使用 mSEPT9（甲基化 Septin 9）在中国人群中筛查 CRC (RESEPT)

1. 背景

   结直肠癌 (CRC) 是胃肠道系统第三大常见恶性肿瘤。 大肠癌定期筛查、早发现、早治疗，可以达到更好的预防甚至治愈效果。 目前，60%-70% 的 CRC 患者直到晚期才被诊断出来，只有 11.8% 的病例在早期被发现。 因此，迫切需要通过提高早期筛查率来降低 CRC 死亡率。 在中国，目前大便隐血试验（FOBT）和结肠镜检查可用于早期CRC筛查。 FOBT因其成本低、无创性而被广泛应用，但由于干扰因素较多，其假阳性率相对较高。 更先进的FOBT，即粪便免疫化学试验（FIT），与传统化学方法相比，试验特异性大大提高，依从性高，但仍受其他肠道疾病的影响，导致阳性预测值较低。 相比之下，由于结肠镜检查的侵入性、成本和并发症风险，其依从性较低。

   近年来，基于血浆的 SEPT9 基因甲基化检测已被证明是一种很有前途的 CRC 早期检测方法。 许多临床研究表明，甲基化的 SEPT9 基因是早期 CRC 检测的有用生物标志物。目前，Epigenomics 的 Epi proColon 2.0 CE 是全球唯一商业化的 SEPT9 基因甲基化检测方法。 本产品已获得欧盟CE认证、中国FDA和阿根廷FDA的认可。 已完成向美国FDA递交关键临床数据，有望尽快获得美国FDA批准。 临床实验室也提供基于 SEPT9 基因甲基化检测的服务，例如 quest、Arup、companion to DX 和 gamma dynacare，通用医疗程序代码（CPT 代码）81401。 在中国，Epigenomics AG的强大合作伙伴BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc在Epigenomics AG的同意下开发了自己的SEPT9基因甲基化检测试剂盒。

2. 估计样本量

   根据已知阳性检出率的公式N=Z2*(P(1-p))/E2，研究者计算出试验所需的样本数，其中N代表样本量，Z为统计参数（ Z=1.96 为 95% 置信区间）； E代表误差（本研究选择5%），P代表概率（推定的阳性检出率）。 研究人员根据有关 SEPT9 敏感性的现有文献，将 P 值选择为 0.75。 根据上述等式计算出 CRC 案例数为 288。 由于信息不完整和追踪丢失，调查人员旨在收集 300 个案例的完整信息。 等等 以结直肠癌占中国医院高危门诊和住院患者的30%推算，试验患者总数应不少于1000例。 考虑到 20% 的失访率，研究者的目标是在本试验中招募 1200 例病例。

   由于追踪丢失、测试或临床数据不完整或样本不符合测试标准，本次试验最终实际病例数为1031例。

3. 学科分组

   SEPT9检测抽血前不对所有患者进行分组，对所有符合选择标准的受试者进行血样采集。 所有技术人员都不知道受试者的临床信息。 为探讨与SEPT9检测及其他筛查试验联合检测的可行性，将根据参与患者的意愿和医师的判断进行癌胚抗原（CEA）和FIT检测。 该部分数据将用于试验完成后的回顾性分析。

   当所有计划的检查完成后，所有受试者将根据结肠镜诊断和病理分为三组，CRC 组、癌前病变组和其他疾病组，其中 CRC 组由 0-IV 期 CRC 患者组成，癌前疾病组包括腺瘤和息肉患者，其他疾病组包括其他肠道疾病、其他癌症和无疾病迹象的受试者。

4. 审判程序

   培训将在试验开始前完成，包括检测的操作程序和试剂盒和仪器的使用。 该试验是一项随机、单盲研究。 所有患者在抽血10ml前均应签署知情同意书。 将根据用户说明处理样品并执行 SEPT9 测定。 所有受试者将接受结肠镜检查和/或病理检查以明确诊断，SEPT9检测结果将根据用户使用说明确定。 将根据 SEPT9 测定和结肠镜检查和/或病理检查的结果进行统计分析。

5. 样品采集和储存

1）样品采集：

1. 样本应从门诊或住院患者采集，样本信息应记录在样本采集表中。
2. 样品采集：10 mL 外周血（仅 K2EDTA 去凝剂）。
3. 为保证测定的准确性，样品采集应严格按上述要求进行，否则可能影响测定的准确性。

2) 样品储运方法：按试剂盒使用说明储存和转移样品

6、SEPT9检测

SEPT9基因甲基化检测（PCR荧光探针法）由两步组成。 首先，使用血浆处理试剂盒提取血浆中的游离DNA，然后进行亚硫酸氢盐转化，其中未甲基化的胞嘧啶被转化而甲基化的胞嘧啶不被转化。 其次，将使用亚硫酸氢盐转化的 DNA (bisDNA) 作为模板进行实时 PCR 以确定模板的扩增。 PCR 阻断剂和甲基化特异性探针可以协同工作以区分甲基化和非甲基化 DNA。 β-肌动蛋白将用作内部对照来评估血浆 DNA 质量和 PCR 扩增的有效性。 试剂盒中将提供阳性和阴性对照作为质量对照，并将每次与样品平行运行。

7、数据分析统计

将收集和分析所有受试者的 SEPT9 检测数据和结肠镜检查数据，计算以下参数：

灵敏度 特异性 一致性 阳性预测值 (PPV) 阴性预测值 (NPV)

8、伦理道德

临床试验预算方案将在临床试验开始前提交参与医院伦理委员会审核。 除非委员会批准，否则不会启动该研究。 所有受试者在采血前均签署知情同意书，并告知血浆的使用方法和检测结果。

九、研究进展

2014.02-2014.04 临床试验方案的确认和样本采集和测试人员的培训

2014.04-2014.08 四家医院向伦理委员会提交临床试验申请审批

2014.08-2015.04 开始患者招募和受试者一般信息的收集

2014.10-2015.04 样品采集和测试

2015.04-2015.07 收集和跟踪结肠镜检查和/或病理信息

2015.07-2015.09 数据处理、统计与分析

2015.10 患者招募结束，试验结束

10、预算

费用包括招募1200名受试者的费用、设备租金费用、测试材料费用、样品处理费用、人工费用、患者补偿费用、差旅和会议费用、出版和知识产权（IP）费用。 由于本次试验由 BioChain 发起和组织，因此所有费用将由 BioChain 承担。

11、出版与知识产权

1. 计划在科学引文索引（SCI）收录期刊发表论文2-3篇，在国内核心期刊发表论文3-4篇。
2. 计划提交一项专利

12、数据管理

临床试验数据的质量是评价结果的基础。 为保证实验结果的真实性和可靠性，研究者制定了一系列数据管理原则。 研究者将从数据管理委员会的组成和职责、数据管理的内容等方面对本研究中的数据管理原则进行详尽的阐述。

13.研究团队及人员

为避免不同医院发病率和患者比例的差异可能造成的误差，本次临床试验将选择北京市四家医院作为患者招募对象。 由于这四家医院的患者主要来自中国北方，因此研究人群在该地区的疾病流行病学方面具有代表性。 来自四家医院胃肠病科、内镜科和普外科的医生和技术人员将参与试验，他们是：

北京协和医院（北京） 北京军区总医院（北京） 中国医学科学院肿瘤医院（北京） 北京肿瘤医院（北京）