中国人集団における mSEPT9 (メチル化セプチン 9) を使用した CRC スクリーニング (RESEPT)

1. バックグラウンド

   結腸直腸癌 (CRC) は、胃腸系で 3 番目に多い悪性腫瘍です。 結腸直腸癌の定期的なスクリーニング、早期発見、早期治療は、より良い予防と治癒さえも達成することができます. 現在、CRC 患者の 60% ～ 70% は後期になるまで診断されず、早期に発見されるのは 11.8% の症例のみです。 したがって、早期スクリーニング率を改善して大腸がん死亡率を下げることが急務です。 中国では、便潜血検査 (FOBT) と大腸内視鏡検査が現在、CRC の早期スクリーニングに利用できます。 FOBT は低コストで非侵襲性があるため広く使用されていますが、多くの干渉要因により偽陽性率が比較的高くなります。 より高度なFOBTである便免疫化学検査（FIT）は、従来の化学的方法に比べて検査の特異度が大幅に向上し、コンプライアンスも高い反面、他の腸疾患の影響を受けやすく、陽性適中率が低くなります。 対照的に、大腸内視鏡検査のコンプライアンスは、その侵襲性、コスト、および合併症のリスクのために低くなります。

   近年、血漿ベースの SEPT9 遺伝子メチル化アッセイは、CRC の早期発見のための有望な方法であることが証明されています。 多くの臨床研究により、メチル化された SEPT9 遺伝子が早期の CRC 検出に有用なバイオマーカーであることが実証されています。 この製品は、欧州連合 CE 認証、中国 FDA およびアルゼンチン FDA から承認を得ています。 米国 FDA への重要な臨床データの提出は完了しており、米国 FDA の承認が近いことが期待されます。 SEPT9 遺伝子メチル化アッセイに基づくサービスは、一般的な医療処置コード (CPT コード) 81401 を使用して、quest、Arup、DX および gamma dynacare のコンパニオンなどの臨床検査室でも提供されています。 中国では、Epigenomics AG の強力なパートナーである BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc が、Epigenomics AG の同意を得て、独自の SEPT9 遺伝子メチル化アッセイを開発しました。

2. サンプルサイズの推定

   既知の陽性検出率の式 N=Z2* (P (1-p))/E2 に基づいて、研究者は試験に必要なサンプル数を計算しました。ここで、N はサンプルサイズを表し、Z は統計パラメーターです ( Z=1.96 (95% 信頼区間); E はエラー (この研究では 5% が選択された) を表し、P は確率 (推定陽性検出率) を表します。 調査員は、SEPT9 感度に関する既存の文献に基づいて P 値に 0.75 を選択します。 CRC のケース数は、上記の式に基づいて 288 と計算されます。 調査員は、情報の不完全性と追跡の損失により、300 件の完全な情報を収集することを目指しています。 等 CRC が中国の病院の高リスクの外来患者および入院患者の 30% を占めるという推定に基づいて、試験の患者総数は 1000 例以上であるべきです。 研究者は、追跡率の 20% の損失を考慮して、この試験で 1200 例の募集を目指しています。

   この試験の最終的な実際の症例数は、追跡の喪失、不完全な試験または臨床データ、または試験基準を満たしていないサンプルのため、1031 でした。

3. 主題のグループ化

   SEPT9アッセイの採血前にすべての患者をグループ分けするわけではなく、選択基準を満たしたすべての被験者について血液サンプルを採取します。 すべての技術者は、被験者の臨床情報を知らされていません。 SEPT9アッセイやその他のスクリーニング検査との同時検出の実現可能性を検討するため、参加患者の意思と医師の判断により、癌胎児性抗原（CEA）およびFIT検査を実施します。 データのこの部分は、試験の完了後にレトロスペクティブ分析で使用されます。

   計画されたすべての検査が終了すると、すべての被験者は、大腸内視鏡検査の診断と病理学に基づいて、CRC グループ、前癌疾患グループ、およびその他の疾患グループの 3 つのグループに分けられます。CRC グループは、ステージ 0-IV の CRC の患者で構成されます。前癌疾患グループには、腺腫およびポリープの患者が含まれ、その他の疾患グループには、他の腸疾患の患者、他の癌、および疾患の証拠のない被験者が含まれます。

4. トライアルの手順

   トライアル開始前に、アッセイの操作手順、キットや器具の使用方法などのトレーニングが終了します。 この試験は無作為化された単盲検試験です。 すべての患者は、10 ml の採血の前にインフォームド コンセントに署名する必要があります。 サンプルは処理され、ユーザーの指示に基づいて SEPT9 アッセイが実行されます。 すべての被験者は、診断を確認するために大腸内視鏡検査および/または病理検査を受け、ユーザーの指示に基づいて SEPT9 アッセイの結果が決定されます。 SEPT9アッセイと大腸内視鏡検査および/または病理学的検査の両方の結果に基づいて統計分析が行われます。

5. サンプルの収集と保管

1) サンプル コレクション:

1. サンプルは外来患者または入院患者から収集する必要があり、サンプル情報はサンプル収集フォームに記録する必要があります。
2. サンプル収集: 10 mL の末梢血 (K2EDTA 凝固防止剤のみ)。
3. アッセイの精度を確保するために、サンプルの収集は上記の要件に基づいて厳密に実行する必要があります。そうしないと、アッセイの精度に影響を与える可能性があります。

2) 検体の保管・運搬方法：キットの使用説明書に基づいて検体を保管・移送する

6、SEPT9アッセイ

SEPT9 遺伝子メチル化アッセイ（PCR 蛍光プローブ法）は、2 つのステップで構成されています。 まず、プラズマ処理キットを使用して血漿中のセルフリー DNA を抽出し、続いてバイサルファイト変換を行います。この変換では、非メチル化シトシンは変換されますが、メチル化シトシンは変換されません。 第二に、バイサルファイト変換された DNA (bisDNA) をテンプレートとして使用するリアルタイム PCR を実行し、テンプレートの増幅を決定します。 PCR ブロッキング エージェントとメチル化特異的プローブが連携して、メチル化 DNA と非メチル化 DNA を区別できます。 βアクチンは、血漿DNAの品質とPCR増幅の有効性を評価するための内部コントロールとして使用されます。 陽性および陰性コントロールは、品質管理としてキットで提供され、毎回サンプルと並行して実行されます。

7,データ分析と統計

SEPT9 アッセイのデータとすべての被験者の大腸内視鏡検査のデータが収集および分析され、次のパラメータが計算されます。

感度 特異度 一貫性 陽性適中率 (PPV) 陰性適中率 (NPV)

8,倫理

臨床試験の予算計画は、臨床試験の開始前に審査のために参加病院の倫理委員会に提出されます。 委員会による承認がない限り、研究は開始されません。 すべての被験者は、採血前にインフォームド コンセントに署名し、血漿の使用法と検査結果について通知されます。

9、研究進捗

2014.02-2014.04 臨床試験プロトコルの確認と、サンプルの収集とテストのための担当者のトレーニング

2014.04-2014.08 4病院での承認のための倫理委員会への臨床試験申請書の提出

2014.08-2015.04 患者の募集と被験者の一般情報の収集を開始する

2014.10-2015.04 サンプルの収集とテスト

2015.04-2015.07 大腸内視鏡検査および/または病理学情報を収集および追跡する

2015.07-2015.09 データ処理、統計および分析

2015.10 患者募集の締め切りと試験の終了

10,予算

費用には、1200 人の被験者を募集するための費用、機器のレンタル料、試験材料の費用、サンプル処理費用、人件費、患者の補償費用、旅費および会議費用、出版および知的財産 (IP) 費用が含まれます。 この試験はBioChainによって開始および組織されているため、すべての費用はBioChainによって賄われます。

11,出版物および知的財産

1. Science Citation Index (SCI) に索引付けされたジャーナルに 2 ～ 3 本の論文、中国国内のコア ジャーナルに 3 ～ 4 本の論文を掲載する予定です。
2. 1件の特許を提出予定

12、データ管理

臨床試験データの品質は、結果の評価の基礎となります。 実験結果の現実性と信頼性を確保するために、研究者は一連のデータ管理原則を設定しました。 研究者は、データ管理委員会の構成と責任、およびデータ管理の内容から、本研究におけるデータ管理の原則を以下に詳細に説明します。

13.研究チームと人員

病気の発生率と異なる病院の患者の比率の違いによって引き起こされる可能性のあるエラーを回避するために、北京の4つの病院がこの臨床試験の患者募集に選ばれます。 これら 4 つの病院の患者は主に中国北部から来ているため、調査対象集団はこの地域の疾病疫学を代表するものです。 4つの病院の消化器疾患、内視鏡検査、一般外科の医師と技術者が試験に参加します。彼らは次のとおりです。

北京連合医科大学病院 (北京) 北京軍総合病院 (北京) がん病院 中国医学科学院 (北京) 北京がん病院 (北京)