Bioenergetika a metabolismus bílkovin u sporadické amyotrofické laterální sklerózy (Fibro-ALS)
ÚVOD: Amyotrofická laterální skleróza (ALS) je degenerativní onemocnění motorických neuronů mozku a míchy. Patofyziologické mechanismy onemocnění zůstávají neznámé. Průměrný věk nástupu ALS je asi 60 let a průměrné přežití pacientů je asi 2 roky. Onemocnění je zodpovědné za progresivní paralýzu vedoucí ke smrti na respirační selhání. Jedinou dostupnou léčbou je Riluzol s velmi mírnou účinností na progresi onemocnění. ALS je třetí neurodegenerativní onemocnění, které postihuje 6000 osob ve Francii, 150 000 ve světě. Mezi protagonisty, kteří se podílejí na výskytu onemocnění, se zdají být centrálními prvky mitochondriální poruchy a akumulace proteinů.
CÍLE: Upřesnit důsledky energetického a proteinového metabolismu u sporadických forem ALS, identifikovat potenciální biomarkery onemocnění a otestovat nové terapie.
METODY: Výzkumníci budou studovat buněčný růst, bioenergetiku, mitochondriální dynamiku, produkci volných radikálů, přítomnost cytoplazmatických inkluzí, strukturu cytoskeletu a stresovou odpověď v primárních kožních fibroblastech získaných od sporadických pacientů s ALS. Studie bude probíhat po dobu tří let ve 3 centrech specializovaných na onemocnění motorických neuronů, mitochondriální metabolismus a neuronální cytoskelet.
VYHLÍDKY: Pokud se výzkumníkům podaří identifikovat rozdíly mezi fibroblasty ALS a kontrolami, výsledky budou klíčovými prvky pro posílení hypotézy systémového onemocnění s důležitou metabolickou účastí, pro lepší definici patofyziologických mechanismů ALS, pro nalezení potenciálních biomarkerů a pro testování nových terapie.
Přehled studie
Postavení
Intervence / Léčba
Detailní popis
Výzkumníci budou studovat fibroblasty odvozené od sporadických pacientů s ALS.
Budou shromažďovány klinické parametry, jako je pohlaví, věk, věk nástupu, klinický obraz, elektrofyziologické a respirační parametry, léčba.
Fibroblasty odvozené od pacientů a kontrol budou amplifikovány a kultivovány z kožních biopsií.
Primární fibroblastové buněčné kultury budou odvozeny z kožních biopsií získaných od kontrolních subjektů a od pacientů po získání písemného souhlasu. Amplifikace se provedou od pasáže 1 do 6, což umožní kryokonzervaci buněk 10 vzorků na buněčnou linii. Všechny experimenty budou prováděny na buňkách s podobným počtem pasáží, v rozmezí od 6 do 25, aby se zabránilo artefaktům v důsledku stárnutí.
Buněčný růst každé linie bude monitorován systémem IncuCyte ZOOM® (Essen Biosciences), portálem mikroskopu, který je umístěn v buněčném inkubátoru, a síťovým externím řadičem pevného disku, který shromažďuje a zpracovává obrazová data. Buněčný růst bude automaticky vypočítán v každém časovém bodě pomocí relativní hustoty buněk (poměr obsazené plochy k celkové ploše získaných oblastí).
Dýchací parametry fibroblastů budou přesně monitorovány oxygrafem s vysokým rozlišením (OROBOROS). Enzymatická aktivita každého komplexu mitochondriálního dýchacího řetězce bude měřena spektrometrií a mitochondriální membránový potenciál bude studován fluorescenční mikroskopií (TMRM sonda). Výzkumníci budou také studovat mitochondriální dynamiku a architekturu mitochondriální sítě pomocí fluorescenční mikroskopie a mikroskopie s vysokým rozlišením (SRM, Roper). Produkce volných radikálů bude odhadnuta pomocí sond citlivých na oxidační stres. Nakonec bude provedena metabolomická studie (hmotnostní spektrometrie QTRAP LC/MS/MS 5500 ABSciex), aby bylo možné přesně charakterizovat metabolity v buňkách a posoudit jejich metabolický profil.
Výzkumníci budou hledat proteinové inkluze (intermediární filamenta, TDP43, FUS, ubikvitin) pomocí imunofluorescenční techniky. Pro studium metabolismu proteinů budou provedeny Western bloty. Architektura cytoskeletu bude analyzována v SRM a fluorescenční mikroskopii a výzkumníci se pokusí transfekovat fibroblasty za účelem exprese neurofilament a studovat důsledky na cytoskelet a metabolismus proteinů.
Výzkumníci budou studovat reakci buněk na stres (hypoxie SCI-tive Dual, hladovění) a na stárnutí (vysoký počet pasáží).
Typ studie
Zápis (Očekávaný)
Fáze
- Raná fáze 1
Kritéria účasti
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
Přijímá zdravé dobrovolníky
Pohlaví způsobilá ke studiu
Popis
Kritéria pro zařazení :
- svobodný podepsal písemný souhlas
- ve věku od 18 do 80 let
- ALS definované podle El Escorial Criteria
- normální neurologické vyšetření
Kritéria vyloučení:
- komorbidita nebo léčba náchylná k ovlivnění metabolismu
- diferenciální diagnóza suspektní, časné a pozdní formy (<6 měsíců > 3 roky)
- ALS není definována kritérii El Escorial
- odvolání souhlasu s účastí
Studijní plán
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
- Primární účel: Základní věda
- Přidělení: Nerandomizované
- Intervenční model: Paralelní přiřazení
- Maskování: Žádné (otevřený štítek)
Zbraně a zásahy
Skupina účastníků / Arm |
Intervence / Léčba |
|---|---|
|
Jiný: Pacienti
ALS definované podle El Escorial Criteria.
|
|
|
Jiný: Řízení
Asymptomatičtí jedinci s normálním vyšetřením.
|
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Kinetika růstu fibroblastů
Časové okno: 24 hodin
|
Rychlosti růstu fibroblastových linií
|
24 hodin
|
Sekundární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Mitochondriální metabolismus
Časové okno: 24 hodin
|
dechové parametry fibroblastů budou přesně studovány oxygrafií, metodou spočívající v měření spotřeby kyslíku fibroblasty v různých metabolických fázích
|
24 hodin
|
|
Proteický metabolismus
Časové okno: 24 hodin
|
Bude se hledat přítomnost intracytoplazmatického začlenění cílového proteinu.
|
24 hodin
|
|
stres v senescenci odpověď
Časové okno: 24 hodin
|
bude studována odpověď způsobená stresem buněčných linií při hypoxii a nutričním nedostatku.
|
24 hodin
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Sponzor
Termíny studijních záznamů
Hlavní termíny studia
Začátek studia
Primární dokončení (Očekávaný)
Dokončení studie (Očekávaný)
Termíny zápisu do studia
První předloženo
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
První zveřejněno (Odhad)
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (Odhad)
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
Naposledy ověřeno
Více informací
Termíny související s touto studií
Další relevantní podmínky MeSH
Další identifikační čísla studie
- 2016/36
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .
Klinické studie na Biopsie kůže
-
University of New MexicoDokončenoVariabilita srdeční frekvence | Předčasně narozené dítěSpojené státy
-
Istanbul University - Cerrahpasa (IUC)DokončenoBolest | Venipunkce | DotekKrocan
-
Children's Hospital of Fudan UniversityDokončeno
-
Northwestern UniversityDokončeno
-
Kerecis Ltd.Zatím nenabírámeChirurgická rána | Diabetický vřed na nohou | Žilní bércový vřed | Dekubity | Rány | Vyztužení měkkých tkání
-
Massachusetts General HospitalZápis na pozvánkuKožní léze | Pigmentované léze | Pigmentovaná kožní léze | Pigmentované krtkySpojené státy
-
Pusan National University Yangsan HospitalDokončeno
-
Mayo ClinicNáborGastrostomieSpojené státy
-
Ace Cells Lab LimitedNeznámýPsoriáza | Atopická dermatitida | Chronický ekzémSrbsko, Spojené království
-
University of California, IrvineBeckman Laser Institute University of California IrvineStaženoMelanocytární nevusSpojené státy