Screening CRC pomocí mSEPT9 (methylovaný septin 9) v čínské populaci (RESEPT)

1. Pozadí

   Kolorektální karcinom (CRC) je třetí nejčastější zhoubný nádor gastrointestinálního systému. Pravidelným screeningem, včasným záchytem a včasnou léčbou kolorektálního karcinomu lze dosáhnout lepší prevence a dokonce i vyléčení. V současné době je 60–70 % pacientů s CRC diagnostikováno až v pozdních stádiích a pouze 11,8 % případů je zachyceno v časném stadiu. Je proto naléhavé snížit mortalitu CRC zlepšením četnosti časného screeningu. V Číně je v současné době k dispozici fekální okultní krevní test (FOBT) a kolonoskopie pro časný screening CRC. FOBT je široce používán díky své nízké ceně a neinvazivnosti, nicméně míra falešně pozitivních výsledků je relativně vysoká kvůli mnoha interferujícím faktorům. Pokročilejší FOBT, fekální imunochemický test (FIT), výrazně zlepšil specifitu testu ve srovnání s tradiční chemickou metodou a jeho compliance je vysoká, ale stále podléhá vlivu jiných střevních onemocnění, což vede k nízké pozitivní prediktivní hodnotě. Naproti tomu kompliance pro kolonoskopii je nízká kvůli její invazivitě, ceně a riziku komplikací.

   V posledních letech se plazmatický test metylace genu SEPT9 ukázal jako slibná metoda pro časnou detekci CRC. Mnoho klinických studií prokázalo, že metylovaný gen SEPT9 je užitečným biomarkerem pro časnou detekci CRC. V současnosti je Epi proColon 2.0 CE od Epigenomics jediným komerčně dostupným testem methylace genu SEPT9 na celém světě. Tento produkt získal schválení od Evropské unie CE certifikace, čínského FDA a argentinského FDA. Dokončila předání klíčových klinických údajů americkému FDA s rozumným očekáváním brzkého schválení americkým FDA. Služby založené na testu metylace genu SEPT9 jsou také poskytovány v klinických laboratořích, jako je quest, Arup, společník DX a gama dynacare s běžným kódem lékařského postupu (kód CPT) 81401. V Číně společnost BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc, silný partner společnosti Epigenomics AG, vyvinula vlastní test metylace genu SEPT9 se souhlasem společnosti Epigenomics AG.

2. Odhad velikosti vzorku

   Na základě rovnice N=Z2* (P (1-p))/E2 pro známou míru detekce pozitivity výzkumníci vypočítali počet vzorků potřebných pro zkoušku, kde N představuje velikost vzorku, Z je statistický parametr ( Z = 1,96 pro 95% interval spolehlivosti); E představuje chybu (v této studii bylo zvoleno 5 %) a P představuje pravděpodobnost (předpokládaná míra pozitivní detekce). Vyšetřovatelé zvolili hodnotu P 0,75 na základě existující literatury o citlivosti SEPT9. Počet případů CRC se vypočítá jako 288 na základě výše uvedené rovnice. Cílem vyšetřovatelů je shromáždit kompletní informace pro 300 případů kvůli neúplnosti informací a ztrátě sledování. atd. Na základě odhadu, že CRC tvoří 30 % vysoce rizikových ambulantních pacientů a hospitalizovaných pacientů v čínských nemocnicích, by celkový počet pacientů ve studii neměl být menší než 1000 případů. Cílem vyšetřovatelů je získat v této studii 1200 případů s ohledem na 20% ztrátu míry sledování.

   Konečný skutečný počet případů pro tuto studii byl 1031 v důsledku ztráty sledování, neúplného testu nebo klinických dat nebo vzorků, které nesplňovaly kritéria testu.

3. Předmětové seskupení

   Všichni pacienti nebudou seskupeni před odběrem krve pro test SEPT9 a vzorky krve budou odebrány všem subjektům, které splnily kritéria výběru. Všichni technici jsou slepí vůči klinickým informacím subjektů. Za účelem prozkoumání proveditelnosti společné detekce pomocí testu SEPT9 a dalších screeningových testů budou na základě vůle zúčastněných pacientů a posouzení lékařů provedeny testy karcinoembryonálního antigenu (CEA) a FIT. Tato část dat bude použita v retrospektivní analýze po dokončení studie.

   Po dokončení všech plánovaných testů budou všichni pacienti rozděleni do tří skupin na základě kolonoskopické diagnózy a patologie, skupina CRC, skupina prekanceróz a skupina jiných onemocnění, ve které skupinu CRC tvoří pacienti s CRC stadia 0-IV, skupina prekancerózních onemocnění zahrnuje pacienty s adenomem a polypy a skupina jiných onemocnění zahrnuje pacienty s jiným onemocněním střev, jinými rakovinami a subjekty bez známek onemocnění.

4. Zkušební řízení

   Školení bude dokončeno před zahájením zkoušky, včetně provozního postupu stanovení a použití souprav a nástrojů. Tato studie je randomizovaná, jednoduše zaslepená studie. Všichni pacienti by měli před odběrem krve 10 ml podepsat informovaný souhlas. Vzorky budou zpracovány a test SEPT9 bude proveden na základě pokynů pro uživatele. Všichni jedinci podstoupí kolonoskopii a/nebo patologické vyšetření k potvrzení diagnózy a o výsledcích testu SEPT9 se rozhodne na základě pokynů pro uživatele. Statistická analýza bude provedena na základě výsledků jak testu SEPT9, tak kolonoskopie a/nebo patologického vyšetření.

5. Odběr a skladování vzorků

1) kolekce vzorků:

1. vzorek by měl být odebrán ambulantním pacientům nebo hospitalizovaným pacientům a informace o vzorku by měly být zaznamenány do formulářů pro odběr vzorků.
2. odběr vzorku: 10 ml periferní krve (pouze dekoagulant K2EDTA).
3. aby byla zajištěna přesnost stanovení, odběr vzorku by měl být prováděn striktně na základě výše uvedených požadavků, jinak může ovlivnit přesnost stanovení.

2) způsob skladování a přepravy vzorků: Skladujte a přenášejte vzorky na základě návodu k použití soupravy

6, SEPT9 test

Test metylace genu SEPT9 (metoda fluorescenční sondy PCR) se skládá ze dvou kroků. Nejprve je pomocí soupravy pro zpracování plazmy extrahována bezbuněčná DNA v plazmě, následovaná bisulfitovou konverzí, při které bude nemethylovaný cytosin přeměněn, zatímco methylovaný cytosin nikoli. Za druhé, PCR v reálném čase s použitím bisulfitově konvertované DNA (bisDNA) jako templátu bude provedena pro stanovení amplifikace templátu. Činidlo blokující PCR a sondy specifické pro metylaci mohou spolupracovat na rozlišení mezi methylovanou a nemethylovanou DNA. Beta-aktin bude použit jako vnitřní kontrola pro hodnocení kvality plazmové DNA a validity PCR amplifikace. Pozitivní a negativní kontroly budou k dispozici v soupravě jako kontroly kvality a budou probíhat vždy souběžně se vzorky.

7, Analýza dat a statistika

Data pro test SEPT9 a data z kolonoskopie všech subjektů budou shromážděna a analyzována, budou vypočteny následující parametry:

Citlivost Specificita Konzistence pozitivní prediktivní hodnota (PPV) negativní prediktivní hodnota (NPV)

8, Etika

Rozpočtový plán klinického hodnocení bude před zahájením klinického hodnocení předložen k posouzení etické komisi zúčastněných nemocnic. Studie nebude zahájena bez schválení komisemi. Všechny subjekty před odběrem krve podepíší informovaný souhlas a budou informovány o použití plazmy a výsledcích testu.

9, Průběh výzkumu

2014.02-2014.04 Potvrzení protokolů klinických studií a školení personálu pro odběr vzorků a testování

2014.04-2014.08 Předložení žádosti o klinické hodnocení etické komisi ke schválení ve čtyřech nemocnicích

2014.08-2015.04 Začněte nábor pacientů a shromažďování obecných informací o subjektech

2014.10-2015.04 Odběr vzorků a testy

2015.04-2015.07 Sbírejte a sledujte kolonoskopické a/nebo patologické informace

2015.07-2015.09 Zpracování dat, statistiky a analýzy

10. 2015 Uzavření náboru pacientů a ukončení zkoušky

10, Rozpočet

Náklady zahrnují náklady na nábor 1200 subjektů, poplatky za pronájem vybavení, náklady na testovací materiál, poplatek za zpracování vzorků, mzdové náklady, náklady na kompenzaci pacientů, cestovní a konferenční náklady, poplatky za publikaci a duševní vlastnictví (IP). Všechny náklady uhradí BioChain, protože tento pokus je iniciován a organizován BioChainem.

11,Publikace a duševní vlastnictví

1. plánuje publikovat 2–3 články v časopisech indexovaných podle indexu science citation (SCI), 3–4 články v čínských domácích hlavních časopisech.
2. plán předložit jeden patent

12, Správa dat

Kvalita dat z klinických studií je základem pro hodnocení výsledků. Aby byla zajištěna reálnost a spolehlivost výsledků experimentu, stanovili vyšetřovatelé řadu principů správy dat. Vyšetřovatelé v této studii důkladně vysvětlí principy správy dat v následujícím ze složení a odpovědnosti Výboru pro správu dat a obsahu správy dat.

13.Výzkumný tým a personál

Aby se předešlo možným chybám způsobeným rozdílem ve výskytu onemocnění a poměrem pacientů v různých nemocnicích, budou pro nábor pacientů v této klinické studii vybrány čtyři nemocnice v Pekingu. Protože pacienti v těchto čtyřech nemocnicích pocházejí převážně ze severní Číny, studovaná populace je reprezentativní pro epidemiologii onemocnění v této části země. Zkoušky se zúčastní lékaři a technici z oddělení gastrointestinálních onemocnění, endoskopie a všeobecné chirurgie ze čtyř nemocnic, jsou to:

Peking Union Medical College Hospital (Peking) Pekingská vojenská všeobecná nemocnice (Peking) Cancer Hospital Čínská akademie lékařských věd (Peking) Peking Cancer Hospital (Peking)