Bioenergetyka i metabolizm białek w sporadycznym stwardnieniu zanikowym bocznym (Fibro-ALS)
WSTĘP: Stwardnienie zanikowe boczne (ALS) jest chorobą zwyrodnieniową neuronów ruchowych mózgu i rdzenia kręgowego. Mechanizmy patofizjologiczne choroby pozostają nieznane. Średni wiek zachorowania na ALS to około 60 lat, a średni czas przeżycia pacjentów to około 2 lata. Choroba jest odpowiedzialna za postępujący paraliż prowadzący do śmierci z powodu niewydolności oddechowej. Jedynym dostępnym leczeniem jest Riluzol, który ma bardzo niewielką skuteczność w postępie choroby. ALS jest trzecią chorobą neurodegeneracyjną, dotykającą 6000 osób we Francji i 150 000 na świecie. Wśród głównych bohaterów zaangażowanych w występowanie choroby zaburzenia mitochondrialne i nagromadzenie białek wydają się być elementami centralnymi.
CELE: Doprecyzowanie implikacji metabolizmu energii i białek w sporadycznych postaciach ALS, zidentyfikowanie potencjalnych biomarkerów choroby i przetestowanie nowych terapii.
METODY: Badacze będą badać wzrost komórek, bioenergetykę, dynamikę mitochondriów, produkcję wolnych rodników, obecność wtrąceń cytoplazmatycznych, strukturę cytoszkieletu i odpowiedź na stres w pierwotnych fibroblastach skóry uzyskanych od pacjentów z ALS sporadycznie. Badania będą prowadzone przez okres trzech lat w 3 ośrodkach specjalizujących się odpowiednio w chorobach neuronu ruchowego, metabolizmie mitochondrialnym i cytoszkielecie neuronalnym.
PERSPEKTYWY: Jeśli badaczom uda się zidentyfikować różnice między fibroblastami ALS a grupą kontrolną, wyniki będą kluczowymi elementami do wzmocnienia hipotezy choroby ogólnoustrojowej z istotnym udziałem metabolicznym, do lepszego zdefiniowania mechanizmów patofizjologicznych ALS, znalezienia potencjalnych biomarkerów i przetestowania nowych terapie.
Przegląd badań
Status
Interwencja / Leczenie
Szczegółowy opis
Badacze będą badać fibroblasty pochodzące od sporadycznych pacjentów z ALS.
Zostaną zebrane parametry kliniczne, takie jak płeć, wiek, wiek zachorowania, obraz kliniczny, parametry elektrofizjologiczne i oddechowe, leczenie.
Fibroblasty pochodzące od pacjentów i kontroli będą amplifikowane i hodowane z biopsji skóry.
Pierwotne hodowle komórek fibroblastów będą pochodzić z biopsji skóry pobranych od osób kontrolnych oraz od pacjentów po uzyskaniu pisemnej zgody. Amplifikacje będą przeprowadzane od pasażu 1 do 6, dając czas na kriokonserwację komórek 10 próbek na linię komórkową. Wszystkie eksperymenty zostaną przeprowadzone na komórkach o podobnej liczbie pasaży, w zakresie od 6 do 25, aby uniknąć artefaktów związanych ze starzeniem.
Wzrost komórek każdej linii będzie monitorowany za pomocą systemu IncuCyte ZOOM® (Essen Biosciences), suwnicy mikroskopowej umieszczonej w inkubatorze komórek oraz połączonego z siecią zewnętrznego dysku twardego kontrolera, który gromadzi i przetwarza dane obrazu. Wzrost komórek będzie automatycznie obliczany w każdym punkcie czasowym przy użyciu względnej gęstości komórek (stosunek zajmowanego obszaru do całkowitego obszaru pobranych regionów).
Parametry oddechowe fibroblastów będą dokładnie monitorowane za pomocą oksygrafu o wysokiej rozdzielczości (OROBOROS). Aktywność enzymatyczna każdego kompleksu mitochondrialnego łańcucha oddechowego będzie mierzona metodą spektrometrii, a potencjał błony mitochondrialnej będzie badany za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej (sonda TMRM). Badacze będą również badać dynamikę mitochondriów i architekturę sieci mitochondrialnej za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej i mikroskopii superrozdzielczej (SRM, Roper). Produkcja wolnych rodników będzie szacowana za pomocą sond wrażliwych na stres oksydacyjny. Na koniec przeprowadzone zostanie badanie metabolomiczne (spektrometria masowa QTRAP LC/MS/MS 5500 ABSciex) w celu dokładnego scharakteryzowania metabolitów w komórkach i oceny ich profilu metabolicznego.
Badacze będą szukać inkluzji białkowych (filamenty pośrednie, TDP43, FUS, ubikwityna) za pomocą technik immunofluorescencyjnych. Wykonane zostaną Western Blots w celu zbadania metabolizmu białek. Architektura cytoszkieletu zostanie przeanalizowana w SRM i mikroskopii fluorescencyjnej, a badacze spróbują transfekować fibroblasty w celu ekspresji neurofilamentów i zbadać wpływ na cytoszkielet i metabolizm białek.
Badacze będą badać reakcję komórek na stres (niedotlenienie SCI-tive Dual, głód) oraz na starzenie się (wysoka liczba pasaży).
Typ studiów
Zapisy (Oczekiwany)
Faza
- Wczesna faza 1
Kryteria uczestnictwa
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
Akceptuje zdrowych ochotników
Płeć kwalifikująca się do nauki
Opis
Kryteria przyjęcia :
- bezpłatnie podpisaną pisemną zgodę
- w wieku od 18 do 80 lat
- ALS zdefiniowany przez El Escorial Criteria
- normalne badanie neurologiczne
Kryteria wyłączenia:
- choroby współistniejące lub leczenie podatne na wpływ na metabolizm
- podejrzenie diagnostyki różnicowej, formy wczesne i późne (<6 miesięcy > 3 lata)
- ALS niezdefiniowany przez kryteria El Escorial
- cofnięcie zgody na udział
Plan studiów
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
- Główny cel: Podstawowa nauka
- Przydział: Nielosowe
- Model interwencyjny: Przydział równoległy
- Maskowanie: Brak (otwarta etykieta)
Broń i interwencje
Grupa uczestników / Arm |
Interwencja / Leczenie |
|---|---|
|
Inny: Pacjenci
ALS zdefiniowany przez El Escorial Criteria.
|
|
|
Inny: Sterownica
Osoby bezobjawowe z normalnym badaniem.
|
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Kinetyka wzrostu fibroblastów
Ramy czasowe: 24 godziny
|
Tempo wzrostu linii fibroblastów
|
24 godziny
|
Miary wyników drugorzędnych
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Metabolizm mitochondrialny
Ramy czasowe: 24 godziny
|
parametry oddychania fibroblastów zostaną dokładnie zbadane za pomocą oksygrafii, metody polegającej na pomiarze tempa zużycia tlenu przez fibroblasty w różnych fazach metabolicznych
|
24 godziny
|
|
Metabolizm białek
Ramy czasowe: 24 godziny
|
Poszukiwana będzie obecność wewnątrzcytoplazmatycznej inkluzji białka docelowego.
|
24 godziny
|
|
odpowiedź na stres w starzeniu
Ramy czasowe: 24 godziny
|
zbadana zostanie odpowiedź spowodowana stresem linii komórkowych w niedotlenieniu i braku składników odżywczych.
|
24 godziny
|
Współpracownicy i badacze
Sponsor
Daty zapisu na studia
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów
Zakończenie podstawowe (Oczekiwany)
Ukończenie studiów (Oczekiwany)
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
Pierwszy wysłany (Oszacować)
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Oszacować)
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
Ostatnia weryfikacja
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Dodatkowe istotne warunki MeSH
Inne numery identyfikacyjne badania
- 2016/36
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .