CRC-seulonta mSEPT9:llä (metyloitu septiini 9) Kiinan väestössä (RESEPT)

1. Tausta

   Kolorektaalisyöpä (CRC) on kolmanneksi yleisin maha-suolikanavan pahanlaatuinen syöpä. Säännöllisellä seulonnalla, varhaisella havaitsemisella ja varhaisella peräsuolen syövän hoidolla voidaan saavuttaa parempi ennaltaehkäisy ja jopa paraneminen. Tällä hetkellä 60–70 % CRC-potilaista diagnosoidaan vasta myöhäisessä vaiheessa ja vain 11,8 % tapauksista havaitaan varhaisessa vaiheessa. Siksi on kiireellistä vähentää CRC-kuolleisuutta parantamalla varhaista seulontaastetta. Kiinassa on tällä hetkellä saatavilla piilevän verinäytteen testi (FOBT) ja kolonoskopia varhaiseen CRC-seulontaan. FOBT:tä käytetään laajalti sen alhaisten kustannusten ja ei-invasiivisuuden vuoksi, mutta sen vääriä positiivisia prosenttiosuuksia on suhteellisen korkea monien häiritsevien tekijöiden vuoksi. Edistyneempi FOBT, fecal immunochemical test (FIT), on parantanut huomattavasti testispesifisyyttä perinteiseen kemialliseen menetelmään verrattuna ja sen noudattaminen on korkea, mutta on edelleen alttiina muiden suolistosairauksien vaikutuksille, mikä johtaa alhaiseen positiiviseen ennustusarvoon. Sitä vastoin kolonoskopian noudattaminen on alhainen sen invasiivisuuden, kustannusten ja komplikaatioriskin vuoksi.

   Viime vuosina plasmapohjainen SEPT9-geenimetylaatiomääritys on osoittautunut lupaavaksi menetelmäksi CRC:n varhaisessa havaitsemisessa. Monet kliiniset tutkimukset ovat osoittaneet, että metyloitu SEPT9-geeni on hyödyllinen biomarkkeri CRC:n varhaisessa havaitsemisessa. Tällä hetkellä Epigenomicsin Epi proColon 2.0 CE on ainoa kaupallinen määritys SEPT9-geenin metylaatiosta maailmanlaajuisesti. Tämä tuote on saanut Euroopan unionin CE-sertifioinnin, Kiinan FDA:n ja Argentiinan FDA:n hyväksynnän. Se on saattanut päätökseen tärkeimpien kliinisten tietojen toimittamisen Yhdysvaltain FDA:lle, ja USA:n FDA:n hyväksynnän odotetaan saatavan pian. SEPT9-geenimetylaatioanalyysiin perustuvia palveluita tarjotaan myös kliinisissä laboratorioissa, kuten quest, Arup, companion to DX ja gamma dynacare yhteisellä lääketieteellisellä menettelykoodilla (CPT-koodi) 81401. Kiinassa BioChain (Beijing) Science and Technology, Inc, Epigenomics AG:n vahva kumppani, on kehittänyt oman SEPT9-geenimetylaatiomäärityksensä Epigenomics AG:n suostumuksella.

2. Otoskoon arviointi

   Yhtälön N=Z2* (P (1-p))/E2 perusteella tunnetulle positiivisuuden havaitsemisasteelle tutkijat laskivat tutkimukseen tarvittavien näytteiden määrän, jossa N edustaa otoskokoa, Z on tilastollinen parametri ( Z = 1,96 95 %:n luottamusvälille); E edustaa virhettä (5 % valittiin tässä tutkimuksessa) ja P edustaa todennäköisyyttä (oletettu positiivinen havaitsemisaste). Tutkijat valitsevat P-arvoksi 0,75 SEPT9-herkkyyttä koskevan olemassa olevan kirjallisuuden perusteella. CRC-tapausten määräksi lasketaan 288 yllä olevan yhtälön perusteella. Tutkijat pyrkivät keräämään täydelliset tiedot 300 tapauksesta tiedon epätäydellisyyden ja jäljityshäviön vuoksi. jne. Arvioiden perusteella, että CRC-potilaiden osuus on 30 % Kiinan sairaaloiden suuren riskin avo- ja sairaalapotilaista, tutkimuksen potilaiden kokonaismäärän pitäisi olla vähintään 1000 tapausta. Tutkijat pyrkivät rekrytoimaan 1200 tapausta tähän tutkimukseen ottaen huomioon 20 %:n seurannan menetys.

   Tämän tutkimuksen lopullinen todellinen tapausten lukumäärä oli 1 031, mikä johtui seurannan katoamisesta, epätäydellisistä testi- tai kliinisistä tiedoista tai näytteistä, jotka eivät täyttäneet testikriteereitä.

3. Aiheryhmittely

   Kaikkia potilaita ei ryhmitetä ennen verenottoa SEPT9-määritystä varten, ja verinäytteitä otetaan kaikista valintakriteerit täyttävistä koehenkilöistä. Kaikki teknikot ovat sokeita koehenkilöiden kliinisille tiedoille. Selvittääkseen nivelen havaitsemisen toteutettavuutta SEPT9-määrityksellä ja muilla seulontatesteillä, osallistuvien potilaiden tahdosta ja lääkäreiden harkinnasta tehdään karsinoembryonaalinen antigeeni (CEA) ja FIT-testit. Tätä osaa tiedoista käytetään retrospektiivisessä analyysissä kokeen päätyttyä.

   Kun kaikki suunnitellut testit on tehty, kaikki tutkittavat jaetaan kolmeen ryhmään kolonoskopiadiagnoosin ja -patologian perusteella, CRC-ryhmään, syövän esiasteen ryhmään ja muuhun sairausryhmään, joissa CRC-ryhmä koostuu potilaista, joilla on vaiheen 0-IV CRC, syöpää edeltävien sairauksien ryhmään kuuluvat potilaat, joilla on adenooma ja polyypit, ja muihin tauteihin kuuluvat potilaat, joilla on muu suolistosairaus, muut syövät ja kohteet, joilla ei ole merkkejä sairaudesta.

4. Kokeilumenettely

   Koulutus saatetaan päätökseen ennen kokeen alkua, mukaan lukien määrityksen toimintamenettely ja sarjojen ja instrumenttien käyttö. Tämä tutkimus on satunnaistettu, yksisokkotutkimus. Kaikkien potilaiden tulee allekirjoittaa tietoinen suostumus ennen 10 ml:n verenottoa. Näytteet käsitellään ja SEPT9-määritys suoritetaan käyttäjille annettujen ohjeiden mukaisesti. Kaikille koehenkilöille tehdään kolonoskopia ja/tai patologinen tutkimus diagnoosin vahvistamiseksi, ja SEPT9-määrityksen tulokset päätetään käyttäjille annettujen ohjeiden perusteella. Tilastollinen analyysi suoritetaan sekä SEPT9-määrityksen että kolonoskopian ja/tai patologisen tutkimuksen tulosten perusteella.

5. Näytteiden kerääminen ja säilytys

1) näytekokoelma:

1. näyte tulee kerätä avo- tai laitospotilailta ja näytetiedot kirjataan näytteenottolomakkeisiin.
2. näytteenotto: 10 ml ääreisverta (vain K2EDTA dekoagulantti).
3. määrityksen tarkkuuden varmistamiseksi näytteenotto on suoritettava tiukasti yllä olevien vaatimusten mukaisesti, muuten se voi vaikuttaa määrityksen tarkkuuteen.

2) näytteen säilytys- ja kuljetustapa: Säilytä ja siirrä näytteet sarjan käyttöohjeiden mukaisesti

6, SEPT9-määritys

SEPT9-geenin metylaatiomääritys (PCR-fluoresenssikoetinmenetelmä) koostuu kahdesta vaiheesta. Ensinnäkin plasmassa oleva soluton DNA uutetaan käyttämällä plasmankäsittelysarjaa, minkä jälkeen suoritetaan bisulfiittikonversio, jossa metyloitumaton sytosiini muuttuu, kun taas metyloitu sytosiini ei. Toiseksi suoritetaan reaaliaikainen PCR käyttäen bisulfiitilla muunnettua DNA:ta (bisDNA) templaattina templaatin monistumisen määrittämiseksi. PCR:n estoaine ja metylaatiospesifiset koettimet voivat toimia yhdessä erottaakseen metyloituneen ja metyloimattoman DNA:n. Beeta-aktiinia käytetään sisäisenä kontrollina plasman DNA:n laadun ja PCR-monistuksen validiteetin arvioimiseksi. Positiiviset ja negatiiviset kontrollit toimitetaan pakkauksessa laadunvalvontana, ja ne ajetaan rinnakkain näytteiden kanssa joka kerta.

7,Tietojen analysointi ja tilastot

SEPT9-määrityksen tiedot ja kaikkien koehenkilöiden kolonoskopiatiedot kerätään ja analysoidaan, lasketaan seuraavat parametrit:

Herkkyysspesifisyys Konsistenssipositiivinen ennustearvo (PPV) negatiivinen ennustearvo (NPV)

8, Etiikka

Kliinisen tutkimuksen budjettisuunnitelma toimitetaan osallistuvien sairaaloiden eettisen komitean tarkistettavaksi ennen kliinisen tutkimuksen alkamista. Selvitystä ei käynnistetä ilman komiteoiden hyväksyntää. Kaikki koehenkilöt allekirjoittavat tietoisen suostumuksen ennen verenottoa ja saavat tietoa plasman käytöstä ja testituloksista.

9, Tutkimuksen edistyminen

2014.02-2014.04 Kliinisten tutkimusten protokollien vahvistaminen ja henkilöstön koulutus näytteenottoa ja testausta varten

2014.04.-2014.08 Kliinisen tutkimuksen hakemus toimitetaan eettiselle toimikunnalle hyväksyttäväksi neljässä sairaalassa

2014.08.-2015.04 Aloita potilaiden rekrytointi ja yleistietojen kerääminen koehenkilöistä

2014.10.-2015.04 Näytteenotto ja testit

04.04-2015.7.2015 Kerää ja seuraa kolonoskopia- ja/tai patologiatietoja

2015.07-2015.09 Tietojen käsittely, tilastot ja analyysit

2015.10 Potilaiden haku päättyy ja koe päättyy

10, budjetti

Kustannukset sisältävät 1200 kohteen rekrytointikulut, laitevuokrakulut, testimateriaalikustannukset, näytteen käsittelymaksun, työvoimakustannukset, potilaskorvauskulut, matka- ja konferenssikulut, julkaisu- ja immateriaalioikeudet. BioChain kattaa kaikki kulut, koska tämän kokeilun käynnistää ja järjestää BioChain.

11,Julkaiseminen ja immateriaalioikeudet

1. aikoo julkaista 2-3 julkaisua SCI-indeksoiduissa aikakauslehdissä ja 3-4 artikkelia Kiinan kotimaisissa ydinlehdissä.
2. aikoo esittää yhden patentin

12, Tiedonhallinta

Kliinisten tutkimusten tietojen laatu on tulosten arvioinnin perusta. Kokeilutulosten todenmukaisuuden ja luotettavuuden varmistamiseksi tutkijat asettivat joukon tiedonhallinnan periaatteita. Tutkijat selittävät tässä tutkimuksessa tiedonhallinnan periaatteet perusteellisesti seuraavassa Tietohallintotoimikunnan kokoonpanosta ja vastuusta sekä tiedonhallinnan sisällöstä.

13.Tutkijaryhmä ja henkilöstö

Jotta vältettäisiin sairauden esiintyvyyden ja eri sairaaloiden potilassuhteen eroista johtuvat mahdolliset virheet, tässä kliinisessä tutkimuksessa valitaan neljä Pekingin sairaalaa potilaiden rekrytointiin. Koska näiden neljän sairaalan potilaat ovat pääasiassa Pohjois-Kiinasta, tutkimuspopulaatio edustaa tautien epidemiologiaa tässä osassa maata. Kokeeseen osallistuu neljän sairaalan ruuansulatuskanavan sairauksien, endoskopian ja yleiskirurgiaosaston lääkärit ja teknikot, he ovat:

Peking Union Medical College Hospital (Peking) Pekingin sotilassairaala (Peking) Syöpäsairaala Kiinan lääketieteen akatemia (Peking) Pekingin syöpäsairaala (Peking)