourrons calculer le taux de déclin de la bactérie après sa transplantation, ce qui nous fournira la demi-vie de la bactérie.

Expérience 2 : Pour établir l'abondance à l'état d'équilibre de l'application de crème de greffe de microbiome autologue nécessaire pour atteindre une densité de bactéries transplantées similaire à la concentration moyenne de microbes sur une peau normale, environ 105/cm2

L'expérience 2 consistera en 4 visites de bureau (dépistage, culture, traitement et suivi), ainsi qu'un appel téléphonique pour transmettre les informations d'éligibilité. Toutes les visites au bureau auront lieu à la clinique de dermatologie de l'UCSD. Les sujets qui participent à la fois aux expériences 1 et 2 doivent attendre au moins une période de temps équivalente à 10 demi-vies de la crème AMT avant de commencer les procédures d'étude de l'expérience 2. Les visites de dépistage, d'appel téléphonique et de culture pour l'expérience 3 sont comme pour l'expérience 1. La visite de traitement et les visites de suivi diffèrent légèrement de celles de l'expérience 1 et seront décrites ci-dessous, avec les changements soulignés.

Visite de traitement (Jour 28 +/- 7) Les sujets éligibles avec des cultures de dépistage + S. aureus seront inscrits à l'étude et invités à retourner à la clinique environ 28 jours après leur visite de dépistage pour la visite de traitement. Cette période d'attente de 3 semaines entre la culture et les visites de traitement permettra au personnel du laboratoire de cultiver et de préparer les bactéries productrices d'AMP endogènes du sujet à mélanger avec Cetaphil pour application lors de la visite de traitement. Pour simuler autant que possible des scénarios réels, le sujet sera autorisé à poursuivre ses activités habituelles pendant cette étude, y compris le bain, la douche et l'exercice. Cette visite commencera par l'examen des antécédents médicaux provisoires du sujet, y compris l'historique des médicaments pour s'assurer qu'il n'a pas utilisé de traitements AD topiques sur ses bras dans les 7 jours ou de traitements AD oraux dans les 28 jours suivant cette visite. Pour les sujets qui ont eu une culture nasale de S. aureus (+) lors de la visite de dépistage, une culture nasale répétée sera effectuée. Pour tous les sujets, un examen physique ciblé sera ensuite effectué sur les bras bilatéraux du sujet pour s'assurer qu'il n'y a aucune preuve de fissures, de ruptures ou d'infections de la peau sur les bras. Ensuite, nous prétraiterons un bras avec un régime de lavage avec du savon antibactérien liquide Dial, suivi d'un essuyage du bras avec 70% suivi d'alcool à 80% en utilisant de la gaze stérile. Une fois l'alcool séché, une fine couche de crème AMT individualisée du sujet sera ensuite appliquée sur l'un des bras du sujet par les mains gantées d'un coordinateur de l'étude. Cinq minutes plus tard, un lavage quantitatif sera effectué sur la peau eczémateuse des fosses antécubitales du bras traité avec la crème AMT, ainsi que sur une zone de peau non lésionnelle de ce même bras. Pour chaque lavage, un cylindre stérile en acier inoxydable d'une superficie approximative de 3,5 cm2 sera maintenu fermement à la surface de la peau, et 2,5 ml d'un liquide de décapage stérile (SSFN) seront soigneusement instillés dans le cylindre. La peau sera ensuite massée pendant 60 secondes à l'aide d'un policier en caoutchouc stérile. Le SSFN sera aspiré avec une pipette et transféré dans un tube à essai stérile. Tout ce processus sera répété une deuxième fois et le fluide mis en commun. Le liquide mis en commun sera analysé en laboratoire par PCR pour déterminer combien et quel type de bactéries sont présentes. Un prélèvement cutané de peau lésionnelle et non lésionnelle sera également effectué. Les sujets recevront ensuite des aliquotes à usage unique de leur propre crème et gants AMT à emporter chez eux. Ils seront chargés d'appliquer l'une des aliquotes au même bras auquel il a été appliqué lors de la visite de traitement à un intervalle de dosage déterminé en fonction de la demi-vie calculée à partir des résultats de l'expérience 1 pour un total de 6 doses (le schéma posologique devrait atteindre l'état d'équilibre). Il leur sera demandé de se laver les mains et de mettre des gants avant chaque application de crème. Ceci conclura la visite de traitement. Nous nous attendons à ce que cette visite dure environ 30 minutes.

Visite de suivi (À effectuer au moment de la 7e application de la crème AMT) Au cours de la visite de suivi, les sujets retourneront à la clinique pour un lavage quantitatif de leur peau lésionnelle et non lésionnelle afin de déterminer l'abondance de S . aureus lors de cette visite. Un prélèvement cutané de peau lésionnelle et non lésionnelle sera également effectué. Cette visite conclura l'Expérience 2. Elle durera environ 15 minutes.

Considérations supplémentaires : Dans cette expérience, notre objectif est d'établir l'abondance à l'état d'équilibre de l'AMT en utilisant une densité bactérienne similaire à la concentration moyenne de microbes sur une peau normale, environ 105/cm2. En utilisant les résultats de l'expérience 1, nous pouvons estimer la demi-vie des bactéries sur la surface de la peau du sujet. Il est possible que la demi-vie de la crème AMT telle que déterminée dans l'expérience 1 soit courte, peut-être même aussi courte que quelques heures. Si la crème AMT présente une perte rapide de bactéries transplantées de sorte qu'il est impossible d'augmenter davantage la fréquence d'application de l'AMT (supposée supérieure à TID), et que la dose d'AMT ne peut pratiquement pas être augmentée à partir de la norme 108 bactéries/ gm, appliqué à 10 gm/m2, le sujet appliquera la dose pratique maximale (109 bactéries/gm à 40gm/m2) à la fréquence pratique maximale (TID), et nous le ferons pendant une semaine pour déterminer combien de bactéries sont présent après cette approche thérapeutique. Bien que cela ne soit pas probable d'après les données de Costello et al. en 2009, nous voulons mettre en place ce plan de secours pour permettre à l'étude d'avancer. Bien que ces résultats ne représentent pas un état d'équilibre, les données seraient suffisantes pour permettre la conception d'un essai clinique ultérieur ou pour conclure qu'une approche d'application à long terme ne mérite pas d'autres analyses.

Expérience 3 : Pour mesurer l'abondance à l'état d'équilibre de S. aureus sur la peau du participant

L'expérience 3 consistera en 6 visites de bureau (dépistage, culture, traitement et 3 visites de suivi), ainsi qu'un appel téléphonique pour transmettre les informations d'éligibilité. Toutes les visites au bureau auront lieu à la clinique de dermatologie de l'UCSD. Les sujets qui ont participé à l'expérience 2 doivent attendre au moins une période de temps équivalente à 10 demi-vies de la crème AMT avant de commencer les procédures d'étude de l'expérience 3. Le dépistage, l'appel téléphonique et les visites de culture pour l'expérience 3 sont les mêmes que pour l'expérience 1. La visite de traitement et les visites de suivi diffèrent légèrement de celles de l'expérience 1 et seront décrites ci-dessous, avec les changements soulignés.

Visite de traitement (Jour 28 +/- 7) Les sujets éligibles avec des cultures de dépistage + S. aureus seront inscrits à l'étude et invités à retourner à la clinique environ 28 jours après leur visite de dépistage. Cette période d'attente de 3 semaines permettra au personnel du laboratoire de cultiver et de préparer les bactéries productrices d'AMP endogènes du sujet à mélanger avec Cetaphil pour application lors de la visite de traitement. Les bactéries productrices d'AMP seront également criblées pour s'assurer qu'elles ne sont pas pathogènes. Pour simuler autant que possible des scénarios réels, le sujet sera autorisé à poursuivre ses activités habituelles pendant cette étude, y compris le bain, la douche et l'exercice. Cette visite commencera par l'examen des antécédents médicaux provisoires du sujet, y compris l'historique des médicaments pour s'assurer qu'il n'a pas utilisé de traitements AD topiques sur ses bras dans les 7 jours ou de traitements AD oraux dans les 28 jours suivant cette visite. Pour les sujets qui ont eu une culture nasale de S. aureus (+) lors de la visite de dépistage, une culture nasale répétée sera effectuée. Pour tous les sujets, un examen physique ciblé sera ensuite effectué sur les bras bilatéraux du sujet pour s'assurer qu'il n'y a aucune preuve de fissures, de ruptures ou d'infections de la peau sur les bras. Le SCORAD localisé et l'échelle de gravité de l'eczéma seront complétés sur chaque fosse antécubitale. Un compteur TEWL sera ensuite utilisé pour mesurer le TEWL de chaque fosse antécubitale. Ensuite, nous prétraiterons les deux bras avec un régime de lavage avec du savon antibactérien liquide Dial, suivi d'un essuyage des bras avec 70%, puis 80% d'alcool. Une fois l'alcool séché, une fine couche de crème AMT individualisée du sujet sera ensuite appliquée sur un bras par les mains gantées d'un coordinateur de l'étude, et la lotion Cetaphil seule sur l'autre bras. Les deux crèmes seront étiquetées comme « droite » ou « gauche » pour permettre à l'étude d'être menée en double aveugle (le sujet et l'investigateur/coordinateur clinique ne sauront pas quel bras a reçu quel traitement). Cinq minutes plus tard, un lavage quantitatif sera effectué sur la peau eczémateuse des deux fosses antécubitales ainsi que sur une zone de peau non lésionnelle des deux bras. Pour chaque lavage, un cylindre stérile en acier inoxydable d'une superficie approximative de 3,5 cm2 sera maintenu fermement à la surface de la peau, et 2,5 ml d'un liquide de décapage stérile (SSFN) seront soigneusement instillés dans le cylindre. La peau sera ensuite massée pendant 60 secondes à l'aide d'un policier en caoutchouc stérile. Le SSFN sera aspiré avec une pipette et transféré dans un tube à essai stérile. Tout ce processus sera répété une deuxième fois et le fluide mis en commun. Le liquide mis en commun sera analysé en laboratoire via des méthodes de comptage de colonies pour déterminer la quantité de bactéries viables sur la peau à ce moment précis. Des prélèvements cutanés de peau lésionnelle et non lésionnelle des deux bras seront également effectués pour déterminer le type et l'abondance de chaque bactérie présente sur la peau. Le sujet recevra ensuite des aliquotes à usage unique de sa crème AMT individualisée et de sa lotion Cetaphil seules, ainsi que des gants, et sera chargé d'appliquer une aliquote sur son bras assigné à l'intervalle de dosage déterminé dans l'expérience 1 (mais sans dépasser TID). Toutes les aliquotes seront étiquetées avec « gauche » ou « droit » selon le bras sur lequel elles doivent être appliquées, selon que l'aliquote est de la lotion Cetaphil de contrôle ou de la crème AMT. Étant donné que les deux produits sont identiques en apparence et en consistance, les sujets ne doivent pas être en mesure de faire la distinction entre les deux produits. Tous les sujets seront invités à se laver les mains et à mettre des gants propres avant chaque application aliquote. Ceci conclura la visite de traitement. Nous nous attendons à ce que cette visite dure environ 60 minutes.

Visites de suivi 1, 2 et 3 (jours 33 +/- 2 jours, 38 +/- 2 jours et 43 +/- 2 jours respectivement) Les sujets reviendront à la clinique environ tous les 5 jours après la visite de traitement pour un visite de suivi. Au cours de cette visite, toute réaction indésirable à la crème AMT sera enregistrée. Ensuite, le SCORAD localisé et l'échelle de gravité de l'eczéma seront utilisés pour évaluer la gravité de l'eczéma du sujet sur chacune de ses fosses antécubitales. La PIE de chaque fosse antécubitale sera également mesurée. Ensuite, un lavage quantitatif sera réalisé sur chaque bras au niveau de la fosse antécubitale ainsi que sur une zone de peau non lésionnelle de chaque bras. Un prélèvement cutané de la peau lésionnelle et non lésionnelle des deux bras sera ensuite effectué. Le sujet recevra des aliquotes à usage unique fraîchement préparées de la crème AMT et de la lotion Cetaphil étiquetées avec « gauche » ou « droit » en fonction du bras sur lequel l'aliquote doit être appliquée (pour les visites de suivi 1 et 2 uniquement). Ces activités concluront la visite d'étude et toutes les procédures liées à l'étude. Chaque visite de suivi devrait durer environ 45 minutes.