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Bioenergetik und Proteinstoffwechsel bei sporadischer amyotropher Lateralsklerose (Fibro-ALS)

22. November 2016 aktualisiert von: University Hospital, Angers

EINFÜHRUNG: Amyotrophe Lateralsklerose (ALS) ist eine degenerative Erkrankung der Motoneuronen des Gehirns und des Rückenmarks. Die pathophysiologischen Mechanismen der Erkrankung sind noch unbekannt. Das durchschnittliche Erkrankungsalter von ALS liegt bei etwa 60 Jahren und die mittlere Überlebenszeit der Patienten bei etwa 2 Jahren. Die Krankheit ist für eine fortschreitende Lähmung verantwortlich, die zum Tod durch Atemversagen führt. Die einzige verfügbare Behandlung ist Riluzol mit einer sehr bescheidenen Wirksamkeit auf das Fortschreiten der Krankheit. ALS ist die dritte neurodegenerative Erkrankung, von der 6000 Personen in Frankreich und 150 000 in der Welt betroffen sind. Unter den am Krankheitsgeschehen beteiligten Protagonisten scheinen mitochondriale Störungen und Proteinansammlungen zentrale Elemente zu sein.

ZIELE: Präzisierung der Auswirkungen des Energie- und Proteinstoffwechsels auf die sporadischen Formen von ALS, Identifizierung potenzieller Biomarker der Krankheit und Erprobung neuer Therapien.

METHODEN: Die Forscher werden Zellwachstum, Bioenergetik, mitochondriale Dynamik, Produktion freier Radikale, Anwesenheit von zytoplasmatischen Einschlüssen, Struktur des Zytoskeletts und Stressreaktion in primären Hautfibroblasten von sporadischen ALS-Patienten untersuchen. Die Studie wird über einen Zeitraum von drei Jahren in 3 Zentren durchgeführt, die jeweils auf Motoneuronerkrankungen, mitochondrialen Stoffwechsel und neuronales Zytoskelett spezialisiert sind.

AUSSICHTEN: Wenn es den Forschern gelingt, Unterschiede zwischen ALS-Fibroblasten und Kontrollen zu identifizieren, werden die Ergebnisse Schlüsselelemente sein, um die Hypothese einer systemischen Erkrankung mit einer wichtigen metabolischen Beteiligung zu untermauern, die pathophysiologischen Mechanismen von ALS besser zu definieren, potenzielle Biomarker zu finden und neue zu testen Therapien.

Studienübersicht

Status

Unbekannt

Intervention / Behandlung

Detaillierte Beschreibung

Die Forscher werden Fibroblasten untersuchen, die von Patienten mit sporadischer ALS stammen.

Klinische Parameter werden erhoben, wie Geschlecht, Alter, Erkrankungsalter, klinische Präsentation, elektrophysiologische und respiratorische Parameter, Behandlungen.

Von Patienten und Kontrollen stammende Fibroblasten werden amplifiziert und aus Hautbiopsien kultiviert.

Primäre Fibroblasten-Zellkulturen werden aus Hautbiopsien gewonnen, die von Kontrollpersonen und von den Patienten nach schriftlicher Zustimmung erhalten wurden. Amplifikationen werden von Passage 1 bis 6 durchgeführt, was die Zeit für die Kryokonservierung der Zellen von 10 Proben pro Zelllinie ermöglicht. Alle Experimente werden an Zellen mit ähnlichen Passagenzahlen durchgeführt, die von 6 bis 25 reichen, um Artefakte aufgrund von Alterung zu vermeiden.

Das Zellwachstum jeder Linie wird mit dem IncuCyte ZOOM®-System (Essen Biosciences), einer Mikroskop-Gantry, die sich in einem Zellinkubator befindet, und einer vernetzten externen Controller-Festplatte, die Bilddaten sammelt und verarbeitet, überwacht. Das Zellwachstum wird zu jedem Zeitpunkt automatisch anhand der relativen Zelldichte (Verhältnis der belegten Fläche zur Gesamtfläche der erfassten Regionen) berechnet.

Die Atmungsparameter der Fibroblasten werden mit einem hochauflösenden Oxygraphen (OROBOROS) genau überwacht. Die enzymatische Aktivität jedes Komplexes der mitochondrialen Atmungskette wird spektrometrisch gemessen, und das mitochondriale Membranpotential wird mit Fluoreszenzmikroskopie (TMRM-Sonde) untersucht. Die Forscher werden auch die mitochondriale Dynamik und die Architektur des mitochondrialen Netzwerks mit Fluoreszenzmikroskopie und hochauflösender Mikroskopie (SRM, Roper) untersuchen. Die Produktion freier Radikale wird mit Sonden abgeschätzt, die für oxidativen Stress empfindlich sind. Schließlich wird eine metabolomische Studie (Massenspektrometrie QTRAP LC/MS/MS 5500 ABSciex) durchgeführt, um die Metaboliten in den Zellen genau zu charakterisieren und ihr metabolisches Profil zu bewerten.

Die Forscher werden mit Immunfluoreszenztechniken nach Proteineinschlüssen (Zwischenfilamente, TDP43, FUS, Ubiquitin) suchen. Zur Untersuchung des Proteinstoffwechsels werden Western Blots durchgeführt. Die Architektur des Zytoskeletts wird in SRM und Fluoreszenzmikroskopie analysiert, und die Forscher werden versuchen, Fibroblasten zu transfizieren, um Neurofilamente zu exprimieren, und die Auswirkungen auf das Zytoskelett und den Proteinstoffwechsel untersuchen.

Die Forscher werden die Reaktion der Zellen auf Stress (Hypoxie SCI-tive Dual, Hunger) und auf Seneszenz (hohe Passagezahlen) untersuchen.

Studientyp

Interventionell

Einschreibung (Voraussichtlich)

30

Phase

  • Frühphase 1

Teilnahmekriterien

Forscher suchen nach Personen, die einer bestimmten Beschreibung entsprechen, die als Auswahlkriterien bezeichnet werden. Einige Beispiele für diese Kriterien sind der allgemeine Gesundheitszustand einer Person oder frühere Behandlungen.

Zulassungskriterien

Studienberechtigtes Alter

18 Jahre bis 80 Jahre (Erwachsene, Älterer Erwachsener)

Akzeptiert gesunde Freiwillige

Ja

Studienberechtigte Geschlechter

Alle

Beschreibung

Einschlusskriterien :

  • eine kostenlose unterschriebene schriftliche Einverständniserklärung
  • im Alter zwischen 18 und 80 Jahren
  • ALS definiert durch El Escorial Criteria
  • normale neurologische Untersuchung

Ausschlusskriterien:

  • Komorbidität oder Behandlung, die Auswirkungen auf den Stoffwechsel haben kann
  • Differentialdiagnose Verdacht, frühe und späte Formen (< 6 Monate > 3 Jahre)
  • ALS nicht durch El Escorial Criteria definiert
  • Widerruf der Einwilligung zur Teilnahme

Studienplan

Dieser Abschnitt enthält Einzelheiten zum Studienplan, einschließlich des Studiendesigns und der Messung der Studieninhalte.

Wie ist die Studie aufgebaut?

Designdetails

  • Hauptzweck: Grundlegende Wissenschaft
  • Zuteilung: Nicht randomisiert
  • Interventionsmodell: Parallele Zuordnung
  • Maskierung: Keine (Offenes Etikett)

Waffen und Interventionen

Teilnehmergruppe / Arm
Intervention / Behandlung
Sonstiges: Patienten
ALS definiert durch El Escorial Criteria.
Sonstiges: Kontrollen
Asymptomatische Probanden mit normaler Untersuchung.

Was misst die Studie?

Primäre Ergebnismessungen

Ergebnis Maßnahme
Maßnahmenbeschreibung
Zeitfenster
Kinetik des Fibroblastenwachstums
Zeitfenster: 24 Stunden
Die Wachstumsraten der Fibroblastenlinien
24 Stunden

Sekundäre Ergebnismessungen

Ergebnis Maßnahme
Maßnahmenbeschreibung
Zeitfenster
Mitochondrialer Stoffwechsel
Zeitfenster: 24 Stunden
Die Atemparameter von Fibroblasten werden durch Oxygraphie genau untersucht, eine Methode, die darin besteht, die Sauerstoffverbrauchsraten von Fibroblasten in verschiedenen Stoffwechselphasen zu messen
24 Stunden
Eiweißstoffwechsel
Zeitfenster: 24 Stunden
Es wird nach dem Vorhandensein eines intrazytoplasmatischen Einschlusses des Zielproteins gesucht.
24 Stunden
Stress im Alter Antwort
Zeitfenster: 24 Stunden
Die Antwort aufgrund des Stresses von Zelllinien bei Hypoxie und Ernährungsmangel wird untersucht.
24 Stunden

Mitarbeiter und Ermittler

Hier finden Sie Personen und Organisationen, die an dieser Studie beteiligt sind.

Studienaufzeichnungsdaten

Diese Daten verfolgen den Fortschritt der Übermittlung von Studienaufzeichnungen und zusammenfassenden Ergebnissen an ClinicalTrials.gov. Studienaufzeichnungen und gemeldete Ergebnisse werden von der National Library of Medicine (NLM) überprüft, um sicherzustellen, dass sie bestimmten Qualitätskontrollstandards entsprechen, bevor sie auf der öffentlichen Website veröffentlicht werden.

Haupttermine studieren

Studienbeginn

1. November 2016

Primärer Abschluss (Voraussichtlich)

1. November 2017

Studienabschluss (Voraussichtlich)

1. November 2019

Studienanmeldedaten

Zuerst eingereicht

4. November 2016

Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat

17. November 2016

Zuerst gepostet (Schätzen)

21. November 2016

Studienaufzeichnungsaktualisierungen

Letztes Update gepostet (Schätzen)

23. November 2016

Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt

22. November 2016

Zuletzt verifiziert

1. November 2016

Mehr Informationen

Diese Informationen wurden ohne Änderungen direkt von der Website clinicaltrials.gov abgerufen. Wenn Sie Ihre Studiendaten ändern, entfernen oder aktualisieren möchten, wenden Sie sich bitte an register@clinicaltrials.gov. Sobald eine Änderung auf clinicaltrials.gov implementiert wird, wird diese automatisch auch auf unserer Website aktualisiert .

Klinische Studien zur Hautbiopsie

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