Screening CRC utilizzando mSEPT9 (Methylated Septin 9) nella popolazione cinese (RESEPT)

1. Sfondo

   Il cancro del colon-retto (CRC) è la terza neoplasia più comune del sistema gastrointestinale. Lo screening regolare, la diagnosi precoce e il trattamento precoce del cancro del colon-retto possono ottenere una migliore prevenzione e persino una cura. Attualmente, il 60% -70% dei pazienti con CRC non viene diagnosticato fino alle fasi avanzate e solo l'11,8% dei casi viene rilevato nella fase iniziale. È quindi urgente ridurre la mortalità CRC migliorando il tasso di screening precoce. In Cina, il test del sangue occulto fecale (FOBT) e la colonscopia sono attualmente disponibili per lo screening precoce del CRC. FOBT è ampiamente utilizzato a causa del suo basso costo e non invasività, tuttavia, il suo tasso di falsi positivi è relativamente alto a causa di molti fattori interferenti. Il più avanzato FOBT, test immunochimico fecale (FIT), ha notevolmente migliorato la specificità del test rispetto al metodo chimico tradizionale e la sua compliance è elevata, ma è ancora soggetta all'influenza di altre malattie intestinali, portando a un basso valore predittivo positivo. Al contrario, la compliance per la colonscopia è bassa a causa della sua invasività, del costo e del rischio di complicanze.

   Negli ultimi anni, il test di metilazione del gene SEPT9 basato su plasma si è rivelato un metodo promettente per la diagnosi precoce del CRC. Molti studi clinici hanno dimostrato che il gene SEPT9 metilato è un biomarcatore utile per il rilevamento precoce del CRC. Attualmente, l'Epi proColon 2.0 CE di Epigenomics è l'unico test commercializzato della metilazione del gene SEPT9 a livello globale. Questo prodotto ha ottenuto l'approvazione dalla certificazione CE dell'Unione Europea, dalla FDA cinese e dalla FDA argentina. Ha completato la presentazione dei dati clinici chiave alla FDA degli Stati Uniti, con una ragionevole aspettativa dell'approvazione della FDA degli Stati Uniti a breve. I servizi basati sul test di metilazione genica SEPT9 sono forniti anche in laboratori clinici come quest, Arup, companion to DX e gamma dynacare con il codice di procedura medica comune (codice CPT) 81401. In Cina, BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc, un forte partner di Epigenomics AG, ha sviluppato il proprio test di metilazione genica SEPT9 con l'accordo di Epigenomics AG.

2. Stima della dimensione del campione

   Sulla base dell'equazione N=Z2* (P (1-p))/E2 per il tasso di rilevamento di positività noto, i ricercatori hanno calcolato il numero di campioni necessari per lo studio, in cui N rappresenta la dimensione del campione, Z è un parametro statistico ( Z=1,96 per intervallo di confidenza al 95%); E rappresenta l'errore (in questo studio è stato scelto il 5%) e P rappresenta la probabilità (tasso di rilevamento positivo putativo). I ricercatori scelgono 0,75 per il valore P in base alle letterature esistenti sulla sensibilità SEPT9. Il numero di casi CRC è calcolato come 288 in base all'equazione di cui sopra. Gli investigatori mirano a raccogliere informazioni complete per 300 casi a causa dell'incompletezza delle informazioni e della perdita di tracciabilità. eccetera. Sulla base della stima che il CRC rappresenta il 30% dei pazienti ambulatoriali e ricoverati ad alto rischio negli ospedali cinesi, il numero totale di pazienti nello studio non dovrebbe essere inferiore a 1000 casi. Gli investigatori mirano a reclutare 1200 casi in questo studio tenendo conto della perdita del 20% del tasso di follow-up.

   Il numero effettivo finale di casi per questo studio è stato di 1031, a causa della perdita di tracciabilità, test incompleti o dati clinici o campioni che non soddisfacevano i criteri del test.

3. Raggruppamento per soggetto

   Tutti i pazienti non verranno raggruppati prima del prelievo di sangue per il test SEPT9 e verranno prelevati campioni di sangue per tutti i soggetti che soddisfano i criteri di selezione. Tutti i tecnici sono ciechi rispetto alle informazioni cliniche dei soggetti. Al fine di studiare la fattibilità del rilevamento articolare con il test SEPT9 e altri test di screening, i test dell'antigene carcino-embrionale (CEA) e FIT saranno eseguiti secondo la volontà dei pazienti partecipanti e il giudizio dei medici. Questa parte dei dati verrà utilizzata in un'analisi retrospettiva dopo il completamento della sperimentazione.

   Al termine di tutti i test pianificati, tutti i soggetti saranno divisi in tre gruppi in base alla diagnosi e alla patologia della colonscopia, il gruppo CRC, il gruppo delle malattie precancerose e il gruppo di altre malattie, in cui il gruppo CRC è composto da pazienti con CRC in stadio 0-IV, il gruppo di malattie precancerose include pazienti con adenoma e polipi e il gruppo di altre malattie include pazienti con altre malattie intestinali, altri tumori e soggetti senza evidenza di malattia.

4. Procedura processuale

   La formazione sarà terminata prima dell'inizio della sperimentazione, compresa la procedura operativa del test e l'uso di kit e strumenti. Questo studio è uno studio randomizzato, in singolo cieco. Tutti i pazienti devono firmare il consenso informato prima del prelievo di sangue di 10 ml. I campioni verranno elaborati e il test SEPT9 verrà eseguito in base alle istruzioni per gli utenti. Tutti i soggetti riceveranno colonscopia e/o esame patologico per confermare la diagnosi e i risultati per il test SEPT9 saranno decisi in base alle istruzioni per gli utenti. L'analisi statistica sarà eseguita sulla base dei risultati sia del test SEPT9 che della colonscopia e/o dell'esame patologico.

5. Raccolta e conservazione dei campioni

1) raccolta del campione:

1. il campione dovrebbe essere raccolto da pazienti ambulatoriali o ricoverati e le informazioni sul campione dovrebbero essere registrate nei moduli di raccolta del campione.
2. prelievo del campione: 10 mL di sangue periferico (solo K2EDTA decoagulante).
3. al fine di garantire l'accuratezza del test, la raccolta del campione deve essere eseguita rigorosamente in base ai requisiti di cui sopra, altrimenti potrebbe influire sull'accuratezza del test.

2) metodo di conservazione e trasporto dei campioni: conservare e trasferire i campioni in base alle istruzioni per l'uso del kit

6, saggio SEPT9

Il saggio di metilazione del gene SEPT9 (metodo della sonda di fluorescenza PCR) è composto da due passaggi. In primo luogo, il DNA privo di cellule nel plasma viene estratto utilizzando il kit di elaborazione del plasma, seguito dalla conversione del bisolfito, in cui la citosina non metilata verrà convertita mentre la citosina metilata no. In secondo luogo, verrà eseguita la PCR in tempo reale utilizzando DNA convertito con bisolfito (bisDNA) come templato per determinare l'amplificazione del templato. L'agente bloccante della PCR e le sonde specifiche per la metilazione possono lavorare insieme per distinguere tra DNA metilato e non metilato. La beta-actina sarà utilizzata come controllo interno per valutare la qualità del DNA plasmatico e la validità dell'amplificazione mediante PCR. I controlli positivi e negativi verranno forniti nel kit come controlli di qualità e verranno eseguiti ogni volta in parallelo con i campioni.

7, analisi dei dati e statistiche

Verranno raccolti e analizzati i dati per il dosaggio SEPT9 e i dati della colonscopia di tutti i soggetti, verranno calcolati i seguenti parametri:

Sensibilità Specificità Coerenza valore predittivo positivo (VPP) valore predittivo negativo (VPN)

8,Etica

Il piano di budget per la sperimentazione clinica sarà sottoposto al comitato etico degli ospedali partecipanti per la revisione prima dell'inizio della sperimentazione clinica. Lo studio non sarà avviato se non dopo l'approvazione delle commissioni. Tutti i soggetti firmeranno il consenso informato prima della raccolta del sangue e saranno informati sull'uso del plasma e sui risultati del test.

9, Progresso della ricerca

2014.02-2014.04 Conferma dei protocolli di sperimentazione clinica e formazione del personale per la raccolta e il test dei campioni

2014.04-2014.08 Presentazione della domanda di sperimentazione clinica al comitato etico per l'approvazione in quattro ospedali

2014.08-2015.04 Avviare il reclutamento dei pazienti e la raccolta di informazioni generali sui soggetti

2014.10-2015.04 Prelievo di campioni e test

2015.04-2015.07 Raccogliere e tenere traccia delle informazioni relative alla colonscopia e/o alla patologia

2015.07-2015.09 Elaborazione dati, statistiche e analisi

2015.10 Chiusura del reclutamento dei pazienti e conclusione della sperimentazione

10, Bilancio

I costi includono le spese per il reclutamento di 1200 soggetti, le spese per l'affitto delle attrezzature, i costi del materiale di prova, le spese per l'elaborazione dei campioni, i costi del lavoro, i costi di compensazione dei pazienti, i costi di viaggio e conferenza, le spese di pubblicazione e proprietà intellettuale (IP). Tutte le spese saranno coperte da BioChain, poiché questo processo è avviato e organizzato da BioChain.

11,Pubblicazione e proprietà intellettuale

1. prevede di pubblicare 2-3 articoli su riviste indicizzate all'indice di citazione scientifica (SCI), 3-4 articoli su riviste principali nazionali cinesi.
2. intenzione di presentare un brevetto

12, Gestione dei dati

La qualità dei dati della sperimentazione clinica è la base per la valutazione dei risultati. Per garantire la realtà e l'affidabilità dei risultati dell'esperimento, i ricercatori hanno stabilito una serie di principi di gestione dei dati. Gli investigatori spiegheranno i principi di gestione dei dati in questo studio in modo approfondito nel seguito dalla composizione e responsabilità del Comitato di gestione dei dati e dal contenuto della gestione dei dati.

13.Gruppo di ricerca e personale

Al fine di evitare i possibili errori causati dalla differenza nell'incidenza della malattia e nel rapporto tra i pazienti nei diversi ospedali, quattro ospedali di Pechino saranno scelti per il reclutamento dei pazienti in questo studio clinico. Poiché i pazienti in questi quattro ospedali provengono principalmente dalla Cina settentrionale, la popolazione dello studio è rappresentativa dell'epidemiologia della malattia in questa parte del paese. Alla sperimentazione parteciperanno medici e tecnici del reparto di malattie gastrointestinali, endoscopia e chirurgia generale dei quattro ospedali, si tratta di:

Peking Union Medical College Hospital (Pechino) Beijing Military General Hospital (Pechino) Cancer Hospital Accademia Cinese delle Scienze Mediche (Pechino) Beijing Cancer Hospital (Pechino)