Биоэнергетика и белковый обмен при спорадическом боковом амиотрофическом склерозе (Fibro-ALS)
ВВЕДЕНИЕ Боковой амиотрофический склероз (БАС) — дегенеративное заболевание двигательных нейронов головного и спинного мозга. Патофизиологические механизмы заболевания остаются неизвестными. Средний возраст начала БАС составляет около 60 лет, а средняя выживаемость пациентов составляет около 2 лет. Заболевание вызывает прогрессивный паралич, приводящий к смерти от дыхательной недостаточности. Единственным доступным средством лечения является рилузол с очень скромной эффективностью в отношении прогрессирования заболевания. БАС является третьим нейродегенеративным заболеванием, поражающим 6000 человек во Франции и 150 000 человек в мире. Среди протагонистов, вовлеченных в возникновение болезни, митохондриальные возмущения и скопления белков, по-видимому, являются центральными элементами.
ЦЕЛИ: Уточнить влияние энергетического и белкового метаболизма на спорадические формы БАС, идентифицировать потенциальные биомаркеры заболевания и протестировать новые методы лечения.
МЕТОДЫ. Исследователи будут изучать рост клеток, биоэнергетику, митохондриальную динамику, образование свободных радикалов, наличие цитоплазматических включений, структуру цитоскелета и реакцию на стресс в первичных фибробластах кожи, полученных от спорадических больных БАС. Исследование будет проводиться в течение трех лет в 3 центрах, специализирующихся соответственно на заболеваниях двигательных нейронов, метаболизме митохондрий и цитоскелете нейронов.
ПЕРСПЕКТИВЫ: Если исследователям удастся выявить различия между фибробластами БАС и контролем, результаты станут ключевыми элементами для подтверждения гипотезы о системном заболевании с важным метаболическим участием, для лучшего определения патофизиологических механизмов БАС, поиска потенциальных биомаркеров и тестирования новых терапии.
Обзор исследования
Статус
Вмешательство/лечение
Подробное описание
Исследователи будут изучать фибробласты, полученные от пациентов со спорадическим БАС.
Будут собираться клинические параметры, такие как пол, возраст, возраст начала, клиническая картина, электрофизиологические и респираторные параметры, лечение.
Фибробласты, полученные от пациентов и контролей, будут амплифицировать и культивировать из биопсии кожи.
Первичные культуры клеток фибробластов будут получены из биопсий кожи, полученных от контрольных субъектов и от пациентов после получения письменного согласия. Амплификации будут выполняться с пассажа 1 до 6, что позволяет время для криоконсервации клеток 10 образцов на клеточную линию. Все эксперименты будут проводиться на клетках с одинаковым количеством пассажей, от 6 до 25, чтобы избежать артефактов из-за старения.
Рост клеток каждой линии будет контролироваться с помощью системы IncuCyte ZOOM® (Essen Biosciences), гентри микроскопа, который находится в клеточном инкубаторе, и сетевого жесткого диска внешнего контроллера, который собирает и обрабатывает данные изображения. Рост клеток будет автоматически рассчитываться в каждый момент времени с использованием относительной плотности клеток (отношение занимаемой площади к общей площади полученных областей).
Дыхательные параметры фибробластов будут точно контролироваться с помощью оксиграфа высокого разрешения (OROBOROS). Ферментативную активность каждого комплекса митохондриальной дыхательной цепи будут измерять спектрометрически, а потенциал митохондриальной мембраны изучать с помощью флуоресцентной микроскопии (зонд TMRM). Исследователи также изучат митохондриальную динамику и архитектуру митохондриальной сети с помощью флуоресцентной микроскопии и микроскопии сверхвысокого разрешения (SRM, Roper). Производство свободных радикалов будет оцениваться с помощью датчиков, чувствительных к окислительному стрессу. Наконец, будет проведено метаболическое исследование (масс-спектрометрия QTRAP LC/MS/MS 5500 ABSciex), чтобы точно охарактеризовать метаболиты в клетках и оценить их метаболический профиль.
Исследователи будут искать белковые включения (промежуточные филаменты, TDP43, FUS, убиквитин) с помощью иммунофлуоресцентной техники. Вестерн-блоты будут проводиться для изучения белкового обмена. Архитектура цитоскелета будет проанализирована с помощью SRM и флуоресцентной микроскопии, и исследователи попытаются трансфецировать фибробласты, чтобы экспрессировать нейрофиламенты и изучить последствия для цитоскелета и белкового метаболизма.
Исследователи изучат реакцию клеток на стресс (гипоксия SCI-tive Dual, голодание) и на старение (большое число пассажей).
Тип исследования
Регистрация (Ожидаемый)
Фаза
- Ранняя фаза 1
Критерии участия
Критерии приемлемости
Возраст, подходящий для обучения
Принимает здоровых добровольцев
Полы, имеющие право на обучение
Описание
Критерии включения :
- свободное подписанное письменное согласие
- в возрасте от 18 до 80 лет
- БАС определяется критериями Эль Эскориала
- обычный неврологический осмотр
Критерий исключения:
- сопутствующие заболевания или лечение, способное повлиять на обмен веществ
- дифференциальная диагностика с подозрением на раннюю и позднюю формы (<6 мес > 3 лет)
- БАС не определяется критериями Эль Эскориала
- отзыв согласия на участие
Учебный план
Как устроено исследование?
Детали дизайна
- Основная цель: Фундаментальная наука
- Распределение: Нерандомизированный
- Интервенционная модель: Параллельное назначение
- Маскировка: Нет (открытая этикетка)
Оружие и интервенции
Группа участников / Армия |
Вмешательство/лечение |
|---|---|
|
Другой: Пациенты
БАС определяется критериями Эль Эскориала.
|
|
|
Другой: Элементы управления
Бессимптомные субъекты с нормальным обследованием.
|
Что измеряет исследование?
Первичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Кинетика роста фибробластов
Временное ограничение: 24 часа
|
Скорость роста линий фибробластов
|
24 часа
|
Вторичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Митохондриальный метаболизм
Временное ограничение: 24 часа
|
параметры дыхания фибробластов будут точно изучены с помощью оксиграфии, метода, заключающегося в измерении скорости потребления кислорода фибробластами в разных фазах метаболизма.
|
24 часа
|
|
Белковый метаболизм
Временное ограничение: 24 часа
|
Будет искаться наличие внутрицитоплазматического включения целевого белка.
|
24 часа
|
|
стресс в старости ответ
Временное ограничение: 24 часа
|
ответ из-за стресса клеточных линий при гипоксии и недостатке питания будет изучен.
|
24 часа
|
Соавторы и исследователи
Спонсор
Даты записи исследования
Изучение основных дат
Начало исследования
Первичное завершение (Ожидаемый)
Завершение исследования (Ожидаемый)
Даты регистрации исследования
Первый отправленный
Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества
Первый опубликованный (Оценивать)
Обновления учебных записей
Последнее опубликованное обновление (Оценивать)
Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества
Последняя проверка
Дополнительная информация
Термины, связанные с этим исследованием
Дополнительные соответствующие термины MeSH
- Патологические процессы
- Метаболические заболевания
- Заболевания центральной нервной системы
- Заболевания нервной системы
- Нервно-мышечные заболевания
- Нейродегенеративные заболевания
- Заболевания спинного мозга
- TDP-43 Протеинопатии
- Недостатки протеостаза
- Склероз
- Болезнь двигательных нейронов
- Боковой амиотрофический склероз
Другие идентификационные номера исследования
- 2016/36
Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .