중국 인구에서 mSEPT9(Methylated Septin 9)를 사용한 CRC 스크리닝 (RESEPT)

1. 배경

   대장암(CRC)은 위장관계에서 세 번째로 흔한 악성 종양입니다. 대장암의 정기적인 검진, 조기 발견 및 조기 치료는 더 나은 예방과 치료를 달성할 수 있습니다. 현재 CRC 환자의 60%-70%는 말기까지 진단되지 않으며 사례의 11.8%만이 초기 단계에서 발견됩니다. 따라서 조기 검진율을 개선하여 CRC 사망률을 줄이는 것이 시급합니다. 중국에서는 초기 CRC 스크리닝을 위해 분변 잠혈 검사(FOBT)와 대장 내시경 검사를 현재 사용할 수 있습니다. FOBT는 저렴한 비용과 비침습성으로 인해 널리 사용되지만 많은 간섭 요인으로 인해 위양성률이 상대적으로 높습니다. 보다 발전된 FOBT인 분변면역화학검사(FIT)는 기존의 화학적 방법에 비해 검사 특이성이 크게 향상되었고 순응도는 높지만 여전히 다른 장 질환의 영향을 받기 때문에 양성 예측도가 낮습니다. 반면 대장내시경 검사는 침습성, 비용 및 합병증 위험으로 인해 순응도가 낮습니다.

   최근 몇 년 동안 혈장 기반 SEPT9 유전자 메틸화 분석은 CRC의 조기 발견을 위한 유망한 방법임이 입증되었습니다. 많은 임상 연구에서 메틸화된 SEPT9 유전자가 조기 CRC 검출에 유용한 바이오마커임을 입증했습니다. 현재 Epigenomics의 Epi proColon 2.0 CE는 전 세계적으로 유일하게 상용화된 SEPT9 유전자 메틸화 분석법입니다. 이 제품은 유럽 연합 CE 인증, 중국 FDA 및 아르헨티나 FDA의 승인을 받았습니다. 곧 미국 FDA 승인에 대한 합리적인 기대와 함께 미국 FDA에 주요 임상 데이터 제출을 완료했습니다. SEPT9 유전자 메틸화 분석에 기반한 서비스는 Quest, Arup, DX 컴패니언 및 일반 의료 절차 코드(CPT 코드) 81401의 감마 다이나케어와 같은 임상 실험실에서도 제공됩니다. 중국에서는 Epigenomics AG의 강력한 파트너인 BioChain(Beijing) Science and Technology, Inc가 Epigenomics AG의 계약을 통해 자체 SEPT9 유전자 메틸화 분석법을 개발했습니다.

2. 표본 크기 추정

   알려진 양성 검출률에 대한 방정식 N=Z2*(P(1-p))/E2를 기반으로 조사관은 실험에 필요한 샘플 수를 계산했습니다. 여기서 N은 샘플 크기를 나타내고 Z는 통계 매개변수( 95% 신뢰 구간에 대해 Z=1.96); E는 오류(이 연구에서는 5%가 선택됨)를 나타내고 P는 확률(긍정적인 양성 탐지율)을 나타냅니다. 조사관은 SEPT9 민감도에 대한 기존 문헌을 기반으로 P 값에 대해 0.75를 선택합니다. CRC 사례의 수는 위의 방정식에 따라 288로 계산됩니다. 조사관은 정보의 불완전성과 추적 손실로 인해 300건의 완전한 정보 수집을 목표로 합니다. 등. CRC가 중국 병원의 고위험 외래 환자 및 입원 환자의 30%를 차지한다는 추정에 근거하여 임상 시험의 총 환자 수는 1000건 이상이어야 합니다. 조사관은 추적률의 20% 손실을 고려하여 이 시험에서 1200건의 사례를 모집하는 것을 목표로 합니다.

   이 시험의 최종 실제 사례 수는 추적 손실, 불완전한 테스트 또는 임상 데이터 또는 테스트 기준을 충족하지 않는 샘플로 인해 1031건이었습니다.

3. 주제 그룹화

   모든 환자는 SEPT9 분석을 위한 혈액 채취 전에 그룹화되지 않으며, 선택 기준을 충족하는 모든 피험자에 대해 혈액 샘플을 채취합니다. 모든 기술자는 피험자의 임상 정보에 눈이 멀었습니다. SEPT9 분석 및 기타 스크리닝 테스트와의 공동 검출 가능성을 조사하기 위해 참여 환자의 의지와 의사의 판단에 따라 CEA(carcino-embryonic antigen) 및 FIT 테스트를 수행합니다. 데이터의 이 부분은 시험 종료 후 소급 분석에 사용됩니다.

   계획된 모든 검사가 완료되면 모든 피험자는 대장내시경 진단 및 병리학에 따라 CRC 그룹, 전암성 질병 그룹 및 기타 질병 그룹의 세 그룹으로 나뉘며 CRC 그룹은 0-IV 단계 환자로 구성됩니다. 전암성 질환군은 선종 및 폴립 환자를 포함하고, 기타 질환군은 다른 장 질환, 다른 암 및 질환의 증거가 없는 대상체를 포함한다.

4. 재판 절차

   분석의 작동 절차와 키트 및 장비 사용을 포함하여 시험이 시작되기 전에 교육이 완료됩니다. 이 시험은 무작위 단일 맹검 연구입니다. 모든 환자는 10ml 채혈 전에 정보에 입각한 동의서에 서명해야 합니다. 샘플이 처리되고 SEPT9 분석은 사용자 지침에 따라 수행됩니다. 모든 피험자는 진단을 확인하기 위해 대장내시경 및/또는 병리학적 검사를 받게 되며, SEPT9 분석 결과는 사용자 지침에 따라 결정됩니다. 통계 분석은 SEPT9 분석 및 대장내시경 및/또는 병리학적 검사의 결과를 기반으로 수행됩니다.

5. 샘플 수집 및 보관

1) 샘플 수집:

1. 외래환자나 입원환자로부터 검체를 채취하고 검체정보를 검체채취양식에 기록하여야 한다.
2. 샘플 수집: 10mL 말초 혈액(K2EDTA 응고제만 해당).
3. 분석의 정확성을 보장하기 위해 샘플 수집은 위의 요구 사항에 따라 엄격하게 수행되어야 합니다. 그렇지 않으면 분석의 정확성에 영향을 미칠 수 있습니다.

2) 검체 보관 및 운반 방법 : 키트 사용설명서에 따라 검체를 보관 및 이송

6, SEPT9 검정

SEPT9 유전자 메틸화 분석(PCR 형광 탐침법)은 두 단계로 구성된다. 먼저 Plasma Processing Kit를 이용하여 혈장 내 무세포 DNA를 추출한 후, 메틸화되지 않은 사이토신은 전환되고 메틸화되지 않은 사이토신은 전환되지 않는 바이설파이트 전환(bisulfite conversion) 과정을 거칩니다. 둘째, bisulfite-converted DNA (bisDNA)를 주형으로 사용하여 실시간 PCR을 수행하여 주형의 증폭을 결정합니다. PCR 차단제와 메틸화 특이적 프로브는 함께 작용하여 메틸화된 DNA와 메틸화되지 않은 DNA를 구별할 수 있습니다. Beta-actin은 혈장 DNA 품질과 PCR 증폭의 유효성을 평가하기 위한 내부 대조군으로 사용됩니다. 양성 및 음성 대조군은 품질 관리로 키트에 제공되며 매번 샘플과 병행하여 실행됩니다.

7, 데이터 분석 및 통계

모든 피험자의 SEPT9 분석 데이터 및 대장내시경 데이터를 수집 및 분석하고 다음 매개변수를 계산합니다.

민감도 특이성 일관성 양성 예측값(PPV) 음성 예측값(NPV)

8, 윤리

임상시험 예산안은 임상시험 시작 전 참여병원 윤리위원회에 제출해 심의를 받는다. 연구는 위원회의 승인 없이 시작되지 않습니다. 모든 피험자는 채혈 전에 정보에 입각한 동의서에 서명하고 혈장 사용 및 검사 결과를 통보받습니다.

9, 연구 진행

2014.02-2014.04 임상시험 프로토콜 확인 및 검체 채취 및 검사 인력 교육

2014.04-2014.08 4개 병원에서 승인을 위해 윤리위원회에 임상시험 신청서 제출

2014.08-2015.04 환자 모집 및 피험자 일반 정보 수집 시작

2014.10-2015.04 샘플 수집 및 테스트

2015.04-2015.07 대장내시경 및/또는 병리 정보 수집 및 추적

2015.07-2015.09 데이터 처리, 통계 및 분석

2015.10 환자 모집 마감 및 임상 종료

10, 예산

비용에는 피험자 1200명 모집비, 장비임대료, 검사재료비, 검체처리비, 인건비, 환자보상비, 출장비, 학회비, 출판비, 지적재산권(IP)비 등이 포함된다. 이 시험은 BioChain이 시작하고 조직하므로 모든 비용은 BioChain이 부담합니다.

11, 출판 및 지적 재산권

1. SCI(Science Citation Index) 색인 저널에 2~3편, 중국 국내 핵심 저널에 3~4편의 논문을 게재할 계획이다.
2. 특허 1건 제출 예정

12, 데이터 관리

임상시험 데이터의 품질은 결과 평가의 기초입니다. 실험 결과의 현실성과 신뢰성을 보장하기 위해 조사자들은 일련의 데이터 관리 원칙을 설정했습니다. 조사관은 자료관리위원회의 구성과 책임, 자료관리의 내용에서 본 연구의 자료관리 원칙을 다음과 같이 충분히 설명한다.

13.연구팀 및 인원

병원마다 질병 발생률과 환자 비율의 차이로 인해 발생할 수 있는 오류를 피하기 위해 이번 임상시험에서 환자 모집을 위해 베이징의 4개 병원을 선정할 예정이다. 이 4개 병원의 환자는 주로 중국 북부 출신이기 때문에 연구 인구는 이 지역의 질병 역학을 대표합니다. 4개 병원의 위장병, 내시경 및 일반외과의 의사와 기술자가 임상시험에 참여할 예정이며 이들은 다음과 같습니다.

베이징연합의과대학병원(베이징) 베이징군종합병원(베이징) 암병원 중국의과학원(베이징) 베이징암병원(베이징)