CRC-screening met behulp van mSEPT9 (Methylated Septin 9) in de Chinese bevolking (RESEPT)

1. Achtergrond

   Colorectale kanker (CRC) is de derde meest voorkomende maligniteit van het maagdarmstelsel. Regelmatige screening, vroege opsporing en vroege behandeling van dikkedarmkanker kan zorgen voor betere preventie en zelfs genezing. Momenteel wordt 60%-70% van de CRC-patiënten pas in een laat stadium gediagnosticeerd en wordt slechts 11,8% van de gevallen in een vroeg stadium ontdekt. Het is daarom dringend nodig om de CRC-sterfte te verminderen door het percentage vroege screening te verbeteren. In China zijn momenteel fecaal occult bloedonderzoek (FOBT) en colonoscopie beschikbaar voor vroege CRC-screening. FOBT wordt veel gebruikt vanwege de lage kosten en niet-invasiviteit, maar het percentage fout-positieven is relatief hoog vanwege veel storende factoren. De meer geavanceerde FOBT, fecale immunochemische test (FIT), heeft de testspecificiteit sterk verbeterd in vergelijking met de traditionele chemische methode en de naleving ervan is hoog, maar is nog steeds onderhevig aan de invloed van andere darmziekten, wat leidt tot een lage positief voorspellende waarde. Daarentegen is de therapietrouw voor colonoscopie laag vanwege de invasiviteit, de kosten en het risico op complicaties.

   In de afgelopen jaren is de op plasma gebaseerde SEPT9-genmethyleringstest een veelbelovende methode gebleken voor de vroege detectie van CRC. Veel klinische onderzoeken hebben aangetoond dat het gemethyleerde SEPT9-gen een bruikbare biomarker is voor vroege CRC-detectie. Op dit moment is Epigenomics' Epi proColon 2.0 CE wereldwijd de enige gecommercialiseerde test voor SEPT9-genmethylering. Dit product heeft de goedkeuring verkregen van de CE-certificering van de Europese Unie, de Chinese FDA en de Argentijnse FDA. Het heeft de indiening van de belangrijkste klinische gegevens bij de Amerikaanse FDA afgerond, met redelijke verwachting van de Amerikaanse FDA-goedkeuring binnenkort. Diensten op basis van de SEPT9-genmethyleringstest worden ook geleverd in klinische laboratoria zoals Quest, Arup, aanvulling op DX en gamma-dynacare met de algemene medische procedurecode (CPT-code) 81401. In China heeft BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc, een sterke partner van Epigenomics AG, zijn eigen SEPT9-genmethyleringstest ontwikkeld met instemming van Epigenomics AG.

2. Schatting van de steekproefomvang

   Op basis van de vergelijking N=Z2* (P (1-p))/E2 voor een bekend detectiepercentage voor positiviteit, berekenden de onderzoekers het aantal monsters dat nodig was voor de proef, waarbij N de steekproefgrootte vertegenwoordigt, Z een statistische parameter ( Z=1,96 voor 95% betrouwbaarheidsinterval); E vertegenwoordigt de fout (5% werd gekozen in deze studie) en P vertegenwoordigt de waarschijnlijkheid (vermoedelijk positief detectiepercentage). De onderzoekers kiezen 0,75 voor P-waarde op basis van bestaande literatuur over SEPT9-gevoeligheid. Het aantal CRC-gevallen wordt berekend als 288 op basis van de bovenstaande vergelijking. De onderzoekers streven ernaar om volledige informatie te verzamelen voor 300 zaken vanwege onvolledigheid van de informatie en tracking loss. enzovoort. Gebaseerd op de schatting dat CRC goed is voor 30% van de poliklinische en intramurale patiënten met een hoog risico in Chinese ziekenhuizen, zou het totale aantal patiënten in de studie niet minder dan 1000 gevallen moeten zijn. De onderzoekers streven naar het rekruteren van 1200 gevallen in dit onderzoek, rekening houdend met 20% verlies van follow-up.

   Het uiteindelijke werkelijke aantal gevallen voor deze studie was 1031, als gevolg van verlies van tracking, onvolledige test- of klinische gegevens of monsters die niet voldeden aan de testcriteria.

3. Groepering van onderwerpen

   Alle patiënten worden niet gegroepeerd voordat er bloed wordt afgenomen voor de SEPT9-assay en er worden bloedmonsters genomen van alle proefpersonen die aan de selectiecriteria voldeden. Alle technici zijn blind voor de klinische informatie van proefpersonen. Om de haalbaarheid van gewrichtsdetectie met de SEPT9-assay en andere screeningtesten te onderzoeken, zullen carcino-embryonaal antigeen (CEA) en FIT-testen worden uitgevoerd naar wens van de deelnemende patiënten en het oordeel van artsen. Dit deel van de gegevens zal worden gebruikt in een retrospectieve analyse na voltooiing van het onderzoek.

   Wanneer alle geplande tests zijn voltooid, worden alle proefpersonen verdeeld in drie groepen op basis van colonoscopiediagnose en pathologie, de CRC-groep, de precancereuze ziektegroep en andere ziektegroep, waarbij de CRC-groep bestaat uit patiënten met stadium 0-IV CRC, de precancereuze ziektegroep omvat patiënten met adenoom en poliepen, en de andere ziektegroep omvat patiënten met andere darmaandoeningen, andere kankers en personen zonder bewijs van ziekte.

4. Proefprocedure

   De training wordt afgerond voordat de proef begint, inclusief de werkingsprocedure van de assay en het gebruik van kits en instrumenten. Deze proef is een gerandomiseerde, enkelblinde studie. Alle patiënten moeten de geïnformeerde toestemming ondertekenen vóór bloedafname van 10 ml. Monsters worden verwerkt en de SEPT9-assay wordt uitgevoerd op basis van de instructies voor gebruikers. Alle proefpersonen zullen colonoscopie en/of pathologisch onderzoek ondergaan om de diagnose te bevestigen, en de resultaten voor de SEPT9-assay zullen worden bepaald op basis van de instructies voor gebruikers. Statistische analyse zal worden uitgevoerd op basis van de resultaten van zowel de SEPT9-assay als colonoscopie en/of pathologisch onderzoek.

5. Monsterverzameling en opslag

1) monsterverzameling:

1. er moet een monster worden verzameld bij poliklinische of intramurale patiënten en de monsterinformatie moet worden vastgelegd in monsterverzamelingsformulieren.
2. monsterafname: 10 ml perifeer bloed (alleen K2EDTA-decoagulans).
3. om de nauwkeurigheid van de test te garanderen, moet de monsterverzameling strikt worden uitgevoerd op basis van de bovenstaande vereisten, anders kan dit de nauwkeurigheid van de test beïnvloeden.

2) opslag- en transportmethode voor monsters: Bewaar en verplaats de monsters volgens de gebruiksaanwijzing van de kit

6, SEPT9-test

De SEPT9-genmethyleringstest (PCR-fluorescentiesondemethode) bestaat uit twee stappen. Eerst wordt het celvrije DNA in plasma geëxtraheerd met behulp van de plasmaverwerkingskit, gevolgd door bisulfietconversie, waarbij het niet-gemethyleerde cytosine wordt omgezet en het gemethyleerde cytosine niet. Ten tweede zal real-time PCR worden uitgevoerd met bisulfiet-geconverteerd DNA (bisDNA) als de matrijs om de amplificatie van de matrijs te bepalen. PCR-blokkerende agent en methylering-specifieke sondes kunnen samenwerken om onderscheid te maken tussen gemethyleerd en niet-gemethyleerd DNA. Beta-actine zal worden gebruikt als de interne controle om de plasma-DNA-kwaliteit en de validiteit van PCR-amplificatie te evalueren. Positieve en negatieve controles worden in de kit geleverd als kwaliteitscontroles en worden elke keer parallel aan de monsters uitgevoerd.

7, gegevensanalyse en statistieken

De gegevens voor de SEPT9-assay en de gegevens van de colonoscopie van alle proefpersonen worden verzameld en geanalyseerd, de volgende parameters worden berekend:

Gevoeligheid Specificiteit Consistentie positief voorspellende waarde (PPV) negatief voorspellende waarde (NPV)

8, Ethiek

Het budgetplan voor de klinische proef wordt ter beoordeling voorgelegd aan de ethische commissie van de deelnemende ziekenhuizen voordat de klinische proef begint. Het onderzoek wordt pas gestart na goedkeuring door de commissies. Alle proefpersonen ondertekenen de geïnformeerde toestemming vóór bloedafname en worden geïnformeerd over het gebruik van plasma en de testresultaten.

9, Onderzoeksvooruitgang

2014.02-2014.04 Bevestiging van protocollen voor klinische proeven en training van personeel voor het verzamelen en testen van monsters

2014.04-2014.08 Indiening van de aanvraag voor een klinische proef bij de ethische commissie ter goedkeuring in vier ziekenhuizen

2014.08-2015.04 Begin met het werven van patiënten en het verzamelen van algemene informatie over proefpersonen

2014.10-2015.04 Monsterverzameling en testen

2015.04-2015.07 Verzamel en volg de informatie over colonoscopie en/of pathologie

2015.07-2015.09 Gegevensverwerking, statistiek en analyse

2015.10 Sluiting van rekrutering van patiënten en voltooiing van de studie

10, Budget

De kosten omvatten uitgaven voor het werven van 1200 proefpersonen, huurkosten voor apparatuur, kosten voor testmateriaal, kosten voor monsterverwerking, arbeidskosten, patiëntcompensatiekosten, reis- en conferentiekosten, publicatie- en intellectuele eigendomsrechten (IP). Alle kosten worden gedekt door BioChain, aangezien deze proef wordt geïnitieerd en georganiseerd door BioChain.

11, publicatie en intellectuele eigendommen

1. plan om 2-3 papers te publiceren in wetenschappelijke citatie-index (SCI)-geïndexeerde tijdschriften, 3-4 papers in Chinese binnenlandse kerntijdschriften.
2. plan om één octrooi in te dienen

12, Gegevensbeheer

De kwaliteit van de gegevens van klinische onderzoeken vormt de basis voor de evaluatie van de resultaten. Om de realiteit en betrouwbaarheid van experimentresultaten te waarborgen, hebben de onderzoekers een reeks principes voor gegevensbeheer opgesteld. Uit de samenstelling en verantwoordelijkheid van de Commissie Gegevensbeheer en de inhoud van het gegevensbeheer zullen de onderzoekers in dit onderzoek de principes van datamanagement in dit onderzoek nader toelichten.

13. Onderzoeksteam en personeel

Om mogelijke fouten te voorkomen die worden veroorzaakt door verschillen in ziekte-incidentie en verhouding van patiënten in verschillende ziekenhuizen, zullen vier ziekenhuizen in Beijing worden gekozen voor patiëntenwerving in deze klinische studie. Aangezien patiënten in deze vier ziekenhuizen voornamelijk uit Noord-China komen, is de onderzoekspopulatie representatief voor de epidemiologie van ziekten in dit deel van het land. Artsen en technici van de afdeling gastro-intestinale aandoeningen, endoscopie en algemene chirurgie van de vier ziekenhuizen zullen deelnemen aan de proef, dit zijn:

Peking Union Medical College Hospital (Beijing) Beijing Military General Hospital (Beijing) Kankerziekenhuis Chinese Academie voor Medische Wetenschappen (Beijing) Peking Kankerziekenhuis (Beijing)