CRC-Screening mit mSEPT9 (methyliertes Septin 9) in der chinesischen Bevölkerung (RESEPT)

1. Hintergrund

   Darmkrebs (CRC) ist die dritthäufigste bösartige Erkrankung des Magen-Darm-Systems. Durch regelmäßiges Screening, Früherkennung und frühzeitige Behandlung von Darmkrebs kann eine bessere Vorbeugung und sogar Heilung erreicht werden. Derzeit werden 60–70 % der CRC-Patienten erst im Spätstadium diagnostiziert und nur 11,8 % der Fälle werden im Frühstadium erkannt. Es ist daher dringend erforderlich, die CRC-Mortalität durch eine Verbesserung der Früherkennungsrate zu senken. In China sind derzeit ein Test auf okkultes Blut im Stuhl (FOBT) und eine Koloskopie für das frühe CRC-Screening verfügbar. FOBT ist aufgrund seiner geringen Kosten und Nicht-Invasivität weit verbreitet, seine Falsch-Positiv-Rate ist jedoch aufgrund vieler Störfaktoren relativ hoch. Der fortschrittlichere FOBT, der fäkale immunchemische Test (FIT), hat die Testspezifität im Vergleich zur traditionellen chemischen Methode stark verbessert und seine Compliance ist hoch, unterliegt jedoch immer noch dem Einfluss anderer Darmerkrankungen, was zu einem geringen positiven Vorhersagewert führt. Im Gegensatz dazu ist die Compliance für die Koloskopie aufgrund ihrer Invasivität, der Kosten und des Komplikationsrisikos gering.

   Der plasmabasierte SEPT9-Genmethylierungsassay hat sich in den letzten Jahren als vielversprechende Methode zur Früherkennung von CRC erwiesen. Viele klinische Studien haben gezeigt, dass das methylierte SEPT9-Gen ein nützlicher Biomarker für die frühe CRC-Erkennung ist. Derzeit ist Epigenomics' Epi proColon 2.0 CE der weltweit einzige kommerzialisierte Assay für die SEPT9-Genmethylierung. Dieses Produkt hat die Zulassung der CE-Zertifizierung der Europäischen Union, der chinesischen FDA und der argentinischen FDA erhalten. Das Unternehmen hat die Einreichung wichtiger klinischer Daten bei der US-amerikanischen FDA abgeschlossen und erwartet die baldige Zulassung durch die US-amerikanische FDA. Auf dem SEPT9-Genmethylierungsassay basierende Dienstleistungen werden auch in klinischen Labors wie Quest, Arup, Companion to DX und Gamma Dynacare mit dem Common Medical Procedure Code (CPT-Code) 81401 angeboten. In China hat BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc, ein starker Partner der Epigenomics AG, mit Zustimmung der Epigenomics AG einen eigenen SEPT9-Genmethylierungsassay entwickelt.

2. Schätzung der Stichprobengröße

   Basierend auf der Gleichung N=Z2* (P(1-p))/E2 für die bekannte Positivitätserkennungsrate berechneten die Ermittler die Anzahl der für die Studie benötigten Proben, wobei N die Probengröße darstellt, Z ein statistischer Parameter ist ( Z = 1,96 für 95 % Konfidenzintervall); E stellt den Fehler dar (in dieser Studie wurden 5 % gewählt) und P stellt die Wahrscheinlichkeit dar (mutmaßliche positive Erkennungsrate). Die Forscher wählten 0,75 für den P-Wert auf der Grundlage bestehender Literatur zur SEPT9-Sensitivität. Die Anzahl der CRC-Fälle wird basierend auf der obigen Gleichung als 288 berechnet. Die Ermittler zielen darauf ab, vollständige Informationen für 300 Fälle aufgrund von Unvollständigkeit der Informationen und Verfolgungsverlust zu sammeln. usw. Basierend auf der Schätzung, dass CRC 30 % der ambulanten und stationären Hochrisikopatienten in chinesischen Krankenhäusern ausmachen, sollte die Gesamtzahl der Patienten in der Studie nicht weniger als 1000 Fälle betragen. Die Ermittler zielen darauf ab, 1200 Fälle in dieser Studie zu rekrutieren, unter Berücksichtigung von 20 % Verlust der Follow-up-Rate.

   Die endgültige tatsächliche Fallzahl für diese Studie betrug 1031, aufgrund von Verlust der Nachverfolgung, unvollständiger Test- oder klinischer Daten oder Proben, die die Testkriterien nicht erfüllten.

3. Themengruppierung

   Alle Patienten werden vor der Blutentnahme für den SEPT9-Test nicht gruppiert, und Blutproben werden von allen Probanden entnommen, die die Auswahlkriterien erfüllt haben. Alle Techniker sind gegenüber den klinischen Informationen der Probanden blind. Um die Machbarkeit eines gemeinsamen Nachweises mit dem SEPT9-Assay und anderen Screening-Tests zu untersuchen, werden karzino-embryonale Antigen- (CEA) und FIT-Tests nach dem Willen der teilnehmenden Patienten und dem Urteil der Ärzte durchgeführt. Dieser Teil der Daten wird in einer retrospektiven Analyse nach Abschluss der Studie verwendet.

   Wenn alle geplanten Tests abgeschlossen sind, werden alle Probanden basierend auf der Diagnose und Pathologie der Koloskopie in drei Gruppen eingeteilt, die CRC-Gruppe, die Gruppe mit präkanzerösen Erkrankungen und die Gruppe mit anderen Erkrankungen, wobei die CRC-Gruppe aus Patienten mit CRC im Stadium 0-IV besteht. die Gruppe der Präkanzerosen umfasst Patienten mit Adenomen und Polypen, und die Gruppe der anderen Erkrankungen umfasst Patienten mit anderen Darmerkrankungen, anderen Krebsarten und Subjekte ohne Anzeichen einer Krankheit.

4. Probeverfahren

   Die Schulung wird abgeschlossen sein, bevor die Studie beginnt, einschließlich des Betriebsverfahrens des Assays und der Verwendung von Kits und Instrumenten. Diese Studie ist eine randomisierte, einfach verblindete Studie. Alle Patienten sollten vor der Blutentnahme von 10 ml die Einverständniserklärung unterschreiben. Die Proben werden verarbeitet und der SEPT9-Assay wird gemäß den Anweisungen für die Benutzer durchgeführt. Alle Probanden erhalten eine Koloskopie und/oder eine pathologische Untersuchung, um die Diagnose zu bestätigen, und die Ergebnisse für den SEPT9-Test werden auf der Grundlage der Anweisungen für die Benutzer entschieden. Die statistische Analyse wird basierend auf den Ergebnissen sowohl des SEPT9-Assays als auch der Koloskopie und/oder der pathologischen Untersuchung durchgeführt.

5. Probenentnahme und -aufbewahrung

1) Mustersammlung:

1. Proben sollten von ambulanten oder stationären Patienten entnommen werden, und die Probeninformationen sollten in Probenentnahmeformularen erfasst werden.
2. Probenentnahme: 10 ml peripheres Blut (nur K2EDTA-Dekoagulans).
3. Um die Genauigkeit des Assays zu gewährleisten, sollte die Probenentnahme strikt auf der Grundlage der oben genannten Anforderungen durchgeführt werden, da dies sonst die Genauigkeit des Assays beeinträchtigen kann.

2) Methode zur Probenlagerung und zum Transport: Proben gemäß den Gebrauchsanweisungen des Kits lagern und transportieren

6, SEPT9-Assay

Der SEPT9-Genmethylierungsassay (PCR-Fluoreszenzsondenmethode) besteht aus zwei Schritten. Zunächst wird die zellfreie DNA im Plasma mit dem Plasma Processing Kit extrahiert, gefolgt von der Bisulfit-Konvertierung, bei der das unmethylierte Cytosin umgewandelt wird, das methylierte Cytosin jedoch nicht. Zweitens wird eine Echtzeit-PCR unter Verwendung von bisulfitkonvertierter DNA (bisDNA) als Matrize durchgeführt, um die Amplifikation der Matrize zu bestimmen. PCR-Blocker und methylierungsspezifische Sonden können zusammenarbeiten, um zwischen methylierter und unmethylierter DNA zu unterscheiden. Beta-Aktin wird als interne Kontrolle verwendet, um die Plasma-DNA-Qualität und die Gültigkeit der PCR-Amplifikation zu bewerten. Positiv- und Negativkontrollen sind im Kit als Qualitätskontrollen enthalten und werden jedes Mal parallel zu den Proben mitgeführt.

7, Datenanalyse und Statistiken

Die Daten für den SEPT9-Assay und die Daten der Koloskopie aller Probanden werden gesammelt und analysiert, die folgenden Parameter werden berechnet:

Sensitivität Spezifität Konsistenz positiver prädiktiver Wert (PPV) negativer prädiktiver Wert (NPV)

8, Ethik

Der Budgetplan für die klinische Prüfung wird der Ethikkommission der teilnehmenden Krankenhäuser vor Beginn der klinischen Prüfung zur Prüfung vorgelegt. Die Studie wird erst nach Genehmigung durch die Ausschüsse eingeleitet. Alle Probanden unterschreiben vor der Blutentnahme die Einverständniserklärung und werden über die Verwendung von Plasma und die Testergebnisse informiert.

9, Forschungsfortschritt

2014.02-2014.04 Bestätigung der klinischen Versuchsprotokolle und Schulung des Personals für Probenentnahme und -test

2014.04-2014.08 Einreichung des Antrags auf klinische Prüfung bei der Ethikkommission zur Genehmigung in vier Krankenhäusern

2014.08-2015.04 Beginnen Sie mit der Patientenrekrutierung und der Sammlung allgemeiner Informationen der Probanden

2014.10-2015.04 Probenentnahme und Tests

2015.04-2015.07 Sammeln und verfolgen Sie die Koloskopie- und/oder Pathologieinformationen

2015.07-2015.09 Datenverarbeitung, Statistik und Analyse

10.2015 Abschluss der Patientenrekrutierung und Abschluss der Studie

10, Haushalt

Die Kosten beinhalten Ausgaben für die Rekrutierung von 1200 Probanden, Gebühren für Gerätemiete, Testmaterialkosten, Probenbearbeitungsgebühr, Arbeitskosten, Patientenentschädigungskosten, Reise- und Konferenzkosten, Veröffentlichungsgebühren und Gebühren für geistiges Eigentum (IP). Alle Kosten werden von BioChain übernommen, da diese Studie von BioChain initiiert und organisiert wird.

11,Veröffentlichung und geistiges Eigentum

1. planen die Veröffentlichung von 2-3 Artikeln in Science Citation Index (SCI)-indizierten Zeitschriften, 3-4 Artikel in chinesischen Kernzeitschriften.
2. planen, ein Patent einzureichen

12, Datenverwaltung

Die Qualität der Daten klinischer Studien ist die Grundlage für die Bewertung der Ergebnisse. Um die Realität und Verlässlichkeit der Versuchsergebnisse zu gewährleisten, haben die Forscher eine Reihe von Datenverwaltungsprinzipien aufgestellt. Die Prüfärzte werden im Folgenden die Grundsätze des Datenmanagements in dieser Studie ausführlich erläutern, ausgehend von der Zusammensetzung und Verantwortung des Datenmanagementausschusses und dem Inhalt des Datenmanagements.

13. Forschungsteam und Personal

Um mögliche Fehler zu vermeiden, die durch unterschiedliche Krankheitsinzidenzen und das Verhältnis von Patienten in verschiedenen Krankenhäusern verursacht werden, werden vier Krankenhäuser in Peking für die Patientenrekrutierung in dieser klinischen Studie ausgewählt. Da die Patienten in diesen vier Krankenhäusern hauptsächlich aus Nordchina stammen, ist die Studienpopulation repräsentativ für die Krankheitsepidemiologie in diesem Teil des Landes. Ärzte und Techniker der Abteilung für Magen-Darm-Erkrankungen, Endoskopie und allgemeine Chirurgie aus den vier Krankenhäusern werden an der Studie teilnehmen, und zwar:

Peking Union Medical College Hospital (Peking) Beijing Military General Hospital (Peking) Cancer Hospital Chinese Academy of Medical Sciences (Peking) Beijing Cancer Hospital (Peking)