散発性筋萎縮性側索硬化症における生体エネルギー学とタンパク質代謝 (Fibro-ALS)
はじめに: 筋萎縮性側索硬化症 (ALS) は、脳と脊髄の運動ニューロンの変性疾患です。 この疾患の病態生理学的メカニズムは不明のままです。 ALS の平均発症年齢は約 60 歳で、患者の平均生存期間は約 2 年です。 この疾患は、呼吸不全による死亡につながる進行性麻痺の原因です。 利用可能な唯一の治療法はリルゾールであり、病気の進行に対する効果は非常に控えめです. ALS は 3 番目の神経変性疾患であり、フランスで 6000 人、世界で 15 万人が罹患しています。 病気の発生に関与する主役の中で、ミトコンドリアの摂動とタンパク質の蓄積が中心的な要素のようです。
目的: 散発性 ALS におけるエネルギーおよびタンパク質代謝の影響を正確に把握し、この疾患の潜在的なバイオマーカーを特定し、新しい治療法をテストすること。
方法: 研究者は、散発性 ALS 患者から得られた初代皮膚線維芽細胞における細胞増殖、生体エネルギー、ミトコンドリアのダイナミクス、フリーラジカル生成、細胞質封入体の存在、細胞骨格構造、およびストレス応答を研究します。 この研究は、運動ニューロン疾患、ミトコンドリア代謝、神経細胞骨格をそれぞれ専門とする 3 つのセンターで 3 年間にわたって実施されます。
見通し: 研究者が ALS 線維芽細胞とコントロールの違いを特定できれば、その結果は重要な代謝関与を伴う全身性疾患の仮説を補強し、ALS の病態生理学的メカニズムをより適切に定義し、潜在的なバイオマーカーを見つけ、新しい治療法。
調査の概要
詳細な説明
治験責任医師は、散発性 ALS 患者由来の線維芽細胞を研究します。
性別、年齢、発症年齢、臨床症状、電気生理学的および呼吸パラメータ、治療などの臨床パラメータが収集されます。
患者およびコントロール由来の線維芽細胞は、皮膚生検から増幅および培養されます。
初代線維芽細胞培養物は、書面による同意を得た後、対照被験者および患者から得られた皮膚生検に由来します。 増幅は継代1から6まで行われ、細胞株あたり10個のサンプルの細胞凍結保存の時間が与えられます。 すべての実験は、老化によるアーチファクトを避けるために、6 から 25 の範囲の同様の継代数を持つ細胞で実施されます。
各株の細胞増殖は、IncuCyte ZOOM® システム (Essen Biosciences)、細胞インキュベーターに常駐する顕微鏡ガントリー、および画像データを収集および処理するネットワーク化された外部コントローラー ハード ドライブで監視されます。 細胞増殖は、相対細胞密度 (取得した領域の総面積に対する占有面積の比率) を使用して、各時点で自動的に計算されます。
線維芽細胞の呼吸パラメーターは、高解像度オキシグラフ (OROBOROS) で正確に監視されます。 ミトコンドリア呼吸鎖の各複合体の酵素活性を分光法で測定し、ミトコンドリア膜電位を蛍光顕微鏡（TMRMプローブ）で調べます。 研究者はまた、ミトコンドリアのダイナミクスとミトコンドリアネットワークの構造を、蛍光顕微鏡と超解像顕微鏡 (SRM、Roper) で研究します。 フリーラジカルの生成は、酸化ストレスに敏感なプローブで推定されます。 最後に、メタボロミクス研究 (質量分析 QTRAP LC/MS/MS 5500 ABSciex) を実施して、細胞内の代謝産物を正確に特徴付け、それらの代謝プロファイルを評価します。
研究者は、免疫蛍光技術を用いてタンパク質封入体 (中間フィラメント、TDP43、FUS、ユビキチン) を検索します。 ウエスタンブロットは、タンパク質代謝を研究するために実施されます。 細胞骨格の構造は SRM と蛍光顕微鏡で分析され、研究者はニューロフィラメントを発現させ、細胞骨格とタンパク質代謝への影響を研究するために線維芽細胞をトランスフェクトしようとします。
研究者は、ストレス (低酸素 SCI-tive Dual、飢餓) および老化 (高い継代数) に対する細胞の応答を研究します。
研究の種類
入学 (予想される)
段階
- 初期フェーズ 1
参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
受講資格のある性別
説明
包含基準 :
- 自由署名 書面による同意
- 18歳から80歳まで
- El Escorial Criteria によって定義された ALS
- 通常の神経学的検査
除外基準:
- 代謝への影響を受けやすい併存疾患または治療
- 鑑別診断の疑い、早期および後期型 (<6 か月 > 3 年)
- El Escorial Criteria で定義されていない ALS
- 参加同意の撤回
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
- 主な目的：基礎科学
- 割り当て：非ランダム化
- 介入モデル：並列代入
- マスキング：なし（オープンラベル）
武器と介入
参加者グループ / アーム |
介入・治療 |
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他の：忍耐
El Escorial Criteria によって定義された ALS。
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他の：コントロール
通常の検査で無症候性の被験者。
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この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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線維芽細胞増殖の動力学
時間枠：24時間
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線維芽細胞株の増殖率
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24時間
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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ミトコンドリアの代謝
時間枠：24時間
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線維芽細胞の呼吸パラメータは、異なる代謝段階における線維芽細胞の酸素消費率を測定する方法であるオキシグラフィーによって正確に研究されます。
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24時間
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タンパク質代謝
時間枠：24時間
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標的タンパク質の細胞質内封入体の存在が求められる。
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24時間
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老化のストレスの答え.
時間枠：24時間
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低酸素状態と栄養不足における細胞株のストレスによる答えが研究されます。
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24時間
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協力者と研究者
研究記録日
主要日程の研究
研究開始
一次修了 (予想される)
研究の完了 (予想される)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (見積もり)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (見積もり)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
本研究に関する用語
キーワード
追加の関連 MeSH 用語
その他の研究ID番号
- 2016/36
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