Скрининг CRC с использованием mSEPT9 (метилированный септин 9) у населения Китая (RESEPT)

1. Задний план

   Колоректальный рак (КРР) является третьим по распространенности злокачественным новообразованием желудочно-кишечного тракта. Регулярный скрининг, раннее выявление и раннее лечение колоректального рака могут обеспечить лучшую профилактику и даже излечение. В настоящее время 60-70% пациентов с КРР не диагностируются до поздних стадий, и только 11,8% случаев выявляются на ранних стадиях. Поэтому необходимо срочно снизить смертность от КРР за счет повышения частоты раннего скрининга. В Китае в настоящее время для раннего скрининга CRC доступны анализ кала на скрытую кровь (FOBT) и колоноскопия. FOBT широко используется из-за его низкой стоимости и неинвазивности, однако частота ложноположительных результатов относительно высока из-за множества мешающих факторов. Более продвинутый FOBT, фекальный иммунохимический тест (FIT), значительно улучшил специфичность теста по сравнению с традиционным химическим методом, и его соответствие является высоким, но все еще подвержено влиянию других кишечных заболеваний, что приводит к низкой положительной прогностической ценности. Напротив, приверженность колоноскопии низкая из-за ее инвазивности, стоимости и риска осложнений.

   В последние годы анализ метилирования гена SEPT9 на основе плазмы оказался многообещающим методом раннего выявления CRC. Многие клинические исследования показали, что метилированный ген SEPT9 является полезным биомаркером для раннего выявления CRC. В настоящее время Epigenomics' Epi proColon 2.0 CE является единственным коммерчески доступным анализом метилирования гена SEPT9 во всем мире. Этот продукт получил одобрение сертификации CE Европейского Союза, китайского FDA и Аргентинского FDA. Компания завершила подачу основных клинических данных в FDA США, и ожидается, что вскоре она будет одобрена FDA США. Услуги, основанные на анализе метилирования гена SEPT9, также предоставляются в клинических лабораториях, таких как Quest, Arup, сопутствующие DX и gamma dynacare с общим кодом медицинской процедуры (код CPT) 81401. В Китае компания BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc, сильный партнер Epigenomics AG, разработала собственный анализ метилирования гена SEPT9 с согласия Epigenomics AG.

2. Оценка размера выборки

   Основываясь на уравнении N=Z2* (P (1-p))/E2 для известной частоты выявления положительных результатов, исследователи рассчитали количество образцов, необходимых для исследования, где N представляет собой размер выборки, Z - статистический параметр ( Z=1,96 для 95% доверительного интервала); E представляет ошибку (в этом исследовании было выбрано 5%), а P представляет вероятность (предполагаемая частота положительных результатов). Исследователи выбрали 0,75 для значения P на основании существующих литературных источников о чувствительности SEPT9. Количество случаев CRC рассчитывается как 288 на основе приведенного выше уравнения. Следователи стремятся собрать полную информацию по 300 делам из-за неполноты информации и потери отслеживания. и т.д. Исходя из оценки, согласно которой 30% амбулаторных и стационарных больных высокого риска в больницах Китая приходится на КРР, общее число пациентов в исследовании должно быть не менее 1000 случаев. Исследователи стремятся включить в это исследование 1200 случаев с учетом 20%-ной потери последующего наблюдения.

   Окончательное фактическое количество случаев для этого испытания составило 1031 из-за потери отслеживания, неполных тестовых или клинических данных или образцов, которые не соответствовали критериям тестирования.

3. Тематическая группировка

   Все пациенты не будут группироваться перед забором крови для анализа SEPT9, и образцы крови будут получены для всех субъектов, которые соответствуют критериям отбора. Все техники слепы к клинической информации об испытуемых. Чтобы исследовать возможность совместного обнаружения с помощью анализа SEPT9 и других скрининговых тестов, тесты на карциноэмбриональный антиген (CEA) и FIT будут проводиться по желанию участвующих пациентов и по решению врачей. Эта часть данных будет использована в ретроспективном анализе после завершения исследования.

   Когда все запланированные тесты будут завершены, все субъекты будут разделены на три группы на основе диагноза и патологии колоноскопии, группы CRC, группы предраковых заболеваний и группы других заболеваний, в которых группа CRC состоит из пациентов с CRC стадии 0-IV, группа предраковых заболеваний включает пациентов с аденомой и полипами, а группа других заболеваний включает пациентов с другими заболеваниями кишечника, другими видами рака и субъектов без признаков заболевания.

4. Судебная процедура

   Обучение будет завершено до начала испытания, включая процедуру проведения анализа и использование наборов и инструментов. Это исследование является рандомизированным, простым слепым исследованием. Все пациенты должны подписать информированное согласие перед забором крови 10 мл. Образцы будут обработаны, и анализ SEPT9 будет выполнен на основе инструкций для пользователей. Все субъекты пройдут колоноскопию и/или патологическое исследование для подтверждения диагноза, а результаты анализа SEPT9 будут определены на основе инструкций для пользователей. Статистический анализ будет проводиться на основе результатов как анализа SEPT9, так и колоноскопии и/или патологоанатомического исследования.

5. Сбор и хранение образцов

1) сбор образцов:

1. образец должен быть взят у амбулаторных или стационарных пациентов, и информация о образце должна быть записана в формах сбора образцов.
2. забор образца: 10 мл периферической крови (только декоагулянт K2EDTA).
3. чтобы обеспечить точность анализа, сбор образцов должен выполняться строго в соответствии с вышеуказанными требованиями, в противном случае это может повлиять на точность анализа.

2) метод хранения и транспортировки образцов: Храните и переносите образцы в соответствии с инструкциями по использованию набора.

6, анализ SEPT9

Анализ метилирования гена SEPT9 (метод флуоресцентного зонда ПЦР) состоит из двух этапов. Во-первых, внеклеточная ДНК из плазмы извлекается с использованием набора для обработки плазмы, после чего следует бисульфитная конверсия, при которой неметилированный цитозин будет преобразован, а метилированный цитозин - нет. Во-вторых, ПЦР в реальном времени с использованием бисульфит-конвертированной ДНК (бисДНК) в качестве матрицы будет выполняться для определения амплификации матрицы. Агент, блокирующий ПЦР, и зонды, специфичные для метилирования, могут работать вместе, чтобы различать метилированную и неметилированную ДНК. Бета-актин будет использоваться в качестве внутреннего контроля для оценки качества ДНК плазмы и достоверности ПЦР-амплификации. Положительный и отрицательный контроли будут предоставлены в наборе в качестве контроля качества и каждый раз будут запускаться параллельно с образцами.

7, анализ данных и статистика

Будут собраны и проанализированы данные для анализа SEPT9 и данные колоноскопии всех субъектов, будут рассчитаны следующие параметры:

Чувствительность Специфичность Стабильность положительная прогностическая ценность (PPV) отрицательная прогностическая ценность (NPV)

8, этика

Бюджетный план клинического исследования будет представлен комитету по этике участвующих больниц на рассмотрение до начала клинического исследования. Исследование не будет начато без одобрения комитетов. Все субъекты подпишут информированное согласие перед забором крови и будут проинформированы об использовании плазмы и результатах теста.

9, Ход исследований

2014.02-2014.04 Утверждение протоколов клинических испытаний и обучение персонала для сбора и тестирования образцов

2014.04-2014.08 Подача заявки на клиническое исследование в комитет по этике для утверждения в четырех больницах

2014.08-2015.04 Начать набор пациентов и сбор общей информации об субъектах

2014.10-2015.04 Сбор проб и тесты

2015.04-2015.07 Собирайте и отслеживайте информацию о колоноскопии и/или патологии

2015.07-2015.09 Обработка данных, статистика и анализ

2015.10 Завершение набора пациентов и завершение исследования

10, бюджет

Затраты включают расходы на набор 1200 испытуемых, плату за аренду оборудования, стоимость тестовых материалов, плату за обработку образцов, затраты на рабочую силу, компенсационные расходы пациентов, расходы на поездки и конференции, плату за публикацию и интеллектуальную собственность (ИС). Все расходы будут покрыты BioChain, поскольку это испытание инициировано и организовано BioChain.

11, Публикации и интеллектуальная собственность

1. планируется опубликовать 2-3 статьи в журналах, индексируемых индексом научного цитирования (SCI), 3-4 статьи в профильных журналах Китая.
2. планирую подать один патент

12, Управление данными

Качество данных клинических испытаний является основой для оценки результатов. Чтобы гарантировать реальность и надежность результатов эксперимента, исследователи установили ряд принципов управления данными. Исследователи подробно объяснят принципы управления данными в этом исследовании, исходя из состава и ответственности Комитета по управлению данными и содержания управления данными.

13. Исследовательская группа и персонал

Во избежание возможных ошибок, вызванных разницей в частоте заболеваний и соотношении пациентов в разных больницах, для набора пациентов в это клиническое исследование будут выбраны четыре больницы в Пекине. Поскольку пациенты в этих четырех больницах в основном из северного Китая, исследуемая популяция является репрезентативной для эпидемиологии заболевания в этой части страны. В исследовании примут участие врачи и техники из отделений желудочно-кишечных заболеваний, эндоскопии и общей хирургии из четырех больниц, а именно:

Госпиталь Пекинского союзного медицинского колледжа (Пекин) Пекинский военный госпиталь общего профиля (Пекин) Онкологический госпиталь Китайской академии медицинских наук (Пекин) Пекинский онкологический госпиталь (Пекин)