Triagem de CRC usando mSEPT9 (septina 9 metilada) na população chinesa (RESEPT)

1. Fundo

   O câncer colorretal (CCR) é a terceira neoplasia maligna mais comum do sistema gastrointestinal. A triagem regular, a detecção precoce e o tratamento precoce do câncer colorretal podem alcançar uma melhor prevenção e até mesmo a cura. Atualmente, 60%-70% dos pacientes com CCR não são diagnosticados até os estágios avançados e apenas 11,8% dos casos são detectados nos estágios iniciais. É, portanto, urgente reduzir a mortalidade por CCR, melhorando a taxa de rastreio precoce. Na China, o teste de sangue oculto nas fezes (FOBT) e a colonoscopia estão disponíveis atualmente para triagem precoce de CRC. O FOBT é amplamente utilizado devido ao seu baixo custo e não invasivo, porém, sua taxa de falsos positivos é relativamente alta devido a muitos fatores interferentes. O mais avançado FOBT, teste imunoquímico fecal (FIT), melhorou muito a especificidade do teste em comparação com o método químico tradicional e sua adesão é alta, mas ainda está sujeito à influência de outras doenças intestinais, levando a baixo valor preditivo positivo. Em contrapartida, a adesão à colonoscopia é baixa devido à sua invasividade, custo e risco de complicações.

   Nos últimos anos, o ensaio de metilação do gene SEPT9 baseado em plasma provou ser um método promissor para a detecção precoce de CRC. Muitos estudos clínicos demonstraram que o gene SEPT9 metilado é um biomarcador útil para detecção precoce de CRC. No momento, o Epi proColon 2.0 CE da Epigenomics é o único ensaio comercializado de metilação do gene SEPT9 globalmente. Este produto obteve a aprovação da certificação CE da União Européia, FDA da China e FDA da Argentina. Ele concluiu o envio de dados clínicos importantes para o FDA dos EUA, com expectativa razoável de aprovação do FDA dos EUA em breve. Os serviços baseados no ensaio de metilação do gene SEPT9 também são fornecidos em laboratórios clínicos como quest, Arup, companion to DX e gamma dynacare com o código de procedimento médico comum (código CPT) 81401. Na China, a BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc, um forte parceiro da Epigenomics AG, desenvolveu seu próprio ensaio de metilação do gene SEPT9 com o acordo da Epigenomics AG.

2. Estimativa do tamanho da amostra

   Com base na equação N=Z2* (P (1-p))/E2 para taxa de detecção de positividade conhecida, os investigadores calcularam o número de amostras necessárias para o ensaio, em que N representa o tamanho da amostra, Z é um parâmetro estatístico ( Z=1,96 para intervalo de confiança de 95%); E representa o erro (5% foi escolhido neste estudo) e P representa a probabilidade (taxa de detecção positiva putativa). Os investigadores escolheram 0,75 para o valor P com base na literatura existente sobre a sensibilidade do SEPT9. O número de casos CRC é calculado como 288 com base na equação acima. Os investigadores pretendem coletar informações completas para 300 casos devido à incompletude das informações e perda de rastreamento. etc. Com base na estimativa de que o CRC representa 30% dos pacientes ambulatoriais e internados de alto risco em hospitais chineses, o número total de pacientes no estudo não deve ser inferior a 1.000 casos. Os investigadores pretendem recrutar 1.200 casos neste estudo, levando em consideração uma taxa de perda de acompanhamento de 20%.

   O número real final de casos para este estudo foi 1.031, devido à perda de rastreamento, teste incompleto ou dados clínicos ou amostras que não atenderam aos critérios do teste.

3. Agrupamento de assunto

   Todos os pacientes não serão agrupados antes da coleta de sangue para o ensaio SEPT9, e amostras de sangue serão obtidas para todos os indivíduos que atenderam aos critérios de seleção. Todos os técnicos estão cegos para as informações clínicas dos sujeitos. A fim de investigar a viabilidade da detecção conjunta com o ensaio SEPT9 e outros testes de triagem, os testes de antígeno carcinoembrionário (CEA) e FIT serão realizados de acordo com a vontade dos pacientes participantes e o julgamento dos médicos. Esta parte dos dados será utilizada em uma análise retrospectiva após a conclusão do estudo.

   Quando todos os testes planejados forem concluídos, todos os indivíduos serão divididos em três grupos com base no diagnóstico e patologia da colonoscopia, o grupo CRC, o grupo de doenças pré-cancerosas e outro grupo de doenças, no qual o grupo CRC consiste em pacientes com estágio 0-IV CRC, o grupo de doenças pré-cancerosas inclui pacientes com adenoma e pólipos, e o grupo de outras doenças inclui pacientes com outras doenças intestinais, outros cânceres e indivíduos sem evidência de doença.

4. procedimento de julgamento

   O treinamento será concluído antes do início do ensaio, incluindo o procedimento de operação do ensaio e o uso de kits e instrumentos. Este estudo é um estudo randomizado, simples-cego. Todos os pacientes devem assinar o consentimento informado antes da coleta de sangue de 10ml. As amostras serão processadas e o ensaio SEPT9 será realizado com base nas instruções para os usuários. Todos os indivíduos receberão colonoscopia e/ou exame patológico para confirmar o diagnóstico, e os resultados do ensaio SEPT9 serão decididos com base nas instruções para os usuários. A análise estatística será realizada com base nos resultados do ensaio SEPT9 e colonoscopia e/ou exame patológico.

5. Coleta e armazenamento de amostras

1) coleta de amostras:

1. a amostra deve ser coletada de pacientes ambulatoriais ou internados e as informações da amostra devem ser registradas nos formulários de coleta de amostras.
2. coleta de amostra: 10 mL de sangue periférico (somente decoagulante K2EDTA).
3. a fim de garantir a precisão do ensaio, a coleta de amostras deve ser realizada estritamente com base nos requisitos acima, caso contrário, pode afetar a precisão do ensaio.

2) método de armazenamento e transporte de amostras: armazene e transfira as amostras com base nas instruções de uso do kit

6, ensaio SEPT9

O ensaio de metilação do gene SEPT9 (método de sonda de fluorescência de PCR) é composto de duas etapas. Em primeiro lugar, o DNA livre de células no plasma é extraído usando o kit de processamento de plasma, seguido pela conversão de bissulfito, na qual a citosina não metilada será convertida enquanto a citosina metilada não. Em segundo lugar, a PCR em tempo real usando DNA convertido em bissulfito (bisDNA) como molde será realizada para determinar a amplificação do molde. O agente bloqueador de PCR e as sondas específicas de metilação podem trabalhar juntos para distinguir entre DNA metilado e não metilado. A beta-actina será utilizada como controle interno para avaliar a qualidade do DNA plasmático e a validade da amplificação por PCR. Os controles positivos e negativos serão fornecidos no kit como controles de qualidade e serão executados paralelamente com as amostras todas as vezes.

7, Análise de dados e estatísticas

Os dados do ensaio SEPT9 e os dados da colonoscopia de todos os indivíduos serão coletados e analisados, os seguintes parâmetros serão calculados:

Sensibilidade Especificidade Consistência valor preditivo positivo (VPP) valor preditivo negativo (VPN)

8, Ética

O plano de orçamento para o ensaio clínico será submetido ao comitê de ética dos hospitais participantes para revisão antes do início do ensaio clínico. O estudo não será iniciado sem a aprovação dos comitês. Todos os indivíduos assinarão o consentimento informado antes da coleta de sangue e serão informados sobre o uso do plasma e os resultados do teste.

9, Progresso da pesquisa

2014.02-2014.04 Confirmação de protocolos de ensaios clínicos e treinamento de pessoal para coleta e teste de amostras

2014.04-2014.08 Submissão do pedido de ensaio clínico ao comitê de ética para aprovação em quatro hospitais

2014.08-2015.04 Inicie o recrutamento de pacientes e a coleta de informações gerais dos indivíduos

2014.10-2015.04 Coleta de amostras e testes

2015.04-2015.07 Colete e rastreie as informações de colonoscopia e/ou patologia

2015.07-2015.09 Processamento de dados, estatísticas e análise

2015.10 Encerramento do recrutamento de pacientes e finalização do estudo

10, Orçamento

Os custos incluem despesas de recrutamento de 1.200 indivíduos, encargos de aluguel de equipamentos, custos de materiais de teste, taxa de processamento de amostras, custos de mão-de-obra, custos de compensação de pacientes, custos de viagens e conferências, taxas de publicação e propriedade intelectual (IP). Todas as despesas serão cobertas pela BioChain, já que este teste é iniciado e organizado pela BioChain.

11,Publicação e propriedades intelectuais

1. planeja publicar 2-3 artigos em periódicos indexados pelo índice de citações científicas (SCI), 3-4 artigos em periódicos centrais chineses.
2. planeja enviar uma patente

12, gerenciamento de dados

A qualidade dos dados dos ensaios clínicos é a base para a avaliação dos resultados. Para garantir a realidade e a confiabilidade dos resultados do experimento, os investigadores estabeleceram uma série de princípios de gerenciamento de dados. Os investigadores explicarão detalhadamente os princípios de gerenciamento de dados neste estudo a seguir, da composição e responsabilidade do Comitê de gerenciamento de dados e conteúdo do gerenciamento de dados.

13. Equipe e pessoal de pesquisa

A fim de evitar os possíveis erros causados ​​pela diferença na incidência da doença e proporção de pacientes em diferentes hospitais, quatro hospitais em Pequim serão escolhidos para o recrutamento de pacientes neste ensaio clínico. Como os pacientes desses quatro hospitais são principalmente do norte da China, a população do estudo é representativa para a epidemiologia da doença nessa parte do país. Participarão do julgamento médicos e técnicos do departamento de doenças gastrointestinais, endoscopia e cirurgia geral dos quatro hospitais, são eles:

Peking Union Medical College Hospital (Pequim) Hospital Geral Militar de Pequim (Pequim) Hospital do Câncer Academia Chinesa de Ciências Médicas (Pequim) Hospital do Câncer de Pequim (Pequim)