CRC-screening ved hjælp af mSEPT9 (methyleret septin 9) i kinesisk befolkning (RESEPT)

1. Baggrund

   Kolorektal cancer (CRC) er den tredje mest almindelige malignitet i mave-tarmsystemet. Regelmæssig screening, tidlig opdagelse og tidlig behandling af tyktarmskræft kan opnå bedre forebyggelse og endda helbredelse. I øjeblikket diagnosticeres 60%-70% af CRC-patienter først i de sene stadier, og kun 11,8% af tilfældene opdages på et tidligt stadium. Det er derfor presserende at reducere CRC-dødeligheden ved at forbedre den tidlige screeningsrate. I Kina er fækal okkult blodprøve (FOBT) og koloskopi tilgængelige i øjeblikket til tidlig CRC-screening. FOBT er meget udbredt på grund af dens lave omkostninger og ikke-invasivitet, men dens falske positive rate er relativt høj på grund af mange forstyrrende faktorer. Den mere avancerede FOBT, fækal immunokemisk test (FIT), har i høj grad forbedret testspecificiteten sammenlignet med den traditionelle kemiske metode, og dens compliance er høj, men er stadig underlagt påvirkning af andre tarmsygdomme, hvilket fører til lav positiv prædiktiv værdi. I modsætning hertil er compliance for koloskopi lav på grund af dens invasivitet, omkostninger og risiko for komplikationer.

   I de seneste år har den plasmabaserede SEPT9-genmethyleringsanalyse vist sig at være en lovende metode til tidlig påvisning af CRC. Mange kliniske undersøgelser har vist, at det methylerede SEPT9-gen er en nyttig biomarkør til tidlig CRC-detektion. På nuværende tidspunkt er Epigenomics' Epi proColon 2.0 CE den eneste kommercialiserede analyse af SEPT9-genmethylering globalt. Dette produkt har opnået godkendelse fra EU's CE-certificering, den kinesiske FDA og den argentinske FDA. Det har afsluttet indsendelse af vigtige kliniske data til det amerikanske FDA, med rimelige forventninger til den amerikanske FDA-godkendelse snart. Tjenester baseret på SEPT9-genmethyleringsanalysen leveres også i kliniske laboratorier såsom quest, Arup, companion to DX og gamma dynacare med den almindelige medicinske procedurekode (CPT-kode) 81401. I Kina har BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc., en stærk partner til Epigenomics AG, udviklet sit eget SEPT9-genmethyleringsassay efter aftale med Epigenomics AG.

2. Estimering af stikprøvestørrelse

   Baseret på ligningen N=Z2* (P (1-p))/E2 for kendt positivitetsdetektionshastighed, beregnede efterforskerne antallet af prøver, der var nødvendige for forsøget, hvor N repræsenterer prøvestørrelsen, Z er en statistisk parameter ( Z=1,96 for 95 % konfidensinterval); E repræsenterer fejlen (5% blev valgt i denne undersøgelse), og P repræsenterer sandsynligheden (formodet positiv detektionsrate). Forskerne vælger 0,75 for P-værdi baseret på eksisterende litteratur om SEPT9-følsomhed. Antallet af CRC-tilfælde er beregnet til 288 baseret på ligningen ovenfor. Efterforskerne sigter mod at indsamle fuldstændige oplysninger for 300 sager på grund af ufuldstændige oplysninger og sporingstab. etc. Baseret på vurderingen af, at CRC tegner sig for 30 % af højrisikoambulante og indlagte patienter på kinesiske hospitaler, bør det samlede antal patienter i forsøget være ikke mindre end 1000 tilfælde. Efterforskerne sigter mod at rekruttere 1200 sager i denne retssag under hensyntagen til 20 % tab af opfølgning.

   Det endelige faktiske antal tilfælde for dette forsøg var 1031 på grund af tab af sporing, ufuldstændige test- eller kliniske data eller prøver, der ikke opfyldte testkriterierne.

3. Emnegruppering

   Alle patienter vil ikke blive grupperet før blodudtagning til SEPT9-analyse, og der vil blive taget blodprøver for alle forsøgspersoner, der opfyldte udvælgelseskriterierne. Alle teknikere er blindet over for forsøgspersoners kliniske information. For at undersøge muligheden for fælles detektion med SEPT9-assay og andre screeningstests, vil carcino-embryonalt antigen (CEA) og FIT-test blive udført efter de deltagende patienters vilje og lægers skøn. Denne del af data vil blive brugt i en retrospektiv analyse efter afslutningen af ​​forsøget.

   Når alle planlagte tests er færdige, vil alle forsøgspersoner blive opdelt i tre grupper baseret på koloskopidiagnose og patologi, CRC-gruppen, den præcancerøse sygdomsgruppe og anden sygdomsgruppe, hvor CRC-gruppen består af patienter med stadium 0-IV CRC, den præcancerøse sygdomsgruppe omfatter patienter med adenom og polypper, og anden sygdomsgruppe omfatter patienter med andre tarmsygdomme, andre kræftformer og forsøgspersoner uden tegn på sygdom.

4. Forsøgsprocedure

   Træningen vil blive afsluttet, før forsøget starter, inklusive operationsproceduren for analysen og brugen af ​​kits og instrumenter. Dette forsøg er et randomiseret, enkeltblindt studie. Alle patienter skal underskrive det informerede samtykke før blodprøvetagning på 10 ml. Prøver vil blive behandlet, og SEPT9-analysen vil blive udført baseret på instruktionerne til brugerne. Alle forsøgspersoner vil modtage koloskopi og/eller patologisk undersøgelse for at bekræfte diagnosen, og resultaterne for SEPT9-analysen vil blive besluttet baseret på instruktionerne til brugerne. Statistisk analyse vil blive udført baseret på resultaterne fra både SEPT9-assay og koloskopi og/eller patologisk undersøgelse.

5. Prøveindsamling og opbevaring

1) prøveindsamling:

1. prøven skal indsamles fra ambulante eller indlagte patienter, og prøveoplysningerne skal registreres i prøveindsamlingsformularer.
2. prøveopsamling: 10 ml perifert blod (kun K2EDTA-dekoagulant).
3. For at sikre analysens nøjagtighed bør prøvetagning udføres strengt baseret på ovenstående krav, ellers kan det påvirke analysens nøjagtighed.

2) prøveopbevaring og -transportmetode: Opbevar og overfør prøverne baseret på instruktionerne til brug af sættet

6, SEPT9 assay

SEPT9-genmethyleringsassay (PCR-fluorescensprobemetode) er sammensat af to trin. For det første ekstraheres det cellefrie DNA i plasma ved hjælp af plasmabehandlingssættet, efterfulgt af bisulfitkonvertering, hvor det umethylerede cytosin vil blive omdannet, mens det methylerede cytosin ikke vil. For det andet vil real-time PCR ved hjælp af bisulfit-konverteret DNA (bisDNA) som template blive udført for at bestemme amplifikationen af ​​template. PCR-blokerende middel og methyleringsspecifikke prober kan arbejde sammen for at skelne mellem methyleret og umethyleret DNA. Beta-actin vil blive brugt som intern kontrol til at evaluere plasma-DNA-kvaliteten og validiteten af ​​PCR-amplifikation. Positive og negative kontroller vil blive leveret i sættet som kvalitetskontroller og vil blive kørt parallelt med prøver hver gang.

7, Dataanalyse og statistik

Dataene for SEPT9-analysen og dataene for koloskopi af alle forsøgspersoner vil blive indsamlet og analyseret, følgende parametre vil blive beregnet:

Følsomhed Specificitet Konsistens positiv forudsigelig værdi (PPV) negativ forudsigelig værdi (NPV)

8, Etik

Budgetplanen for det kliniske forsøg vil blive forelagt den etiske komité på de deltagende hospitaler til gennemgang, inden det kliniske forsøg starter. Undersøgelsen vil ikke blive iværksat med mindre udvalgenes godkendelse. Alle forsøgspersoner vil underskrive det informerede samtykke før blodprøvetagning og vil blive informeret om brugen af ​​plasma og testresultaterne.

9, Forskningsfremskridt

2014.02-2014.04 Bekræftelse af kliniske forsøgsprotokoller og træning af personale til prøveindsamling og test

2014.04-2014.08 Indsendelse af ansøgning om klinisk forsøg til etisk udvalg til godkendelse på fire hospitaler

2014.08-2015.04 Start patientrekruttering og indsamling af generel information om emner

2014.10-2015.04 Prøveindsamling og test

2015.04-2015.07 Indsaml og spor information om koloskopi og/eller patologi

2015.07-2015.09 Databehandling, statistik og analyse

2015.10 Afslutning af patientrekruttering og afslutning af forsøget

10, Budget

Omkostningerne omfatter udgifter til rekruttering af 1200 forsøgspersoner, udstyrsleje, omkostninger til testmateriale, prøvebehandlingsgebyr, lønomkostninger, patientkompensationsomkostninger, rejse- og konferenceomkostninger, publikations- og immaterielle rettigheder (IP). Alle udgifter vil blive dækket af BioChain, da dette forsøg er initieret og organiseret af BioChain.

11,Udgivelse og intellektuelle ejendomme

1. planlægger at publicere 2-3 artikler i science citation index (SCI)-indekserede tidsskrifter, 3-4 artikler i kinesiske nationale kernetidsskrifter.
2. planlægger at indsende ét patent

12, Datahåndtering

Kvaliteten af ​​data fra kliniske forsøg er grundlaget for evaluering af resultater. For at sikre eksperimentresultaternes virkelighed og pålidelighed opstillede efterforskerne en række datastyringsprincipper. Efterforskerne vil forklare datastyringsprincipper i denne undersøgelse grundigt i det følgende fra sammensætningen og ansvaret for Data Management Committee og indholdet af datahåndtering.

13.Forskerhold og personale

For at undgå de mulige fejl forårsaget af forskelle i sygdomsincidens og forholdet mellem patienter på forskellige hospitaler, vil fire hospitaler i Beijing blive udvalgt til patientrekruttering i dette kliniske forsøg. Da patienter på disse fire hospitaler hovedsageligt er fra det nordlige Kina, er undersøgelsespopulationen repræsentativ for sygdomsepidemiologi i denne del af landet. Læger og teknikere fra afdelingen for mave-tarmsygdomme, endoskopi og almen kirurgi fra de fire sygehuse vil deltage i forsøget, de er:

Peking Union Medical College Hospital (Beijing) Beijing Military General Hospital (Beijing) Cancer Hospital Chinese Academy of Medical Sciences (Beijing) Beijing Cancer Hospital (Beijing)