Bioenergetika és fehérjeanyagcsere sporadikus amiotrófiás laterális szklerózisban (Fibro-ALS)
BEVEZETÉS: Az amiotróf laterális szklerózis (ALS) az agy és a gerincvelő motoros neuronjainak degeneratív betegsége. A betegség patofiziológiai mechanizmusai ismeretlenek. Az ALS kialakulásának átlagos életkora körülbelül 60 év, a betegek átlagos túlélése körülbelül 2 év. A betegség progresszív bénulásért felelős, amely légzési elégtelenségből eredő halálhoz vezet. Az egyetlen elérhető kezelés a Riluzole, amely nagyon szerény hatást gyakorol a betegség progressziójára. Az ALS a harmadik neurodegeneratív betegség, amely 6000 embert érint Franciaországban, és 150 000-et a világon. A betegség előfordulásában részt vevő főszereplők között központi elemnek tűnnek a mitokondriális perturbációk és a fehérje felhalmozódások.
CÉLKITŰZÉSEK: Pontosítani az energia- és fehérjeanyagcsere hatását az ALS szórványos formáiban, azonosítani a betegség lehetséges biomarkereit és új terápiákat tesztelni.
MÓDSZEREK: A kutatók a sejtnövekedést, a bioenergetikát, a mitokondriális dinamikát, a szabad gyökök termelését, a citoplazmatikus zárványok jelenlétét, a citoszkeleton szerkezetét és a stresszválaszt vizsgálják sporadikus ALS-betegekből nyert primer bőrfibroblasztokban. A vizsgálatot három éven keresztül fogják lefolytatni 3 központban, amelyek a motoros neuronbetegségekre, a mitokondriális anyagcserére és a neuronális citoszkeletonra specializálódtak.
KITEKINTÉS: Ha a kutatók sikerül azonosítani az ALS fibroblasztok és a kontrollok közötti különbségeket, az eredmények kulcsfontosságú elemei lesznek a szisztémás betegség hipotézisének megerősítésében, amely jelentős metabolikus részvétellel jár, jobban meghatározza az ALS patofiziológiai mechanizmusait, megtalálja a potenciális biomarkereket és újakat tesztel. terápiák.
A tanulmány áttekintése
Állapot
Körülmények
Beavatkozás / kezelés
Részletes leírás
A kutatók szórványos ALS-betegekből származó fibroblasztokat fognak tanulmányozni.
Olyan klinikai paramétereket gyűjtenek, mint a nem, életkor, kezdeti kor, klinikai kép, elektrofiziológiai és légzési paraméterek, kezelések.
A betegekből és a kontrollokból származó fibroblasztokat amplifikálják és bőrbiopsziákból tenyésztik.
Az elsődleges fibroblaszt sejttenyészeteket a kontroll alanyoktól és a betegektől származó bőrbiopsziákból nyerik, miután írásos beleegyezést kaptak. Az amplifikációkat az 1. és a 6. passzázs között hajtják végre, így sejtvonalonként 10 minta fagyasztásáig tartanak időt. Minden kísérletet hasonló, 6-tól 25-ig terjedő passzálási számmal rendelkező sejteken végeznek, hogy elkerüljék az öregedés miatti műtermékeket.
Az egyes vonalak sejtnövekedését az IncuCyte ZOOM® rendszerrel (Essen Biosciences), egy sejtinkubátorban elhelyezett mikroszkóp portálral és egy hálózatba kapcsolt külső vezérlő merevlemezével, amely képadatokat gyűjt és dolgoz fel. A sejtnövekedést a rendszer minden időpontban automatikusan kiszámítja a relatív sejtsűrűség (az elfoglalt terület és a megszerzett régiók összterületének aránya) felhasználásával.
A fibroblasztok légzési paramétereit nagyfelbontású oxigráffal (OROBOROS) pontosan követjük. A mitokondriális légzőlánc egyes komplexeinek enzimaktivitását spektrometriával mérjük, a mitokondriális membránpotenciált pedig fluoreszcens mikroszkóppal (TMRM szonda) vizsgáljuk. A kutatók a mitokondriális dinamikát és a mitokondriális hálózat felépítését is tanulmányozzák majd fluoreszcens mikroszkóppal és szuperfelbontású mikroszkóppal (SRM, Roper). A szabad gyökök termelését oxidatív stresszre érzékeny szondákkal becsülik meg. Végül egy metabolomikus vizsgálatot (tömegspektrometriás QTRAP LC/MS/MS 5500 ABSciex) végeznek a sejtekben lévő metabolitok pontos jellemzésére és metabolikus profiljuk felmérésére.
A kutatók fehérjezárványokat (intermedier filamentumok, TDP43, FUS, ubiquitin) immunfluoreszcens technikával keresnek. Western-blot-vizsgálatot végeznek a fehérje-anyagcsere tanulmányozására. A citoszkeleton felépítését SRM-ben és fluoreszcens mikroszkóppal elemezzük, és a kutatók fibroblasztok transzfektálásával próbálkoznak neurofilamentumok expresszálására, valamint a citoszkeletonra és a fehérje anyagcserére gyakorolt következmények tanulmányozására.
A kutatók a sejtek stresszre (hipoxia SCI-tive Dual, éhezés) és öregedésre (nagy passzázs) adott válaszát vizsgálják.
Tanulmány típusa
Beiratkozás (Várható)
Fázis
- 1. korai fázis
Részvételi kritériumok
Jogosultsági kritériumok
Tanulmányozható életkorok
Egészséges önkénteseket fogad
Tanulmányozható nemek
Leírás
Bevételi kritériumok:
- szabadon aláírt írásbeli hozzájárulás
- 18 és 80 év közöttiek
- Az El Escorial Criteria által meghatározott ALS
- normál neurológiai vizsgálat
Kizárási kritériumok:
- komorbiditás vagy olyan kezelés, amely hajlamos az anyagcserére
- differenciáldiagnózis gyanúja, korai és késői formák (<6 hónap > 3 év)
- Az ALS-t az El Escorial Criteria nem határozza meg
- részvételi hozzájárulás visszavonása
Tanulási terv
Hogyan készül a tanulmány?
Tervezési részletek
- Elsődleges cél: Alapvető tudomány
- Kiosztás: Nem véletlenszerű
- Beavatkozó modell: Párhuzamos hozzárendelés
- Maszkolás: Nincs (Open Label)
Fegyverek és beavatkozások
Résztvevő csoport / kar |
Beavatkozás / kezelés |
|---|---|
|
Egyéb: Betegek
Az El Escorial Criteria által meghatározott ALS.
|
|
|
Egyéb: Vezérlők
Tünetmentes alanyok normál vizsgálattal.
|
Mit mér a tanulmány?
Elsődleges eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
A fibroblasztok növekedésének kinetikája
Időkeret: 24 óra
|
A fibroblaszt vonalak növekedési üteme
|
24 óra
|
Másodlagos eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
Mitokondriális anyagcsere
Időkeret: 24 óra
|
a fibroblasztok légzési paramétereit pontosan tanulmányozzák oxigráfiával, amely módszer a fibroblasztok oxigénfogyasztási arányának mérése a különböző metabolikus fázisokban
|
24 óra
|
|
Protéikus anyagcsere
Időkeret: 24 óra
|
Keresni fogjuk a célfehérje intracitoplazmatikus zárványának jelenlétét.
|
24 óra
|
|
stressz az öregedés válaszában
Időkeret: 24 óra
|
A válasz a sejtvonalak stressze miatti hipoxiában és táplálékhiányban.
|
24 óra
|
Együttműködők és nyomozók
Szponzor
Tanulmányi rekorddátumok
Tanulmány főbb dátumok
Tanulmány kezdete
Elsődleges befejezés (Várható)
A tanulmány befejezése (Várható)
Tanulmányi regisztráció dátumai
Először benyújtva
Először nyújtották be, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Első közzététel (Becslés)
Tanulmányi rekordok frissítései
Utolsó frissítés közzétéve (Becslés)
Az utolsó frissítés elküldve, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Utolsó ellenőrzés
Több információ
A tanulmányhoz kapcsolódó kifejezések
További vonatkozó MeSH feltételek
Egyéb vizsgálati azonosító számok
- 2016/36
Ezt az információt közvetlenül a clinicaltrials.gov webhelyről szereztük be, változtatás nélkül. Ha bármilyen kérése van vizsgálati adatainak módosítására, eltávolítására vagy frissítésére, kérjük, írjon a következő címre: register@clinicaltrials.gov. Amint a változás bevezetésre kerül a clinicaltrials.gov oldalon, ez a webhelyünkön is automatikusan frissül. .
Klinikai vizsgálatok a Bőr biopszia
-
M.D. Anderson Cancer CenterNational Cancer Institute (NCI); PfizerMegszűntKrónikus fázis Krónikus mielogén leukémia, BCR-ABL1 pozitív | Blasts Under 15 Percent of Bone Marrow Nucleated Cells | Blasts Under 15 Percent of Peripheral Blood White Cells | Blasts Under 30 Percent of Bone Marrow Nucleated Cells | Blasts Under 30 Percent of Peripheral Blood White CellsEgyesült Államok
-
Massachusetts General HospitalPfizer; Dana-Farber Cancer Institute; Brigham and Women's HospitalBefejezve
-
China Medical University HospitalMinistry of Science and Technology, TaiwanAktív, nem toborzó
-
Wyeth is now a wholly owned subsidiary of PfizerBefejezve
-
Wyeth is now a wholly owned subsidiary of PfizerBefejezveEgészséges alanyokEgyesült Államok
-
Wyeth is now a wholly owned subsidiary of PfizerBefejezve
-
Aquyre Bioscience, IncBoston University; Fox Chase Cancer Center; Johnson & JohnsonToborzás
-
Oscotec Inc.Aktív, nem toborzóElőrehaladott szilárd daganatKoreai Köztársaság
-
Oscotec Inc.BefejezveEgészséges önkéntesekEgyesült Államok
-
PfizerBefejezvePhiladelphia kromoszóma-pozitív (Ph+) krónikus mieloid leukémia (CML)Szingapúr