CRC-screening ved bruk av mSEPT9 (metylert septin 9) i kinesisk befolkning (RESEPT)

1. Bakgrunn

   Kolorektal kreft (CRC) er den tredje vanligste maligniteten i mage-tarmsystemet. Regelmessig screening, tidlig oppdagelse og tidlig behandling av tykktarmskreft kan oppnå bedre forebygging og til og med helbredelse. Foreløpig blir 60-70 % av CRC-pasientene ikke diagnostisert før sent, og bare 11,8 % av tilfellene oppdages på et tidlig stadium. Det haster derfor å redusere CRC-dødeligheten ved å forbedre den tidlige screeningsraten. I Kina er fekal okkult blodprøve (FOBT) og koloskopi tilgjengelig for tidlig CRC-screening. FOBT er mye brukt på grunn av lave kostnader og ikke-invasivitet, men dens falske positive rate er relativt høy på grunn av mange forstyrrende faktorer. Den mer avanserte FOBT, fecal immunochemical test (FIT), har forbedret testspesifisiteten betydelig sammenlignet med den tradisjonelle kjemiske metoden, og dens etterlevelse er høy, men er fortsatt gjenstand for påvirkning av andre tarmsykdommer, noe som fører til lav positiv prediktiv verdi. Derimot er etterlevelsen for koloskopi lav på grunn av dens invasivitet, kostnad og risiko for komplikasjoner.

   De siste årene har den plasmabaserte SEPT9-genmetyleringsanalysen vist seg å være en lovende metode for tidlig påvisning av CRC. Mange kliniske studier har vist at det metylerte SEPT9-genet er en nyttig biomarkør for tidlig CRC-deteksjon. For tiden er Epigenomics' Epi proColon 2.0 CE den eneste kommersialiserte analysen av SEPT9-genmetylering globalt. Dette produktet har fått godkjenning fra EUs CE-sertifisering, den kinesiske FDA og Argentina FDA. Den har fullført innsending av viktige kliniske data til US FDA, med rimelige forventninger til US FDA-godkjenning snart. Tjenester basert på SEPT9-genmetyleringsanalysen tilbys også i kliniske laboratorier som quest, Arup, companion to DX og gamma dynacare med den vanlige medisinske prosedyrekoden (CPT-kode) 81401. I Kina har BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc, en sterk partner av Epigenomics AG, utviklet sin egen SEPT9-genmetyleringsanalyse med avtale fra Epigenomics AG.

2. Estimering av prøvestørrelse

   Basert på ligningen N=Z2* (P (1-p))/E2 for kjent positivitetsdeteksjonsrate, beregnet etterforskerne antall prøver som trengs for forsøket, der N representerer prøvestørrelsen, Z er en statistisk parameter ( Z=1,96 for 95 % konfidensintervall); E representerer feilen (5 % ble valgt i denne studien), og P representerer sannsynligheten (antatt positiv deteksjonsrate). Etterforskerne velger 0,75 for P-verdi basert på eksisterende litteratur om SEPT9-sensitivitet. Antall CRC-tilfeller er beregnet til 288 basert på ligningen ovenfor. Etterforskerne tar sikte på å samle inn fullstendig informasjon for 300 saker på grunn av ufullstendig informasjon og tap av sporing. etc. Basert på estimeringen om at CRC utgjør 30 % av polikliniske og inneliggende pasienter med høy risiko på kinesiske sykehus, bør det totale antallet pasienter i forsøket være ikke mindre enn 1000 tilfeller. Etterforskerne tar sikte på å rekruttere 1200 saker i denne rettssaken, tatt i betraktning 20 % tap av oppfølgingsrate.

   Det endelige faktiske antallet tilfeller for denne studien var 1031 på grunn av tap av sporing, ufullstendige test- eller kliniske data, eller prøver som ikke oppfylte testkriteriene.

3. Faggruppering

   Alle pasienter vil ikke bli gruppert før blodprøvetaking for SEPT9-analyse, og blodprøver vil bli tatt for alle forsøkspersoner som oppfylte utvalgskriteriene. Alle teknikerne er blindet for den kliniske informasjonen til forsøkspersonene. For å undersøke muligheten for felles deteksjon med SEPT9-analyse og andre screeningtester, vil karsino-embryonalt antigen (CEA) og FIT-tester bli utført etter deltakende pasienters vilje og legens skjønn. Denne delen av dataene vil bli brukt i en retrospektiv analyse etter at forsøket er fullført.

   Når alle planlagte tester er ferdige, vil alle forsøkspersonene deles inn i tre grupper basert på koloskopidiagnose og patologi, CRC-gruppen, precancerøs sykdomsgruppen og annen sykdomsgruppe, hvor CRC-gruppen består av pasienter med stadium 0-IV CRC, den precancerøse sykdomsgruppen inkluderer pasienter med adenom og polypper, og annen sykdomsgruppe inkluderer pasienter med annen tarmsykdom, andre kreftformer og personer uten tegn på sykdom.

4. Prøveprosedyre

   Opplæringen vil bli fullført før prøven starter, inkludert operasjonsprosedyren for analysen og bruk av sett og instrumenter. Denne studien er en randomisert, enkeltblind studie. Alle pasienter bør signere det informerte samtykket før blodprøvetaking på 10 ml. Prøver vil bli behandlet og SEPT9-analysen vil bli utført basert på instruksjonene for brukere. Alle forsøkspersoner vil motta koloskopi og/eller patologisk undersøkelse for å bekrefte diagnosen, og resultatene for SEPT9-analysen vil bli bestemt basert på instruksjonene til brukerne. Statistisk analyse vil bli utført basert på resultatene fra både SEPT9-analyse og koloskopi og/eller patologisk undersøkelse.

5. Prøveinnsamling og oppbevaring

1) prøvesamling:

1. prøven skal samles inn fra polikliniske eller inneliggende pasienter, og prøveinformasjonen bør registreres i prøveinnsamlingsskjemaer.
2. prøvetaking: 10 mL perifert blod (kun K2EDTA-dekoagulant).
3. For å sikre nøyaktigheten av analysen, bør prøvetaking utføres strengt basert på kravene ovenfor, ellers kan det påvirke nøyaktigheten til analysen.

2) prøveoppbevaring og transportmetode: Oppbevar og overfør prøvene basert på bruksanvisningen til settet

6, SEPT9-analyse

SEPT9-genmetyleringsanalyse (PCR-fluorescensprobemetode) består av to trinn. For det første ekstraheres det cellefrie DNAet i plasma ved hjelp av plasmabehandlingssettet, etterfulgt av bisulfittkonvertering, der det umetylerte cytosinet vil bli omdannet mens det metylerte cytosinet ikke vil. For det andre vil sanntids-PCR ved bruk av bisulfitt-konvertert DNA (bisDNA) som mal bli utført for å bestemme amplifikasjonen av mal. PCR-blokkerende middel og metyleringsspesifikke prober kan fungere sammen for å skille mellom metylert og umetylert DNA. Beta-aktin vil bli brukt som intern kontroll for å evaluere plasma-DNA-kvaliteten og gyldigheten av PCR-amplifikasjon. Positive og negative kontroller vil bli levert i settet som kvalitetskontroller og vil bli kjørt parallelt med prøver hver gang.

7, Dataanalyse og statistikk

Dataene for SEPT9-analysen og dataene fra koloskopi av alle forsøkspersoner vil bli samlet inn og analysert, følgende parametere vil bli beregnet:

Sensitivitet Spesifisitet Konsistens positiv prediktiv verdi (PPV) negativ prediktiv verdi (NPV)

8, Etikk

Budsjettplanen for den kliniske utprøvingen vil bli forelagt den etiske komiteen ved deltakende sykehus for vurdering før den kliniske utprøvingen starter. Studien vil ikke bli igangsatt med mindre komiteene godkjenner det. Alle forsøkspersoner vil signere det informerte samtykket før blodprøvetaking, og vil bli informert om bruken av plasma og testresultatene.

9, Forskningsfremgang

2014.02-2014.04 Bekreftelse av kliniske utprøvingsprotokoller og opplæring av personell for prøvetaking og test

2014.04-2014.08 Innlevering av søknad om klinisk utprøving til etisk komité for godkjenning i fire sykehus

2014.08-2015.04 Starte pasientrekruttering og innsamling av generell informasjon om fag

2014.10-2015.04 Prøveinnsamling og tester

2015.04-2015.07 Samle inn og spor informasjon om koloskopi og/eller patologi

2015.07-2015.09 Databehandling, statistikk og analyse

2015.10 Avslutning av pasientrekruttering og ferdigstillelse av forsøket

10, Budsjett

Kostnadene inkluderer utgifter til rekruttering av 1200 forsøkspersoner, utstyrsleie, testmaterialekostnader, prøvebehandlingsgebyr, lønnskostnader, pasientkompensasjonskostnader, reise- og konferansekostnader, publisering og immaterielle (IP) avgifter. Alle utgifter dekkes av BioChain, da denne prøven er initiert og organisert av BioChain.

11, Publikasjon og åndsverk

1. planlegger å publisere 2-3 artikler i science citation index (SCI)-indekserte tidsskrifter, 3-4 artikler i kinesiske innenlandske kjernetidsskrifter.
2. planlegger å sende inn ett patent

12, Databehandling

Kvaliteten på data fra kliniske forsøk er grunnlaget for evaluering av resultater. For å sikre virkeligheten og påliteligheten til eksperimentresultatene, satte etterforskerne opp en rekke databehandlingsprinsipper. Etterforskerne vil forklare datahåndteringsprinsippene i denne studien grundig i det følgende fra sammensetningen og ansvaret til Data Management Committee og innholdet i datahåndteringen.

13.Forskningsteam og personell

For å unngå mulige feil forårsaket av forskjeller i sykdomsforekomst og forhold mellom pasienter på forskjellige sykehus, vil fire sykehus i Beijing bli valgt for pasientrekruttering i denne kliniske studien. Siden pasientene ved disse fire sykehusene hovedsakelig er fra Nord-Kina, er studiepopulasjonen representativ for sykdomsepidemiologi i denne delen av landet. Leger og teknikere fra avdeling for gastrointestinale sykdommer, endoskopi og generell kirurgi fra de fire sykehusene vil delta i forsøket, de er:

Peking Union Medical College Hospital (Beijing) Beijing Military General Hospital (Beijing) Cancer Hospital Chinese Academy of Medical Sciences (Beijing) Beijing Cancer Hospital (Beijing)