CRC-screening med hjälp av mSEPT9 (metylerat septin 9) i kinesisk befolkning (RESEPT)

1. Bakgrund

   Kolorektal cancer (CRC) är den tredje vanligaste maligniteten i mag-tarmsystemet. Regelbunden screening, tidig upptäckt och tidig behandling av kolorektal cancer kan uppnå bättre förebyggande och till och med bota. För närvarande diagnostiseras 60-70 % av CRC-patienterna inte förrän i sena stadier och endast 11,8 % av fallen upptäcks i tidigt skede. Det är därför angeläget att minska CRC-dödligheten genom att förbättra den tidiga screeningfrekvensen. I Kina finns för närvarande fekalt ockult blodprov (FOBT) och koloskopi tillgängliga för tidig CRC-screening. FOBT används ofta på grund av dess låga kostnad och icke-invasivitet, men dess falska positiva frekvens är relativt hög på grund av många störande faktorer. Det mer avancerade FOBT, fekalt immunkemiskt test (FIT), har avsevärt förbättrat testspecificiteten jämfört med den traditionella kemiska metoden och dess följsamhet är hög, men är fortfarande föremål för påverkan av andra tarmsjukdomar, vilket leder till lågt positivt prediktivt värde. Däremot är följsamheten för koloskopi låg på grund av dess invasivitet, kostnad och risk för komplikationer.

   Under de senaste åren har den plasmabaserade SEPT9-genmetyleringsanalysen visat sig vara en lovande metod för tidig upptäckt av CRC. Många kliniska studier har visat att den metylerade SEPT9-genen är en användbar biomarkör för tidig CRC-detektion. För närvarande är Epigenomics Epi proColon 2.0 CE den enda kommersialiserade analysen av SEPT9-genmetylering globalt. Denna produkt har erhållit godkännande från EU:s CE-certifiering, kinesiska FDA och Argentina FDA. Den har slutfört inlämnande av viktiga kliniska data till US FDA, med rimliga förväntningar på att US FDA snart ska godkännas. Tjänster baserade på SEPT9-genmetyleringsanalysen tillhandahålls också i kliniska laboratorier som quest, Arup, companion to DX och gamma dynacare med den vanliga medicinska proceduren (CPT-kod) 81401. I Kina har BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc, en stark partner till Epigenomics AG, utvecklat sin egen SEPT9-genmetyleringsanalys med överenskommelse med Epigenomics AG.

2. Uppskattning av provstorlek

   Baserat på ekvationen N=Z2* (P (1-p))/E2 för känd positivitetsdetektionshastighet, beräknade utredarna antalet prover som behövs för försöket, där N representerar provstorleken, Z är en statistisk parameter ( Z=1,96 för 95 % konfidensintervall); E representerar felet (5 % valdes i denna studie) och P representerar sannolikheten (förmodad positiv detektionsgrad). Utredarna väljer 0,75 för P-värde baserat på befintlig litteratur om SEPT9-känslighet. Antalet CRC-fall beräknas till 288 baserat på ekvationen ovan. Utredarna siktar på att samla in fullständig information för 300 fall på grund av ofullständig information och spårningsförlust. etc. Baserat på uppskattningen att CRC står för 30 % av polikliniska och slutna patienter med hög risk på kinesiska sjukhus, bör det totala antalet patienter i prövningen vara inte mindre än 1 000 fall. Utredarna strävar efter att rekrytera 1200 fall i denna rättegång med hänsyn till 20 % förlust av uppföljningsfrekvens.

   Det slutliga faktiska antalet fall för denna studie var 1031, på grund av förlust av spårning, ofullständiga test- eller kliniska data, eller prover som inte uppfyllde testkriterierna.

3. Ämnesgruppering

   Alla patienter kommer inte att grupperas före blodtagning för SEPT9-analys, och blodprov kommer att tas för alla försökspersoner som uppfyllde urvalskriterierna. Alla tekniker är blinda för den kliniska informationen från försökspersoner. För att undersöka genomförbarheten av gemensam upptäckt med SEPT9-analys och andra screeningtester, kommer carcino-embryonala antigen (CEA) och FIT-test att utföras enligt de deltagande patienternas vilja och läkares bedömning. Denna del av data kommer att användas i en retrospektiv analys efter slutförandet av försöket.

   När alla planerade tester är klara kommer alla försökspersoner att delas in i tre grupper baserade på koloskopidiagnos och patologi, CRC-gruppen, precancerös sjukdomsgrupp och annan sjukdomsgrupp, där CRC-gruppen består av patienter med stadium 0-IV CRC, gruppen precancerösa sjukdomar inkluderar patienter med adenom och polyper, och andra sjukdomsgrupper inkluderar patienter med andra tarmsjukdomar, andra cancerformer och patienter utan tecken på sjukdom.

4. Rättegångsförfarande

   Utbildningen kommer att avslutas innan prövningen startar, inklusive analysens operationsprocedur och användning av kit och instrument. Denna studie är en randomiserad, enkelblind studie. Alla patienter bör underteckna det informerade samtycket före blodtagning på 10 ml. Prover kommer att bearbetas och SEPT9-analysen kommer att utföras baserat på instruktionerna för användarna. Alla försökspersoner kommer att få koloskopi och/eller patologisk undersökning för att bekräfta diagnosen, och resultaten för SEPT9-analysen kommer att avgöras baserat på instruktionerna för användarna. Statistisk analys kommer att utföras baserat på resultaten från både SEPT9-analys och koloskopi och/eller patologisk undersökning.

5. Provinsamling och förvaring

1) provsamling:

1. provet ska samlas in från öppenvårdspatienter eller slutenvårdspatienter och provinformationen ska registreras i provinsamlingsformulär.
2. provtagning: 10 mL perifert blod (endast K2EDTA-dekoagulant).
3. För att säkerställa analysens noggrannhet bör provtagningen utföras strikt baserat på ovanstående krav, annars kan det påverka analysens noggrannhet.

2) provförvaring och transportmetod: Förvara och överför proverna baserat på bruksanvisningen för kitet

6, SEPT9 analys

SEPT9-genmetyleringsanalys (PCR-fluorescensprobmetod) består av två steg. För det första extraheras det cellfria DNA:t i plasma med hjälp av plasmabearbetningssatsen, följt av bisulfitomvandling, där det ometylerade cytosinet kommer att omvandlas medan det metylerade cytosinet inte gör det. För det andra kommer realtids-PCR med bisulfitkonverterat DNA (bisDNA) som mall att utföras för att bestämma amplifieringen av mallen. PCR-blockerande medel och metyleringsspecifika prober kan arbeta tillsammans för att skilja mellan metylerat och ometylerat DNA. Beta-aktin kommer att användas som intern kontroll för att utvärdera plasma-DNA-kvaliteten och giltigheten av PCR-amplifiering. Positiva och negativa kontroller kommer att tillhandahållas i kitet som kvalitetskontroller och kommer att köras parallellt med prover varje gång.

7,Dataanalys och statistik

Data för SEPT9-analysen och data från koloskopi för alla försökspersoner kommer att samlas in och analyseras, följande parametrar kommer att beräknas:

Sensitivitet Specificitet Konsistens positivt prediktivt värde (PPV) negativt prediktivt värde (NPV)

8, Etik

Budgetplanen för den kliniska prövningen kommer att överlämnas till de deltagande sjukhusens etiska kommitté för granskning innan den kliniska prövningen startar. Studien kommer inte att inledas om inte kommittéernas godkännande. Alla försökspersoner kommer att underteckna det informerade samtycket före blodinsamling och kommer att informeras om användningen av plasma och testresultaten.

9, Forskningsframsteg

2014.02-2014.04 Bekräftelse av kliniska prövningsprotokoll och utbildning av personal för provtagning och test

2014.04-2014.08 Inlämnande av ansökan om klinisk prövning till etikkommittén för godkännande på fyra sjukhus

2014.08-2015.04 Starta patientrekrytering och insamling av allmän information om ämnen

2014.10-2015.04 Provtagning och tester

2015.04-2015.07 Samla in och spåra information om koloskopi och/eller patologi

2015.07-2015.09 Databehandling, statistik och analys

2015.10 Avslutande av patientrekrytering och avslutad prövning

10, Budget

Kostnaderna inkluderar utgifter för rekrytering av 1200 försökspersoner, utrustningshyra, testmaterialkostnader, provhanteringsavgift, arbetskostnader, kostnader för patientersättning, kostnader för resor och konferenser, publicering och avgifter för immateriella rättigheter (IP). Alla utgifter kommer att täckas av BioChain, eftersom denna prövning initieras och organiseras av BioChain.

11,Publicering och immateriella rättigheter

1. planerar att publicera 2-3 artiklar i science citation index (SCI)-indexerade tidskrifter, 3-4 artiklar i kinesiska inhemska kärntidskrifter.
2. planerar att lämna in ett patent

12, Datahantering

Kvaliteten på data från kliniska prövningar ligger till grund för utvärdering av resultat. För att säkerställa verkligheten och tillförlitligheten av experimentresultaten satte utredarna upp en serie principer för datahantering. Utredarna kommer att förklara datahanteringsprinciperna i denna studie grundligt i det följande från sammansättningen och ansvaret för Data Management Committee och innehållet i datahanteringen.

13.Forskningsteam och personal

För att undvika de möjliga felen orsakade av skillnader i sjukdomsincidens och förhållandet mellan patienter på olika sjukhus, kommer fyra sjukhus i Peking att väljas ut för patientrekrytering i denna kliniska prövning. Eftersom patienterna på dessa fyra sjukhus huvudsakligen kommer från norra Kina, är studiepopulationen representativ för sjukdomsepidemiologi i denna del av landet. Läkare och tekniker från avdelningen för gastrointestinala sjukdomar, endoskopi och allmän kirurgi från de fyra sjukhusen kommer att delta i försöket, de är:

Peking Union Medical College Hospital (Peking) Beijing Military General Hospital (Peking) Cancer Hospital Chinese Academy of Medical Sciences (Peking) Beijing Cancer Hospital (Peking)