- ICH GCP
- US-Register für klinische Studien
- Klinische Studie NCT02969759
Bioenergetik und Proteinstoffwechsel bei sporadischer amyotropher Lateralsklerose (Fibro-ALS)
EINFÜHRUNG: Amyotrophe Lateralsklerose (ALS) ist eine degenerative Erkrankung der Motoneuronen des Gehirns und des Rückenmarks. Die pathophysiologischen Mechanismen der Erkrankung sind noch unbekannt. Das durchschnittliche Erkrankungsalter von ALS liegt bei etwa 60 Jahren und die mittlere Überlebenszeit der Patienten bei etwa 2 Jahren. Die Krankheit ist für eine fortschreitende Lähmung verantwortlich, die zum Tod durch Atemversagen führt. Die einzige verfügbare Behandlung ist Riluzol mit einer sehr bescheidenen Wirksamkeit auf das Fortschreiten der Krankheit. ALS ist die dritte neurodegenerative Erkrankung, von der 6000 Personen in Frankreich und 150 000 in der Welt betroffen sind. Unter den am Krankheitsgeschehen beteiligten Protagonisten scheinen mitochondriale Störungen und Proteinansammlungen zentrale Elemente zu sein.
ZIELE: Präzisierung der Auswirkungen des Energie- und Proteinstoffwechsels auf die sporadischen Formen von ALS, Identifizierung potenzieller Biomarker der Krankheit und Erprobung neuer Therapien.
METHODEN: Die Forscher werden Zellwachstum, Bioenergetik, mitochondriale Dynamik, Produktion freier Radikale, Anwesenheit von zytoplasmatischen Einschlüssen, Struktur des Zytoskeletts und Stressreaktion in primären Hautfibroblasten von sporadischen ALS-Patienten untersuchen. Die Studie wird über einen Zeitraum von drei Jahren in 3 Zentren durchgeführt, die jeweils auf Motoneuronerkrankungen, mitochondrialen Stoffwechsel und neuronales Zytoskelett spezialisiert sind.
AUSSICHTEN: Wenn es den Forschern gelingt, Unterschiede zwischen ALS-Fibroblasten und Kontrollen zu identifizieren, werden die Ergebnisse Schlüsselelemente sein, um die Hypothese einer systemischen Erkrankung mit einer wichtigen metabolischen Beteiligung zu untermauern, die pathophysiologischen Mechanismen von ALS besser zu definieren, potenzielle Biomarker zu finden und neue zu testen Therapien.
Studienübersicht
Status
Bedingungen
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
Die Forscher werden Fibroblasten untersuchen, die von Patienten mit sporadischer ALS stammen.
Klinische Parameter werden erhoben, wie Geschlecht, Alter, Erkrankungsalter, klinische Präsentation, elektrophysiologische und respiratorische Parameter, Behandlungen.
Von Patienten und Kontrollen stammende Fibroblasten werden amplifiziert und aus Hautbiopsien kultiviert.
Primäre Fibroblasten-Zellkulturen werden aus Hautbiopsien gewonnen, die von Kontrollpersonen und von den Patienten nach schriftlicher Zustimmung erhalten wurden. Amplifikationen werden von Passage 1 bis 6 durchgeführt, was die Zeit für die Kryokonservierung der Zellen von 10 Proben pro Zelllinie ermöglicht. Alle Experimente werden an Zellen mit ähnlichen Passagenzahlen durchgeführt, die von 6 bis 25 reichen, um Artefakte aufgrund von Alterung zu vermeiden.
Das Zellwachstum jeder Linie wird mit dem IncuCyte ZOOM®-System (Essen Biosciences), einer Mikroskop-Gantry, die sich in einem Zellinkubator befindet, und einer vernetzten externen Controller-Festplatte, die Bilddaten sammelt und verarbeitet, überwacht. Das Zellwachstum wird zu jedem Zeitpunkt automatisch anhand der relativen Zelldichte (Verhältnis der belegten Fläche zur Gesamtfläche der erfassten Regionen) berechnet.
Die Atmungsparameter der Fibroblasten werden mit einem hochauflösenden Oxygraphen (OROBOROS) genau überwacht. Die enzymatische Aktivität jedes Komplexes der mitochondrialen Atmungskette wird spektrometrisch gemessen, und das mitochondriale Membranpotential wird mit Fluoreszenzmikroskopie (TMRM-Sonde) untersucht. Die Forscher werden auch die mitochondriale Dynamik und die Architektur des mitochondrialen Netzwerks mit Fluoreszenzmikroskopie und hochauflösender Mikroskopie (SRM, Roper) untersuchen. Die Produktion freier Radikale wird mit Sonden abgeschätzt, die für oxidativen Stress empfindlich sind. Schließlich wird eine metabolomische Studie (Massenspektrometrie QTRAP LC/MS/MS 5500 ABSciex) durchgeführt, um die Metaboliten in den Zellen genau zu charakterisieren und ihr metabolisches Profil zu bewerten.
Die Forscher werden mit Immunfluoreszenztechniken nach Proteineinschlüssen (Zwischenfilamente, TDP43, FUS, Ubiquitin) suchen. Zur Untersuchung des Proteinstoffwechsels werden Western Blots durchgeführt. Die Architektur des Zytoskeletts wird in SRM und Fluoreszenzmikroskopie analysiert, und die Forscher werden versuchen, Fibroblasten zu transfizieren, um Neurofilamente zu exprimieren, und die Auswirkungen auf das Zytoskelett und den Proteinstoffwechsel untersuchen.
Die Forscher werden die Reaktion der Zellen auf Stress (Hypoxie SCI-tive Dual, Hunger) und auf Seneszenz (hohe Passagezahlen) untersuchen.
Studientyp
Einschreibung (Voraussichtlich)
Phase
- Frühphase 1
Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Studienberechtigte Geschlechter
Beschreibung
Einschlusskriterien :
- eine kostenlose unterschriebene schriftliche Einverständniserklärung
- im Alter zwischen 18 und 80 Jahren
- ALS definiert durch El Escorial Criteria
- normale neurologische Untersuchung
Ausschlusskriterien:
- Komorbidität oder Behandlung, die Auswirkungen auf den Stoffwechsel haben kann
- Differentialdiagnose Verdacht, frühe und späte Formen (< 6 Monate > 3 Jahre)
- ALS nicht durch El Escorial Criteria definiert
- Widerruf der Einwilligung zur Teilnahme
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
- Hauptzweck: Grundlegende Wissenschaft
- Zuteilung: Nicht randomisiert
- Interventionsmodell: Parallele Zuordnung
- Maskierung: Keine (Offenes Etikett)
Waffen und Interventionen
Teilnehmergruppe / Arm |
Intervention / Behandlung |
---|---|
Sonstiges: Patienten
ALS definiert durch El Escorial Criteria.
|
|
Sonstiges: Kontrollen
Asymptomatische Probanden mit normaler Untersuchung.
|
Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
---|---|---|
Kinetik des Fibroblastenwachstums
Zeitfenster: 24 Stunden
|
Die Wachstumsraten der Fibroblastenlinien
|
24 Stunden
|
Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
---|---|---|
Mitochondrialer Stoffwechsel
Zeitfenster: 24 Stunden
|
Die Atemparameter von Fibroblasten werden durch Oxygraphie genau untersucht, eine Methode, die darin besteht, die Sauerstoffverbrauchsraten von Fibroblasten in verschiedenen Stoffwechselphasen zu messen
|
24 Stunden
|
Eiweißstoffwechsel
Zeitfenster: 24 Stunden
|
Es wird nach dem Vorhandensein eines intrazytoplasmatischen Einschlusses des Zielproteins gesucht.
|
24 Stunden
|
Stress im Alter Antwort
Zeitfenster: 24 Stunden
|
Die Antwort aufgrund des Stresses von Zelllinien bei Hypoxie und Ernährungsmangel wird untersucht.
|
24 Stunden
|
Mitarbeiter und Ermittler
Sponsor
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn
Primärer Abschluss (Voraussichtlich)
Studienabschluss (Voraussichtlich)
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (Schätzen)
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (Schätzen)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Schlüsselwörter
Zusätzliche relevante MeSH-Bedingungen
- Pathologische Prozesse
- Stoffwechselerkrankungen
- Erkrankungen des zentralen Nervensystems
- Erkrankungen des Nervensystems
- Neuromuskuläre Erkrankungen
- Neurodegenerative Krankheiten
- Erkrankungen des Rückenmarks
- TDP-43 Proteinopathien
- Proteostase-Mängel
- Sklerose
- Motoneuron-Krankheit
- Amyotrophe Lateralsklerose
Andere Studien-ID-Nummern
- 2016/36
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