Bioenergetik og proteinmetabolisme i sporadisk amyotrofisk lateral sklerose (Fibro-ALS)
INTRODUKTION: Amyotrofisk lateral sklerose (ALS) er en degenerativ sygdom i de motoriske neuroner i hjernen og rygmarven. De patofysiologiske mekanismer af sygdommen forbliver ukendte. Den gennemsnitlige alder for debut af ALS er omkring 60 år gammel, og den gennemsnitlige overlevelse for patienter er omkring 2 år. Sygdommen er ansvarlig for en progressiv lammelse, der fører til døden på grund af respirationssvigt. Den eneste tilgængelige behandling er Riluzole, med en meget beskeden effektivitet på udviklingen af sygdommen. ALS er den tredje neurodegenerative sygdom, der rammer 6.000 personer i Frankrig, 150.000 i verden. Blandt hovedpersonerne, der er involveret i forekomsten af sygdommen, synes mitokondrieforstyrrelser og proteinakkumuleringer at være centrale elementer.
MÅL: At præcisere implikationen af energi- og proteinmetabolisme i de sporadiske former for ALS, at identificere potentielle biomarkører for sygdommen og at teste nye terapier.
METODER: Forskerne vil studere cellevækst, bioenergi, mitokondriel dynamik, produktion af frie radikaler, tilstedeværelse af cytoplasmatiske inklusioner, cytoskeletstruktur og stressrespons i primære hudfibroblaster opnået fra sporadiske ALS-patienter. Undersøgelsen vil blive udført over en periode på tre år i 3 centre specialiseret i henholdsvis motoriske neuronsygdomme, mitokondriel metabolisme og neuronalt cytoskelet.
UDSIGTIGHEDER: Hvis efterforskerne opnår at identificere forskelle mellem ALS fibroblaster og kontroller, vil resultaterne være nøgleelementer til at forstærke hypotesen om en systemisk sygdom med en vigtig metabolisk deltagelse, for bedre at definere ALS patofysiologiske mekanismer, for at finde potentielle biomarkører og for at teste nye terapier.
Studieoversigt
Status
Betingelser
Intervention / Behandling
Detaljeret beskrivelse
Efterforskerne vil studere fibroblaster, der stammer fra sporadiske ALS-patienter.
Kliniske parametre vil blive indsamlet såsom køn, alder, debutalder, klinisk præsentation, elektrofysiologiske og respiratoriske parametre, behandlinger.
Patienter og kontrolafledte fibroblaster vil blive amplificeret og dyrket fra hudbiopsier.
Primære fibroblastcellekulturer vil blive afledt af hudbiopsier opnået fra kontrolpersoner og fra patienterne efter indhentet skriftligt samtykke. Amplifikationer vil blive udført fra passage 1 til 6, hvilket giver tid til cellekryokonservering af 10 prøver pr. cellelinje. Alle eksperimenter vil blive udført på celler med lignende passagetal, der spænder fra 6 til 25, for at undgå artefakter på grund af senescens.
Cellevækst i hver linje vil blive overvåget med IncuCyte ZOOM®-systemet (Essen Biosciences), et mikroskopportal, der ligger i en celleinkubator, og en ekstern controller-harddisk, der er tilsluttet i netværk, der samler og behandler billeddata. Cellevækst vil automatisk blive beregnet på hvert tidspunkt ved hjælp af den relative celletæthed (forholdet mellem det besatte område og det samlede areal af de erhvervede regioner).
Fibroblasternes respiratoriske parametre vil blive overvåget præcist med en højopløsningsoxygraf (OROBOROS). Enzymatisk aktivitet af hvert kompleks af den mitokondrielle respiratoriske kæde vil blive målt ved spektrometri, og mitokondriemembranpotentialet vil blive undersøgt med fluorescensmikroskopi (TMRM probe). Forskerne vil også studere mitokondriel dynamik og arkitekturen af mitokondrielt netværk med fluorescensmikroskopi og superopløsningsmikroskopi (SRM, Roper). Produktionen af frie radikaler vil blive estimeret med prober, der er følsomme over for oxidativt stress. Til sidst vil der blive udført et metabolomisk studie (massespektrometri QTRAP LC/MS/MS 5500 ABSciex) for at karakterisere præcist metabolitterne i cellerne og for at vurdere deres metaboliske profil.
Efterforskerne vil søge efter proteininklusioner (mellemfilamenter, TDP43, FUS, ubiquitin) med immunfluorescensteknik. Western Blots vil blive udført for at studere proteinmetabolismen. Cytoskelettets arkitektur vil blive analyseret i SRM og fluorescensmikroskopi, og efterforskerne vil forsøge at transficere fibroblaster for at udtrykke neurofilamenter og studere konsekvenserne for cytoskelettet og proteinmetabolismen.
Efterforskerne vil studere cellernes reaktion på stress (hypoxi SCI-tive Dual, sult) og på senescens (høje passagetal).
Undersøgelsestype
Tilmelding (Forventet)
Fase
- Tidlig fase 1
Deltagelseskriterier
Berettigelseskriterier
Aldre berettiget til at studere
Tager imod sunde frivillige
Køn, der er berettiget til at studere
Beskrivelse
Inklusionskriterier:
- et frit underskrevet et skriftligt samtykke
- i alderen mellem 18 og 80 år
- ALS defineret af El Escorial Criteria
- normal neurologisk undersøgelse
Ekskluderingskriterier:
- komorbiditet eller behandling, der er modtagelig for at påvirke stofskiftet
- mistænkt differentialdiagnose, tidlige og sene former (<6 måneder > 3 år)
- ALS er ikke defineret af El Escorial Criteria
- tilbagekaldelse af samtykke til deltagelse
Studieplan
Hvordan er undersøgelsen tilrettelagt?
Design detaljer
- Primært formål: Grundvidenskab
- Tildeling: Ikke-randomiseret
- Interventionel model: Parallel tildeling
- Maskning: Ingen (Åben etiket)
Våben og indgreb
Deltagergruppe / Arm |
Intervention / Behandling |
|---|---|
|
Andet: Patienter
ALS defineret af El Escorial Criteria.
|
|
|
Andet: Kontrolelementer
Asymptomatiske forsøgspersoner med normal undersøgelse.
|
Hvad måler undersøgelsen?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Kinetik af fibroblastvækst
Tidsramme: 24 timer
|
Væksthastighederne af fibroblastlinjerne
|
24 timer
|
Sekundære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Mitokondriel metabolisme
Tidsramme: 24 timer
|
åndedrætsparametrene for fibroblaster vil blive undersøgt præcist ved oxygrafi, en metode, der består i at måle fibroblasters iltforbrug i forskellige metaboliske faser
|
24 timer
|
|
Proteisk stofskifte
Tidsramme: 24 timer
|
Tilstedeværelsen af intracytoplasmatisk inklusion af målprotein vil blive søgt.
|
24 timer
|
|
stress i alderdom svar
Tidsramme: 24 timer
|
svaret på grund af stress af cellelinjer i hypoxi og ernæringsmæssig mangel vil blive undersøgt.
|
24 timer
|
Samarbejdspartnere og efterforskere
Sponsor
Datoer for undersøgelser
Studer store datoer
Studiestart
Primær færdiggørelse (Forventet)
Studieafslutning (Forventet)
Datoer for studieregistrering
Først indsendt
Først indsendt, der opfyldte QC-kriterier
Først opslået (Skøn)
Opdateringer af undersøgelsesjournaler
Sidste opdatering sendt (Skøn)
Sidste opdatering indsendt, der opfyldte kvalitetskontrolkriterier
Sidst verificeret
Mere information
Begreber relateret til denne undersøgelse
Yderligere relevante MeSH-vilkår
Andre undersøgelses-id-numre
- 2016/36
Disse oplysninger blev hentet direkte fra webstedet clinicaltrials.gov uden ændringer. Hvis du har nogen anmodninger om at ændre, fjerne eller opdatere dine undersøgelsesoplysninger, bedes du kontakte register@clinicaltrials.gov. Så snart en ændring er implementeret på clinicaltrials.gov, vil denne også blive opdateret automatisk på vores hjemmeside .