Detección de CCR mediante mSEPT9 (septina 9 metilada) en población china (RESEPT)

1. Antecedentes

   El cáncer colorrectal (CCR) es la tercera neoplasia maligna más común del sistema gastrointestinal. Las pruebas regulares, la detección temprana y el tratamiento temprano del cáncer colorrectal pueden lograr una mejor prevención e incluso una cura. Actualmente, el 60%-70% de los pacientes con CCR no se diagnostican hasta etapas tardías y solo el 11,8% de los casos se detectan en etapas tempranas. Por lo tanto, es urgente reducir la mortalidad por CCR mejorando la tasa de detección temprana. En China, la prueba de sangre oculta en heces (FOBT) y la colonoscopia están disponibles actualmente para la detección temprana de CCR. La FOBT se usa ampliamente debido a su bajo costo y no invasividad; sin embargo, su tasa de falsos positivos es relativamente alta debido a muchos factores que interfieren. La FOBT más avanzada, la prueba inmunoquímica fecal (FIT), ha mejorado mucho la especificidad de la prueba en comparación con el método químico tradicional y su cumplimiento es alto, pero aún está sujeto a la influencia de otras enfermedades intestinales, lo que lleva a un valor predictivo positivo bajo. En contraste, el cumplimiento de la colonoscopia es bajo debido a su invasividad, costo y riesgo de complicaciones.

   En los últimos años, el ensayo de metilación del gen SEPT9 basado en plasma ha demostrado ser un método prometedor para la detección temprana del CCR. Muchos estudios clínicos han demostrado que el gen SEPT9 metilado es un biomarcador útil para la detección temprana de CCR. En la actualidad, Epi proColon 2.0 CE de Epigenomics es el único ensayo comercializado de metilación del gen SEPT9 en todo el mundo. Este producto ha obtenido la aprobación de la certificación CE de la Unión Europea, la FDA China y la FDA Argentina. Ha completado el envío de datos clínicos clave a la FDA de los EE. UU., con una expectativa razonable de la aprobación de la FDA de los EE. UU. pronto. Los servicios basados ​​en el ensayo de metilación del gen SEPT9 también se brindan en laboratorios clínicos como quest, Arup, compañero de DX y gamma dynacare con el código de procedimiento médico común (código CPT) 81401. En China, BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc, un fuerte socio de Epigenomics AG, ha desarrollado su propio ensayo de metilación del gen SEPT9 con el acuerdo de Epigenomics AG.

2. Estimación del tamaño de la muestra

   Basándose en la ecuación N=Z2* (P (1-p))/E2 para la tasa de detección de positividad conocida, los investigadores calcularon la cantidad de muestras necesarias para el ensayo, en la que N representa el tamaño de la muestra, Z es un parámetro estadístico ( Z=1,96 para un intervalo de confianza del 95 %); E representa el error (5% fue elegido en este estudio), y P representa la probabilidad (tasa de detección positiva putativa). Los investigadores eligen 0,75 para el valor de p en función de la literatura existente sobre la sensibilidad de SEPT9. El número de casos de CRC se calcula como 288 según la ecuación anterior. Los investigadores tienen como objetivo recopilar información completa para 300 casos debido a la incompletitud de la información y la pérdida de seguimiento. etc. Según la estimación de que el CRC representa el 30 % de los pacientes ambulatorios y hospitalizados de alto riesgo en los hospitales chinos, el número total de pacientes en el ensayo no debe ser inferior a 1000 casos. El objetivo de los investigadores es reclutar 1200 casos en este ensayo teniendo en cuenta una tasa de pérdida de seguimiento del 20 %.

   El número real final de casos para este ensayo fue de 1031, debido a la pérdida de seguimiento, pruebas o datos clínicos incompletos, o muestras que no cumplieron con los criterios de la prueba.

3. Agrupación de materias

   No se agruparán todos los pacientes antes de la extracción de sangre para el ensayo SEPT9, y se obtendrán muestras de sangre de todos los sujetos que cumplieron con los criterios de selección. Todos los técnicos están cegados a la información clínica de los sujetos. Para investigar la viabilidad de la detección conjunta con el ensayo SEPT9 y otras pruebas de detección, se realizarán pruebas de antígeno carcinoembrionario (CEA) y FIT a voluntad de los pacientes participantes ya juicio de los médicos. Esta parte de los datos se utilizará en un análisis retrospectivo después de la finalización del ensayo.

   Cuando finalicen todas las pruebas planificadas, todos los sujetos se dividirán en tres grupos según el diagnóstico y la patología de la colonoscopia, el grupo de CCR, el grupo de enfermedades precancerosas y el grupo de otras enfermedades, en el que el grupo de CCR consta de pacientes con CCR en estadio 0-IV, el grupo de enfermedades precancerosas incluye pacientes de adenoma y pólipos, y el grupo de otras enfermedades incluye pacientes de otras enfermedades intestinales, otros cánceres y sujetos sin evidencia de enfermedad.

4. Procedimiento de prueba

   La capacitación finalizará antes de que comience el ensayo, incluido el procedimiento de operación del ensayo y el uso de kits e instrumentos. Este ensayo es un estudio aleatorizado, simple ciego. Todos los pacientes deben firmar el consentimiento informado antes de la extracción de sangre de 10 ml. Las muestras se procesarán y el ensayo SEPT9 se realizará según las instrucciones para los usuarios. Todos los sujetos recibirán una colonoscopia y/o un examen patológico para confirmar el diagnóstico, y los resultados del ensayo SEPT9 se decidirán según las instrucciones para los usuarios. El análisis estadístico se realizará en función de los resultados del ensayo SEPT9 y la colonoscopia y/o el examen patológico.

5. Recolección y almacenamiento de muestras

1) colección de muestras:

1. la muestra debe recolectarse de pacientes ambulatorios o hospitalizados y la información de la muestra debe registrarse en formularios de recolección de muestras.
2. toma de muestras: 10 ml de sangre periférica (solo decoagulante K2EDTA).
3. Para garantizar la precisión del ensayo, la recolección de muestras debe realizarse estrictamente en función de los requisitos anteriores, de lo contrario, puede afectar la precisión del ensayo.

2) método de almacenamiento y transporte de muestras: almacene y transfiera las muestras según las instrucciones de uso del kit

6, ensayo SEPT9

El ensayo de metilación del gen SEPT9 (método de sonda de fluorescencia de PCR) se compone de dos pasos. En primer lugar, el ADN libre de células en el plasma se extrae utilizando el kit de procesamiento de plasma, seguido de la conversión con bisulfito, en la que la citosina no metilada se convertirá mientras que la citosina metilada no. En segundo lugar, se realizará una PCR en tiempo real utilizando ADN convertido con bisulfito (bisDNA) como plantilla para determinar la amplificación de la plantilla. El agente bloqueador de PCR y las sondas específicas de metilación pueden trabajar juntas para distinguir entre el ADN metilado y no metilado. La beta-actina se utilizará como control interno para evaluar la calidad del ADN plasmático y la validez de la amplificación por PCR. Se proporcionarán controles positivos y negativos en el kit como controles de calidad y se ejecutarán en paralelo con las muestras cada vez.

7, análisis de datos y estadísticas

Se recopilarán y analizarán los datos del ensayo SEPT9 y los datos de la colonoscopia de todos los sujetos, se calcularán los siguientes parámetros:

Sensibilidad Especificidad Consistencia Valor predictivo positivo (VPP) Valor predictivo negativo (VPN)

8, ética

El plan de presupuesto para el ensayo clínico se presentará al comité de ética de los hospitales participantes para su revisión antes de que comience el ensayo clínico. El estudio no se iniciará a menos que sea aprobado por los comités. Todos los sujetos firmarán el consentimiento informado antes de la extracción de sangre y se les informará sobre el uso del plasma y los resultados de la prueba.

9, progreso de la investigación

2014.02-2014.04 Confirmación de protocolos de ensayos clínicos y formación del personal para la recogida y análisis de muestras

2014.04-2014.08 Envío de solicitud de ensayo clínico al comité de ética para su aprobación en cuatro hospitales

2014.08-2015.04 Iniciar el reclutamiento de pacientes y la recopilación de información general de los sujetos.

2014.10-2015.04 Toma de muestras y pruebas

2015.04-2015.07 Recopile y rastree la información de colonoscopia y/o patología

2015.07-2015.09 Procesamiento de datos, estadísticas y análisis.

2015.10 Cierre del reclutamiento de pacientes y finalización del ensayo

10, Presupuesto

Los costos incluyen gastos para reclutar 1200 sujetos, cargos por alquiler de equipos, costos de material de prueba, tarifa de procesamiento de muestras, costos de mano de obra, costos de compensación del paciente, costos de viajes y conferencias, tarifas de publicación y propiedad intelectual (PI). Todos los gastos serán cubiertos por BioChain, ya que este ensayo es iniciado y organizado por BioChain.

11,Publicación y propiedad intelectual

1. planea publicar 2-3 artículos en revistas indexadas en el índice de citas científicas (SCI), 3-4 artículos en revistas principales nacionales chinas.
2. planea presentar una patente

12, gestión de datos

La calidad de los datos de los ensayos clínicos es la base para la evaluación de los resultados. Para garantizar la realidad y la fiabilidad de los resultados de los experimentos, los investigadores establecieron una serie de principios de gestión de datos. Los investigadores explicarán detalladamente los principios de gestión de datos en este estudio a continuación a partir de la composición y responsabilidad del Comité de Gestión de Datos y el contenido de la gestión de datos.

13.Equipo y personal de investigación

Para evitar los posibles errores causados ​​por la diferencia en la incidencia de la enfermedad y la proporción de pacientes en diferentes hospitales, se elegirán cuatro hospitales en Beijing para el reclutamiento de pacientes en este ensayo clínico. Dado que los pacientes de estos cuatro hospitales provienen principalmente del norte de China, la población del estudio es representativa de la epidemiología de la enfermedad en esta parte del país. En el ensayo participarán médicos y técnicos del departamento de enfermedades digestivas, endoscopia y cirugía general de los cuatro hospitales, ellos son:

Peking Union Medical College Hospital (Beijing) Beijing Military General Hospital (Beijing) Cancer Hospital Academia China de Ciencias Médicas (Beijing) Beijing Cancer Hospital (Beijing)