성인 아토피 피부염 환자에서 자가 마이크로바이옴 이식의 동역학적 특성 평가

본 연구는 세 가지 연구목적에 따라 세 가지 실험으로 진행된다. 각 실험에는 다른 동의 양식이 있으므로 참가자는 세 가지 연구 실험 모두에 개별적으로 동의합니다. 개별 피험자는 세 가지 하위 연구 모두에 자격이 있는 경우 세 가지 하위 연구 모두에 참여할 수 있지만 피험자가 하나 이상의 하위 연구에 참여해야 한다는 요구 사항은 없습니다. 실험 1과 2에는 총 10명의 피험자가 등록되고 실험 3에는 약 14명의 피험자가 등록됩니다. 알츠하이머병 환자의 약 75-80%만이 S. 아우레우스에 의해 집락화된다는 점을 감안하면 18명에 근접할 것으로 예상됩니다. -20명의 과목이 포함 기준을 충족합니다. 연구에서 탈퇴한 피험자는 교체됩니다.

실험 1: 시간 경과에 따른 피부 표면에 이식된 세균의 안정성 확인

연구의 첫 번째 부분(실험 1)은 7회의 진료실 방문(선별, 배양, 치료 및 3회의 후속 방문)과 적격성 정보 전달을 위한 1회의 전화 통화로 구성됩니다. 모든 사무실 방문은 UCSD Dermatology Clinic에서 이루어집니다. 각 방문에 대한 정확한 절차는 아래에 설명되어 있습니다.

스크리닝 방문(방문 1, 0일) 임의의 연구 절차를 시작하기 전에 피험자는 먼저 사전 동의서를 검토하고 서명하도록 요청받을 것입니다. 정보에 입각한 동의를 얻은 후 포함/제외 기준을 검토합니다. 피험자가 연구에 필요한 기준을 충족하는지 평가하는 데 도움이 되도록 간략한 병력 및 신체 검사를 수행할 것입니다. 가임기 여성 피험자는 저희 사무실에서 소변 임신 검사를 받아 임신하지 않았는지 확인합니다. 포함 및 제외 기준을 충족하는 환자는 전주와 중 하나의 병변 아토피성 피부염 피부에 피부 면봉 채취를 수행합니다(Kong et al, 2012는 S. aureus에 의해 집락화된 AD 피험자가 피부 표면, 따라서 우리는 하나의 면봉으로 충분할 것으로 예상합니다), 비강에서 S. aureus의 존재를 감지하기 위한 비강 배양 면봉. 이것으로 스크리닝 방문을 마칩니다. 이 방문에 소요되는 총 시간은 약 30분입니다.

명시된 기간 내에 금지된 약물의 적용 또는 사용으로 인해 포함/제외 기준을 충족하지 못하는 피험자는 화면 실패로 간주됩니다. 이러한 환자의 피부 면봉 검사는 수행되지 않습니다. 이러한 피험자는 원하는 경우 필요한 휴약 기간(국소 약물의 경우 7일, 경구 약물의 경우 28일)을 완료한 후 다른 스크리닝 방문을 위해 돌아올 수 있습니다.

전화(3일 +/- 1일) 피부 및 비강 면봉에서 S. 아우레우스가 성장했는지 여부를 영업일 기준 3일 이내에 피험자에게 전화로 통보합니다. 메티실린 민감성 S. 아우레우스(MSSA)에 대해 양성인 피부 배양을 가진 대상체가 연구에 등록될 것입니다. 이 참가자들을 위한 문화 방문 일정이 잡힐 것입니다. 대상자는 다음 중 하나라도 있는 경우 제외됩니다: 음성 S. 아우레우스 피부 배양 또는 메티실린 내성 S. 아우레우스(MRSA) 양성 피부 배양. 총 전화 통화는 약 5분 정도 소요됩니다.

문화 방문(7일 +/- 4일) 적격 피험자는 스크리닝 방문 후 약 1주일 이내에 문화 방문을 위해 돌아올 것입니다. 이 방문 동안 우리는 피험자의 상완에 있는 비 병변(AD 없음) 피부에서 4개의 배양 면봉을 채취합니다. 이러한 배양 면봉은 실험실에서 처리될 때까지 트립신 간장 국물(TSB)에 보관되며, 실험실에서 자가 미생물 이식에 사용할 피험자의 항균 펩타이드 생성 Staph 종을 성장시키는 데 사용됩니다. 대상자는 또한 Dove 보습 비누를 받게 되며 후속 방문이 완료될 때까지 샤워할 때마다 사용하도록 지시를 받습니다. 스크리닝 방문(방문 1)에서 S. 아우레우스 비강 배양이 양성인 피험자는 또한 무피로신 연고 튜브를 받게 됩니다. 그들은 치료 방문 5일 전부터 시작하여 하루에 두 번 양쪽 앞 콧구멍에 mupirocin을 적용하는 방법에 대해 교육을 받을 것입니다. 총 관람 시간은 약 10분 정도 소요됩니다.

치료 방문(28일 +/- 7일) + S. 아우레우스 스크리닝 배양을 가진 적격 피험자는 연구에 등록되고 스크리닝 방문 후 약 28일 후에 클리닉으로 돌아가도록 지시받을 것입니다. 이 3주간의 대기 기간은 실험실 직원이 치료 방문 시 적용할 Cetaphil과 혼합할 피험자의 내인성 AMP 생성 박테리아를 성장시키고 준비할 수 있도록 합니다. 가능한 한 실제 시나리오를 시뮬레이션하기 위해 피험자는 목욕, 샤워 및 운동을 포함하여 이 연구 중에 일상적인 활동을 계속할 수 있습니다. 이 방문은 피험자가 7일 이내에 팔에 국소 AD 치료를 사용하지 않았는지 또는 이 방문 28일 이내에 경구 AD 치료를 사용하지 않았는지 확인하기 위해 약물 이력을 포함하여 피험자의 중간 의료 이력을 검토하는 것으로 시작됩니다. 스크리닝 방문 시 S. 아우레우스(+) 비강 배양을 받은 피험자의 경우, 반복 비강 배양을 수행할 것입니다. 모든 피험자에 대해 대상자의 양쪽 팔에 대한 집중 신체 검사를 수행하여 팔 피부에 균열, 파손 또는 감염의 증거가 없는지 확인합니다. 다음으로 Dial 액상 항균 비누로 두 팔을 전처리한 다음 70%, 80% 알코올을 적신 멸균 거즈로 팔을 닦습니다. 알코올이 마르면 피험자의 개별화된 AMT 크림을 연구 코디네이터의 장갑 낀 손으로 각 팔에 얇게 도포합니다. 크림을 바르고 5분 후, 같은 쪽 팔의 피부 중 병변이 없는 부위뿐만 아니라 한쪽 전주와의 습진성 피부에 정량 세척을 합니다. 각 세척을 위해 약 3.5cm2 면적의 멸균 스테인리스 스틸 실린더를 피부 표면에 단단히 고정하고 멸균 스트리핑 액(SSFN) 2.5mL를 실린더에 조심스럽게 주입합니다. 그런 다음 멸균 고무 경찰을 사용하여 60초 동안 피부를 마사지합니다. SSFN은 피펫으로 흡인되어 멸균 시험관으로 옮겨집니다. 이 전체 프로세스는 동일한 사이트에서 두 번째로 반복되며 유체가 함께 모입니다. 모인 체액은 실험실에서 콜로니 계수 방법을 통해 분석되어 피부 표면에서 생존 가능한 박테리아 콜로니의 수를 결정합니다. 병변 및 비 병변 피부 모두의 피부 면봉을 채취합니다. 이것으로 치료 방문을 마칩니다. 이 방문에는 약 30분이 소요될 것으로 예상됩니다.

후속 방문 후속 방문 중에 각 피험자는 병변 및 비 병변 피부의 정량적 세척과 병변 및 비 병변 피부의 피부 면봉을 위해 클리닉으로 돌아갑니다. 등록된 10명의 피험자는 두 그룹으로 나뉘고 각 그룹은 서로 다른 시점에 후속 조치를 위해 돌아올 것입니다. 등록할 처음 5명의 환자는 첫 번째 그룹에 배정되며 이식 후 1, 4, 8 및 24시간 시점에 후속 조치를 위해 돌아올 것입니다. 등록할 다음 5명의 환자는 두 번째 그룹에 배정되고 이식 후 1, 2, 4 및 7일 시점에 후속 조치를 위해 돌아올 것입니다. 최종 후속 시점의 정량적 세척은 해당 참가자에 대한 연구를 종료합니다. 각 후속 방문에는 약 20분이 소요됩니다.

병변 피부와 비 병변 피부 모두에서 이식된 포도상구균 종의 평균 생존율을 각 시점에 대해 플롯할 것입니다. 이 데이터에서 우리는 이식 후 박테리아의 감소율을 계산할 수 있으며, 이를 통해 박테리아의 반감기를 알 수 있습니다.

실험 2: 이식된 박테리아의 밀도를 정상 피부의 평균 미생물 농도와 유사한 약 105/cm2로 달성하는 데 필요한 자가 미생물 이식 크림 도포의 정상 상태 풍도를 확립하기 위해

실험 2는 4회의 진료실 방문(선별, 문화, 치료 및 후속 조치)과 적격성 정보를 전달하기 위한 1회의 전화 통화로 구성됩니다. 모든 사무실 방문은 UCSD Dermatology Clinic에서 이루어집니다. 실험 1과 2에 모두 참여하는 피험자는 실험 2의 연구 절차를 시작하기 전에 AMT 크림의 10 반감기에 해당하는 시간 이상을 기다려야 합니다. 실험 3의 선별, 전화 통화 및 문화 방문은 다음과 같습니다. 실험 1과 동일. 치료 방문 및 후속 방문은 실험 1의 방문과 약간 다르며 변경 사항은 밑줄로 표시하여 아래에 설명합니다.

치료 방문(28일 +/- 7일) + S. 아우레우스 스크리닝 문화를 가진 적격 피험자는 연구에 등록되고 치료 방문을 위해 스크리닝 방문 후 약 28일 후에 클리닉으로 돌아가도록 지시받을 것입니다. 배양과 치료 방문 사이의 이 3주 대기 기간을 통해 실험실 직원은 치료 방문 시 적용할 Cetaphil과 혼합할 피험자의 내인성 AMP 생성 박테리아를 성장시키고 준비할 수 있습니다. 가능한 한 실제 시나리오를 시뮬레이션하기 위해 피험자는 목욕, 샤워 및 운동을 포함하여 이 연구 중에 일상적인 활동을 계속할 수 있습니다. 이 방문은 피험자가 7일 이내에 팔에 국소 AD 치료를 사용하지 않았는지 또는 이 방문 28일 이내에 경구 AD 치료를 사용하지 않았는지 확인하기 위해 약물 이력을 포함하여 피험자의 중간 의료 이력을 검토하는 것으로 시작됩니다. 스크리닝 방문 시 S. 아우레우스(+) 비강 배양을 받은 피험자의 경우, 반복 비강 배양을 수행할 것입니다. 모든 피험자에 대해 대상자의 양쪽 팔에 대한 집중 신체 검사를 수행하여 팔 피부에 균열, 파손 또는 감염의 증거가 없는지 확인합니다. 다음으로 Dial 액상 항균 비누로 세척한 다음 멸균 거즈를 사용하여 70% 알코올과 80% 알코올로 팔을 닦는 요법으로 한쪽 팔을 전처리합니다. 알코올이 마르면 피험자의 개별화된 AMT 크림의 얇은 코트가 연구 코디네이터의 장갑 낀 손으로 피험자의 팔 중 하나에 적용될 것입니다. 5분 후, AMT 크림으로 처리된 팔의 전주와(antecubital fossae)의 습진성 피부와 동일한 팔의 비병변 피부 영역에 대해 정량적 세척을 수행합니다. 각 세척을 위해 약 3.5cm2 면적의 멸균 스테인리스 스틸 실린더를 피부 표면에 단단히 고정하고 멸균 스트리핑 액(SSFN) 2.5mL를 실린더에 조심스럽게 주입합니다. 그런 다음 멸균 고무 경찰을 사용하여 60초 동안 피부를 마사지합니다. SSFN은 피펫으로 흡인되어 멸균 시험관으로 옮겨집니다. 이 전체 과정이 두 번째로 반복되고 액체가 함께 모입니다. 풀링된 유체는 실험실에서 PCR을 통해 분석되어 얼마나 많은 박테리아가 어떤 유형인지 확인합니다. 병변 및 비 병변 피부의 피부 면봉도 완료됩니다. 그런 다음 피험자는 집에 가져갈 자신의 AMT 크림과 장갑의 일회용 부분 표본을 받게 됩니다. 실험 1의 결과로부터 계산된 반감기를 기준으로 결정된 투약 간격으로 총 6회 용량(투여 일정 정상 상태에 도달할 것으로 예측됨). 그들은 크림을 바르기 전에 손을 씻고 장갑을 착용하도록 지시받을 것입니다. 이것으로 치료 방문을 마칩니다. 이 방문에는 약 30분이 소요될 것으로 예상됩니다.

후속 방문(AMT 크림의 7번째 도포 시점에 발생) 후속 방문 동안 피험자는 S의 양을 결정하기 위해 병변 및 비 병변 피부의 정량적 세척을 위해 클리닉으로 돌아올 것입니다. 이번 방문에서 .aureus. 병변 및 비 병변 피부의 피부 면봉도 수행됩니다. 이번 방문으로 실험 2가 종료됩니다. 약 15분 동안 진행됩니다.

추가 고려 사항: 이 실험에서 우리의 목표는 정상 피부의 평균 미생물 농도인 약 105/cm2와 유사한 박테리아 밀도를 사용하여 AMT의 정상 상태 풍도를 설정하는 것입니다. 실험 1의 결과를 이용하여 대상 피부 표면의 세균 반감기를 추정할 수 있다. 실험 1에서 결정된 AMT 크림의 반감기는 짧을 수 있으며, 심지어 몇 시간 정도로 짧을 수도 있습니다. AMT 크림이 이식된 박테리아의 빠른 손실을 보여 AMT의 적용 빈도를 더 높이는 것이 비실용적이며(TID보다 큰 것으로 가정) AMT의 용량을 표준 108 박테리아/ gm, 10gm/m2로 적용되는 경우 피험자는 최대 실제 빈도(TID)에서 최대 실제 용량(40gm/m2에서 109 박테리아/gm)을 적용하고 얼마나 많은 박테리아가 있는지 확인하기 위해 일주일 동안 이를 수행합니다. 이 치료 접근법 후에 존재합니다. 이것은 Costello et al.의 데이터에서 나온 것 같지는 않지만. 2009년에 우리는 연구가 진행될 수 있도록 이 백업 계획을 수립하고자 합니다. 이러한 결과가 정상 상태를 나타내지는 않지만, 데이터는 후속 임상 시험의 설계를 가능하게 하거나 장기 적용 접근법이 추가 분석할 가치가 없다는 결론을 내리기에 충분할 것입니다.

실험 3: 참가자의 피부에서 S. aureus의 정상 상태 풍부도를 측정하기 위해

실험 3은 6회의 진료실 방문(스크리닝, 문화, 치료 및 3회의 후속 방문)과 적격성 정보를 전달하기 위한 1회의 전화 통화로 구성됩니다. 모든 사무실 방문은 UCSD Dermatology Clinic에서 이루어집니다. 실험 2에 참여한 피험자는 실험 3의 연구 절차를 시작하기 전에 AMT 크림의 10 반감기에 해당하는 시간 이상을 기다려야 합니다. 실험 3의 선별, 전화 통화 및 문화 방문은 동일합니다. 실험 1. 치료 방문 및 후속 방문은 실험 1의 방문과 약간 다르며 변경 사항은 밑줄로 표시하여 아래에 설명합니다.

치료 방문(28일 +/- 7일) + S. 아우레우스 스크리닝 배양을 가진 적격 피험자는 연구에 등록되고 스크리닝 방문 후 약 28일 후에 클리닉으로 돌아가도록 지시받을 것입니다. 이 3주간의 대기 기간은 실험실 직원이 치료 방문 시 적용할 Cetaphil과 혼합할 피험자의 내인성 AMP 생성 박테리아를 성장시키고 준비할 수 있도록 합니다. AMP 생성 박테리아도 검사하여 병원성이 없는지 확인합니다. 가능한 한 실제 시나리오를 시뮬레이션하기 위해 피험자는 목욕, 샤워 및 운동을 포함하여 이 연구 중에 일상적인 활동을 계속할 수 있습니다. 이 방문은 피험자가 7일 이내에 팔에 국소 AD 치료를 사용하지 않았는지 또는 이 방문 28일 이내에 경구 AD 치료를 사용하지 않았는지 확인하기 위해 약물 이력을 포함하여 피험자의 중간 의료 이력을 검토하는 것으로 시작됩니다. 스크리닝 방문 시 S. 아우레우스(+) 비강 배양을 받은 피험자의 경우, 반복 비강 배양을 수행할 것입니다. 모든 피험자에 대해 대상자의 양쪽 팔에 대한 집중 신체 검사를 수행하여 팔 피부에 균열, 파손 또는 감염의 증거가 없는지 확인합니다. 국부적인 SCORAD 및 Eczema Severity Scale은 각 전주와에서 작성됩니다. 그런 다음 TEWL 미터를 사용하여 각 전주와의 TEWL을 측정합니다. 다음으로 우리는 Dial 액상 항균 비누로 양 팔을 씻은 다음 70% 알코올과 80% 알코올로 양 팔을 닦는 요법으로 전처리할 것입니다. 알코올이 마르면 피험자의 개별화된 AMT 크림을 연구 코디네이터의 장갑 낀 손으로 한쪽 팔에 얇게 바르고 다른 쪽 팔에는 Cetaphil 로션만 바릅니다. 2개의 크림은 연구가 이중 맹검 방식으로 수행될 수 있도록 '오른쪽' 또는 '왼쪽'으로 표시될 것입니다(피험자 및 임상 조사자/코디네이터 모두 어떤 팔이 어떤 치료를 받았는지에 대해 눈이 멀게 됩니다). 5분 후 양팔의 습진성 피부와 양 팔의 비병소 피부 부위에 대해 정량 세척을 시행한다. 각 세척을 위해 약 3.5cm2 면적의 멸균 스테인리스 스틸 실린더를 피부 표면에 단단히 고정하고 멸균 스트리핑 액(SSFN) 2.5mL를 실린더에 조심스럽게 주입합니다. 그런 다음 멸균 고무 경찰을 사용하여 60초 동안 피부를 마사지합니다. SSFN은 피펫으로 흡인되어 멸균 시험관으로 옮겨집니다. 이 전체 과정이 두 번째로 반복되고 액체가 함께 모입니다. 풀링된 유체는 콜로니 계수 방법을 통해 실험실에서 분석되어 이 시점에서 피부에 생존 가능한 박테리아의 양을 결정합니다. 양팔의 병변 및 비 병변 피부의 피부 면봉을 채취하여 피부에 존재하는 각 박테리아의 종류와 양을 결정합니다. 그런 다음 피험자는 장갑뿐만 아니라 개인화된 AMT 크림과 Cetaphil 로션의 일회용 분취량을 받고 실험 1에서 결정된 투약 간격(그러나 TID를 초과하지 않음)으로 할당된 팔에 하나의 분취량을 적용하도록 지시받습니다. 모든 분취액은 대조군 세타필 로션인지 AMT 크림인지에 따라 적용해야 하는 팔에 따라 '왼쪽' 또는 '오른쪽'으로 표시됩니다. 두 제품은 외관과 일관성이 동일하므로 대상자는 두 제품을 구별할 수 없어야 합니다. 모든 피험자는 손을 씻고 각 부분표본을 적용하기 전에 깨끗한 장갑을 착용하도록 지시받을 것입니다. 이것으로 치료 방문을 마칩니다. 이 방문에는 약 60분이 소요될 것으로 예상됩니다.

후속 방문 1, 2 및 3(각각 33 +/- 2일, 38 +/- 2일 및 43 +/- 2일) 후속 방문. 이 방문 동안 AMT 크림에 대한 부작용이 기록됩니다. 다음으로, 국부적인 SCORAD 및 Eczema Severity Scale을 사용하여 대상자의 전주와 각각에 대한 습진의 심각도를 점수화합니다. 각 antecubital fossa의 TEWL도 측정됩니다. 다음으로, 각 팔의 전주와(antecubital fossa) 영역의 각 팔과 각 팔의 비 병변 피부 영역에 대해 정량적 세척을 수행합니다. 그런 다음 양팔에서 병변 및 비 병변 피부의 피부 면봉을 수행합니다. 피험자는 부분 표본을 어느 팔에 적용해야 하는지에 따라 '왼쪽' 또는 '오른쪽' 라벨이 붙은 AMT 크림과 Cetaphil 로션의 신선하게 준비된 일회용 부분 표본을 받게 됩니다(추적 방문 1 및 2에만 해당). 이러한 활동으로 연구 방문 및 모든 연구 관련 절차가 종료됩니다. 각 후속 방문에는 약 45분이 소요됩니다.